独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:肿瘤坏死因子α体外诱导构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,实验分为5组:正常组、模型组、独活寄生汤含药血清组、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡组、生理盐水血清细胞外囊泡组。采用CCK-8法筛选独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳浓度及时间;ELISA检测细胞上清炎症因子水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力及迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;qRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因及蛋白表达。结果与结论:(1)独活寄生汤含药血清作用的最佳体积分数为10%,独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳质量浓度为10 ng/mL,二者作用的最佳时间均为24 h;(2)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均能抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的炎症因子表达(P<0.05)、划痕愈合(P<0.05)、迁移及侵袭(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡的抑制作用更为突出(P<0.05);(3)独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡均可促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡;(4)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均可增加促凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax表达(P<0.05),降低抑凋亡因子Bcl-2表达(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对凋亡相关因子的调节作用更显著。上述实验结果表明独活寄生汤含药血清细胞外囊泡可以抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的过度增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡。

靶向成纤维细胞生长因子受体1信号改善类风湿关节炎的骨破坏

背景:尽管科研人员已注意到成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中展现出巨大潜力,但尚未有学者对成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的研究进展作全面综述。目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的机制。方法:以“成纤维细胞生长因子受体1,类风湿关节炎,骨破坏,骨细胞,成骨细胞,破骨细胞,软骨细胞,巨噬细胞,滑膜成纤维细胞,T细胞,血管内皮细胞”为检索词检索中国知网数据库,以“fibroblast growth factor receptor 1,rheumatoid arthritis,bone destruction,osteocytes,osteoblasts,osteoclasts,chondrocytes,macrophages,synovial fibroblasts,T cells,endothelial cells”为检索词检索PubMed数据库,检索时间范围重点为1992年4月至2024年1月。通过阅读文献题目、摘要及全文,根据纳入与排除标准进行筛选,最后纳入82篇文献进行综述。结果与结论:成纤维细胞生长因子受体1广泛表达于骨组织相关细胞,包括骨细胞、成骨细胞、破骨细胞等,可以通过调控这些细胞的功能来影响骨重塑过程和维持骨稳态,促进类风湿关节炎骨破坏的发生和发展。成纤维细胞生长因子受体1还可以在滑膜成纤维细胞和巨噬细胞中参与炎症反应,在内皮细胞中调控滑膜血管生成,从多个方面促进骨破坏。成纤维细胞生长因子受体1可能是类风湿关节炎骨破坏的一个重要参与因素,为进一步研究类风湿关节炎治疗靶点提供依据。

新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖

目的 研究缺氧在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖中的作用及机制。方法 采用HE染色法检测RA和对照骨关节炎(osteoarthritis,OA)滑膜组织FLS增生情况。分离原代RA-FLS并采用流式细胞术鉴定;将RA-FLS置于常氧(21%O_(2))或缺氧环境(3%O_(2))中培养,CCK-8法检测细胞增殖水平的变化,RT-PCR检测miR-let-7d表达的变化。通过类似物或抑制物改变miR-let-7d的表达,观察其对RA-FLS增殖、凋亡的影响;探究miR-let-7d靶基因在缺氧诱导的RA-FLS增殖中的作用。结果 FLS在RA滑膜中增生明显,在缺氧环境下RA-FLS增殖加快,miR-let-7d表达水平降低;过表达miR-let-7d抑制RA-FLS增殖,但对细胞凋亡水平无明显影响;进一步的研究证实miR-let-7d靶基因HMGA2参与缺氧诱导的RA-FLS增殖。结论 miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的RA-FLS增殖。

低强度脉冲超声通过p38/JNK-白细胞介素-6抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖的研究

目的:探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(fibroblastlike synoviocytes in rheumatoid arthritis,RA-FLS)异常细胞表型的抑制作用及可能机制。方法:酶消化法分离滑膜细胞,显微镜下观察细胞形态,同时用免疫荧光检测Vimentin蛋白表达来鉴定RA-FLS。将细胞进行体外培养并分为4组:对照组、LIPUS组、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)组和TNF-α+LIPUS组或3组:对照组、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)组和IL-6+LIPUS组。CCK8和EDU实验分别检测LIPUS对RA-FLS细胞活性和增殖的作用,划痕实验和Transwell迁移实验观察LIPUS对RA-FLS迁移能力的影响,RT-q PCR检测RA-FLS中重要的细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的基因表达,ELISA进一步检测LIPUS对RA-FLS中关键效应分子IL-6蛋白水平的作用,Western Blot检测LIPUS对RAFLS中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。结果:分离得到较纯净的RA-FLS。在体外培养的RA-FLS中,首先,LIPUS可以抑制TNF-α诱导的细胞活性(P<0.001)和增殖(P=0.007),但它对其迁移及迁移相关MMPs(MMP2和MMP9)转录水平的作用在组间无显著性差异(P>0.05)。在TNF-α诱导的炎性环境下,LIPUS能够抑制IL-6和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)在m RNA水平上的高表达(P<0.001),但其对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、MMP1和MMP13的抑制作用在组间无显著性差异(P>0.05)。与未处理组相比,LIPUS抑制TNF-α诱导的RA-FLS中IL-6的分泌(P<0.001),同时也抑制IL-6诱导的RA-FLS增殖(P=0.003)。LIPUS能够抑制MAPK信号通路中p38 MAPK(P=0.033)的磷酸化和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化(P=0.019),但其对细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinas 1/2,ERK1/2)蛋白的磷酸化则无显著作用(P>0.05)。结论:LIPUS能够减少炎性状态下RA-FLS的异常增殖而不作用于其迁移,该作用可能与p38/JNK-IL-6信号通路的抑制有关。

siRNA沉默锌指蛋白A20基因促进人类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞焦亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默锌指蛋白A20基因对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(HFLS-RA)焦亡的调节作用。方法培养人HFLS-RA细胞系(MH7A细胞),通过RNA干扰技术靶向敲降人类A20基因,合成siRNA-A20,用脂质体法将siRNA-A20(沉默组)和siRNA-NC(阴性对照组)转染MH7A细胞。RT-qPCR检测细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA的表达;Western blot法检测细胞中NLRP3和Caspase-1蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的水平;透射电子显微镜(TEM)检测细胞焦亡。结果siRNA-A20组MH7A细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均显著增高(P<0.01);siRNA-A20组细胞培养上清液中IL-1β、IL-18浓度与对照组相比均显著增高(P<0.01)。与对照组相比,siRNA-A20组部分细胞肿胀和破裂,细胞膜的完整性也丧失,细胞内出现大面积水肿区,细胞核局部核膜凹陷模糊,异染色质固缩增加,分布不均匀并在核膜周围聚集。结论通过siRNA沉默A20表达后可促进HFLS-RA中NLRP3/Caspase-1介导细胞焦亡,为探讨RA临床治疗新方案提供了实验依据。

温阳通络方基于miR-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的机制研究

目的:探讨温阳通络方基于微小RNA(miR)-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的作用。方法:SD大鼠随机分为温阳通络方组和空白血清组。温阳通络方组大鼠给药剂量为4.05 g·kg^(-1)·d^(–1),2次/d,间隔12 h,连续给药3 d,末次给药后1 h腹主动脉取血分离血清;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验筛选温阳通络方含药血清最佳浓度和干预时间;在人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A中分别转染inhibitor NC、miR-26b-3p inhibitor、mimic NC、miR-26b-3p mimic片段,并用温阳通络方含药血清干预,设置正常关节成纤维样滑膜细胞为对照组,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测MH7A细胞中miR-26b-3p的表达;CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭情况。结果:不同浓度温阳通络方含药血清均能上调miR-26b-3p的表达(P<0.05),miR-26b-3p的表达呈浓度依赖性升高。温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。miR-26b-3p过表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05);干扰miR-26b-3p的表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。在干扰miR-26b-3p表达的基础上,温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:温阳通络方通过上调miR-26b-3p的表达抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭。

滑膜成纤维细胞自噬对类风湿关节炎的影响和中医药的干预作用

类风湿性关节炎(RA)属于一类炎症性关节病,可导致多脏器病变,其主要表现为滑膜炎与骨关节受损。本病主要诱因为滑膜成纤维细胞(SFB)丧失稳态,但现今还未明确其中的具体分子机制。自噬在维持细胞稳态从而使细胞适应外界环境中的作用日益凸显,研究发现滑膜成纤维细胞自噬参与其众多表型如增值凋亡以及介导炎症等,该综述将讨论滑膜成纤维细胞自噬在类风湿关节炎发病中的关键作用以及中医药对其影响。

从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。

环状RNA_0032131靶向微小RNA-145-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状RNA_003213(hsa_circ_003213)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响。方法检测RA患者和健康体检者外周血、RA-FLSs、人正常滑膜成纤维细胞中hsa_circ_0032131和miR-145-5p的水平。将RA-FLSs分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa_circ_0032131组、miR-NC组、miR-145-5p组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组、anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组、pcDNA组、pcDNA-hsa_circ_0032131组。采用CCK-8和Transwell法检测RA-FLSs活力、迁移和侵袭数。通过双荧光素酶报告实验确定hsa_circ_0032131与miR-145-5p的靶向关系。结果与健康体检者相比,RA患者外周血中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与人正常滑膜成纤维细胞相比,RA-FLSs中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-145-5p组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组比较,anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0032131组RA-FLSs中miR-145-5p水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-145-5p是hsa_circ_0032131的直接靶点。结论敲低hsa_circ_0032131通过上调miR-145-5p抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

RAP1B对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生物学行为的影响研究

目的探讨RAP1B对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocyte,FLS)增殖、迁移以及炎症因子分泌能力的影响。方法通过构建RAP1B过表达及干扰表达的慢病毒载体,转染至人RA成纤维样滑膜细胞(MH7A),分别采用CCK8法、划痕实验、Transwell-迁移实验及ELISA法,对MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力进行检测。结果RAP1B表达上调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显增强(均P<0.01);RAP1B表达下调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显减弱(均P<0.05)。结论RAP1B具有促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌的能力。

芒果苷抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移及炎性因子的表达

背景:芒果苷是一种从芒果叶、树皮、根中提取的双苯吡酮类化合物,前期研究表明芒果苷可以通过NF-κB、JAK/STAT等转录因子的活化发挥抗全身性炎症作用。目的:探讨芒果苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synovial cells,RA-FLS)增殖、迁移和炎症因子表达的影响及机制。方法:RA-FLS分为空白组、R848(TLR7/8激动剂)刺激组、芒果苷低、中、高浓度组(2,4,8μg/mL)、阳性对照组(Cu-CPT8,TLR8通路抑制剂)。CCK-8法检测不同质量浓度芒果苷对RA-FLS毒性的影响并筛选最终细胞用药质量浓度,细胞克隆形成实验检测RA-FLS的增殖能力,划痕实验及Transwell迁移实验检测RA-FLS的迁移能力,qRT-PCR检测RA-FLS中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论:①与空白组比较,2-10μg/mL的芒果苷干预组对RA-FLS活力有抑制趋势,但差异不显著(P>0.05),说明对RA-FLS的毒性影响很小;②与R848刺激组比较,芒果苷低、中、高浓度组RA-FLS克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数均降低(P<0.01);芒果苷中浓度和高浓度组白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子αmRNA的表达降低(P<0.01);③与R848刺激组比较,阳性对照组细胞克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数以及白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);白细胞介素1βmRNA表达水平无明显差异;④结果表明,芒果苷可能通过TLR7/8信号通路抑制RA-FLS增殖、迁移以及炎症因子表达发挥抗类风湿关节炎的作用。

兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法的研究

目的在传统细胞组织块培养方法的基础上进行改进,建立一种简单、可重复性操作的兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法。方法通过手术诱导建立兔膝骨关节炎模型,在无菌条件下,快速取出兔膝骨关节炎的滑膜组织,经过冲洗处理后剪成一定大小碎片,用无菌滤纸吸净组织上附着的水分,接种在培养皿后,进行观察、换液、传代、拍照。将原代培养的细胞传至第三代细胞接种于96孔板中,采用噻唑蓝(MTT)法分别在不同时间梯度检测各孔对应吸光度,制作生长曲线;采用免疫荧光染色法观察细胞中波形蛋白的表达情况。结果培养的细胞为典型的梭形,符合成纤维样滑膜细胞的生长形态特征,免疫荧光染色显示波形蛋白强表达。结论改进后的组织块培养方法简单、操作可重复性强,可以获得大量兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞,为后续膝骨关节炎的机理研究提供了大量细胞支持。

独活寄生汤对TNF-α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎症的影响

目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、独活寄生汤低(10μg·L^(-1) TNF-α+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、中(10μg·L^(-1) TNF-α+5%含药血清+5%空白血清)、高(10μg·L^(-1) TNF-α+10%含药血清)剂量组共5组;MTT法筛选独活寄生汤含药血清给药浓度;EdU染色检测细胞增殖情况;免疫荧光染色检测增殖标志物Ki67表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的含量;RT-qPCR和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组细胞增殖水平明显上升,凋亡水平明显减弱,IFN-γ和IL-6的含量升高,IL-4和IL-10的含量减少,TLR4/MyD88/NF-κB信号通路被激活;经独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组干预后,均能有效改善细胞异常增殖情况,增强细胞凋亡,抑制炎性反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活。结论独活寄生汤含药血清能够抑制TNF-α诱导的RA-FLS异常增殖和促炎因子的分泌,增强细胞凋亡和抗炎水平,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响

目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。

类风湿性关节炎及骨关节炎患者外周血单个核细胞及滑膜成纤维细胞中白细胞介素27水平增高

目的检测类风湿性关节炎(RA)及骨关节炎(OA)外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜成纤维细胞(FLS)白细胞介素27(IL-27)及其受体的水平。方法收集20例RA、20例OA、20例正常人PBMC和4例RA及4例OA患者滑膜组织,培养FLS,采用实时荧光定量PCR法检测PBMC和FLS中IL-27 mRNA的水平;采用免疫细胞化学法检测RA、OA患者FLS IL-27Rα的表达。结果 RA及OA患者PBMC中IL-27 mRNA水平分别是正常人的1.81倍及2.07倍;RA患者和OA患者PBMC中IL-27mRNA水平无明显差异,但RA患者FLS中IL-27 mRNA是OA患者的3.74倍;RA组FLS的IL-27Rα较OA组水平增高。结论 RA、OA患者IL-27水平增加,且RA患者FLS中IL-27水平高于PBMC。

雷公藤红素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中RANKL、OPG及炎性因子表达的影响

目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法:以白细胞介素-1β(IL-1β)刺激MH7A,不同浓度的Cel(0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L)干预细胞24 h后,采用real-time PCR和免疫荧光的方法检测RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8的表达。结果:IL-1β刺激MH7A细胞系24 h后,RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8mRNA及RANKL免疫荧光明显增强,Cel呈剂量依赖性抑制MH7A中IL-1β诱导的RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8 mRNA水平(P<0.05)和MH7A中RANKL免疫荧光表达,显著上调OPG/RANKL轴比值。结论:Cel能调节滑膜成纤维细胞中OPG/RANKL轴和抑制促炎因子、趋化因子的表达,可能在阻止类风湿关节炎"炎症"和"骨侵蚀"中发挥重要作用。

Lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的Lunasin(0、50、100、200μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、Western blot检测Caspase3、Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达。结果Lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系。结论 Lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关。

滑膜成纤维细胞在关节炎发病中的作用

大量的研究证据显示 ,滑膜成纤维 (synovialfibroblast,SF)是炎症性滑膜炎中组织损伤和基质重塑的直接效应细胞 ;间充质细胞 (mesenchymalcells)以自分泌和旁分泌的机制经细胞因子和趋化因子等效应信号刺激或抑制炎症反应 .滑膜成纤维细胞作为一种重要的间充质细胞是介导关节破坏的主要细胞 (通过分泌金属蛋白酶等途径 ) .有研究显示 ,它们可以通过刺激破骨细胞的生成 (osteoclastogenesis)来促进骨的吸收 .再者 ,它们可以通过释放趋化因子招募白细胞进入关节 ,通过细胞因子刺激血管生成 (angiogenesis) ,在滑膜炎的初始阶段起着重要作用 .滑膜细胞(synoviocyte)通过细胞因子网络在滑膜细胞与白细胞间相互作用及细胞 细胞的接触驱动滑膜细胞的活化 ,对它们精细相互作用的研究将有助于明确引起滑膜炎症的启动和维持 ( perpetuation)的复杂相互作用 .

断藤益母汤含药血清对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及TLR4表达的影响

目的探讨断藤益母汤（DYD）含药血清对体外培养的类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞（fibrolast-like synoviocytes，FLS）增殖以及TLR4（Toll like receptor 4）mRNA表达的影响和作用机制。方法体外培养RA-FLS，取第3-5代细胞，分别加入来氟米特和DYD高、中、低剂量家兔含药血清，空白组加入正常家兔血清，Mrrr法检测24h、48h、72h后各组合药血清对RA-FLS的影响。取RA-FLS，空白组不加脂多糖（LPS），阳性对照组加LPS20Ixg·mL-1，实验组在加入LPS后分两组，分别加入来氟米特和细胞抑制率最高的DYD含药血清。Reahime-PCR法检测以上4组细胞TLR4mRNA的表达。结果来氟米特和DYD高剂量组合药血清作用48h、72h，二者均能显著抑制RA-FLS增殖（P〈0．05）；对LPS诱导的TLR4的mRNA表达也有显著抑制作用（P〈0．05）；来氟米特和DYD药效相当，两者比较差异无统计学意义。结论断藤益母汤高、中剂量含药血清作用48h、72h后能显著抑制RA-FLS增殖，且高剂量血清可下调LPS诱导的TLR4mRNA表达，这可能是该方治疗RA的机制之一。