期刊导航
期刊开放获取
河南省图书馆
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式:
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定
被引量:
8
1
作者
李琛
林红
+5 位作者
刘新建
王忠灿
周镇先
陈乐如
管晓虹
朱进
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期575-578,616,共5页
目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为s...
目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。
展开更多
关键词
噬菌体展示
狂犬病毒
人源scfv抗体库
下载PDF
职称材料
人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达
被引量:
2
2
作者
钱尼良
张晶
+6 位作者
高柳村
万德有
冯红茹
刘蕴慧
杨懿
高新
宋海峰
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期638-643,共6页
目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLy S)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达。方法:以哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1%的阳性细胞。从...
目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLy S)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达。方法:以哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1%的阳性细胞。从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库。经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的Sc Fv序列。经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 Sc Fv抗体蛋白并通过Fortie Bio Octet QK进行亲和力分析。结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLy S Sc Fv抗体序列,成功构建并表达了anti-Bly S Sc Fv抗体蛋白,该单链抗体与的BLy S亲和常数为3.08 nmol·L-1。结论:从哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库中成功获得了可结合BLy S的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLy S具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础。
展开更多
关键词
B细胞
B细胞刺激因子
哺乳动物细胞展示型
人源scfv抗体库
单链
抗体
原文传递
题名
人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定
被引量:
8
1
作者
李琛
林红
刘新建
王忠灿
周镇先
陈乐如
管晓虹
朱进
机构
南京医科大学病理学系卫生部抗体技术重点实验室
南京军区军事医学研究所
南京市第二医院检验科
出处
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期575-578,616,共5页
基金
国家"863"资助项目(2007AA02Z418)
南京军区"122"工程资助
文摘
目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。
关键词
噬菌体展示
狂犬病毒
人源scfv抗体库
Keywords
phages display
rabies virus
human
scfv
antibody library
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达
被引量:
2
2
作者
钱尼良
张晶
高柳村
万德有
冯红茹
刘蕴慧
杨懿
高新
宋海峰
机构
安徽医科大学
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
出处
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期638-643,共6页
基金
国家自然科学基金(81272701)
文摘
目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLy S)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达。方法:以哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1%的阳性细胞。从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库。经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的Sc Fv序列。经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 Sc Fv抗体蛋白并通过Fortie Bio Octet QK进行亲和力分析。结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLy S Sc Fv抗体序列,成功构建并表达了anti-Bly S Sc Fv抗体蛋白,该单链抗体与的BLy S亲和常数为3.08 nmol·L-1。结论:从哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库中成功获得了可结合BLy S的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLy S具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础。
关键词
B细胞
B细胞刺激因子
哺乳动物细胞展示型
人源scfv抗体库
单链
抗体
Keywords
B cell
B lymphocyte stimulator
mammalian cell display human
scfv
antibody library
SeFv
分类号
R979.6 [医药卫生—药品]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定
李琛
林红
刘新建
王忠灿
周镇先
陈乐如
管晓虹
朱进
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
8
下载PDF
职称材料
2
人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达
钱尼良
张晶
高柳村
万德有
冯红茹
刘蕴慧
杨懿
高新
宋海峰
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部