灵芝糖蛋白与人源蛋白RANKL胞外结构域的相互作用

采用酶辅助超声提取法,利用DEAE-Sephadex A25离子层析分离得到一种天然灵芝糖蛋白GP2。经SDS-PAGE检测,以高碘酸希夫试剂染色得到单一条带,说明此组分为单一糖蛋白,红外检测分析证实此组分(GP2)为糖蛋白。荧光检测结果表明,此糖蛋白导致人源RANKL胞外结构域(eRANKL)内源荧光减弱,ANS荧光增强,推测此组分可能会使该蛋白构象发生改变。

人RANKL胞外结构域原核表达载体的构建及表达条件优化

细胞核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of the NF-κB ligand,RANKL)是TNF超家族的重要成员之一,属于Ⅱ型跨膜蛋白,通过与其受体核因子κB受体活化因子(RANK)构建的信号通路参与乳腺癌的发生、肿瘤骨转移、骨质疏松、关节炎等病理过程。人RANKL胞外结构域基因片段与原核表达载体pET-21b融合并转化至表达菌Rosetta,并对其表达条件进行了优化。通过对诱导时机,诱导温度,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度,诱导时间及甘油浓度的条件优化表明,当IPTG的浓度为0.2 mmol/mL,20℃振荡诱导培养6 h时,甘油浓度为4%时,可在上清中获得高效表达的pET-21bRANKL融合蛋白,为该蛋白的进一步纯化及结构与功能研究打下了良好的基础。