基于谱效关系的畲药树参茎抑制人滑膜关节炎成纤维细胞异常增殖的药效物质研究

目的:建立畲药树参茎不同提取物指纹图谱与抑制人滑膜关节炎成纤维细胞(HFLS-OA)异常增殖作用的谱效关系,明确药效的物质基础。方法:采用高效液相色谱法建立树参茎11个提取物指纹图谱;以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HFLS-OA增殖抑制率为指标进行不同提取物抑制HFLS-OA异常增殖的作用研究;采用偏最小二乘回归法和灰色关联度法联合分析色谱峰与抑制HFLS-OA异常增殖作用的谱效关系。结果:建立了包含34个色谱峰的树参茎不同提取物高效液相指纹图谱;给药浓度为31.25 g·L^(-1)(按生药量算)时,树参茎的20%、40%、60%乙醇提取物、正丁醇提取物、水提取物的HFLS-OA增殖抑制率较高,范围为41.9%~42.9%,且无显著性差异;次之的是80%乙醇、100%乙醇、氯仿、乙醚提取物,HFLS-OA增殖抑制率范围为37.8%~39.6%,乙酸乙酯提取物的HFLS-OA增殖抑制率为32.3%,而醇提后的水提取物则无明显抑制作用;对抑制HFLS-OA异常增殖作用贡献最大的前7个色谱峰,按其贡献大小排序为峰34(异绿原酸C)>17(绿原酸)>11(紫丁香苷)>7>24>33(异绿原酸A)>27(Saikolignanoside A),其中异绿原酸C、绿原酸、紫丁香苷、异绿原酸A也为树参茎中含量较高的4个成分。结论:树参茎的11个提取物中,除了醇提后的水提取物外,其他提取物均有一定的抑制HFLS-OA异常增殖作用;树参茎的抑制HFLS-OA异常增殖作用是多种成分联合作用的结果,主要药效成分是酚酸、苯丙素类化合物,该研究结果对树参茎抗炎机制的明确具有重要参考价值。

来那度胺对血友病性关节炎的治疗作用研究

目的:探讨来那度胺对人滑膜成纤维细胞(HFLS)增殖的影响以及对A型血友病小鼠血友病性关节炎(HA)的治疗效果。方法:以HFLS为模型细胞,在细胞培养基中添加柠檬酸铁和TNF-α重组蛋白,体外模拟炎性环境,加入不同浓度的来那度胺,通过CCK-8、ELISA、RT-q PCR、流式细胞术等方法检测HFLS的增殖能力、促炎细胞因子释放和细胞凋亡等功能的变化;构建小鼠HA模型,关节腔内注射不同浓度(0.1、0.3和1.0 g/kg)的来那度胺,在给药后d 14收集样本,通过RT-q PCR检测和组织学方法观察小鼠关节中滑膜增厚、新生血管形成等情况。结果:在体外,与未加药物的对照组相比,来那度胺0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L均能够显著抑制HFLS的增殖活力(P<0.05),以浓度为0.01μmol/L时作用最显著(P<0.001)。与对照组相比,来那度胺能够显著抑制HFLS细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ等炎性因子的表达水平(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,来那度胺能够促进HFLS细胞的凋亡水平(P<0.05)。RT-q PCR结果表明来那度胺能够显著降低小鼠关节组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1和VEGF的mRNA表达水平(P<0.05)。组织学病理检测结果表明,来那度胺能够明显降低HA小鼠的关节滑膜厚度,减少新生血管生成,效果呈现剂量依赖性(r=-0.9129),以剂量为1 g/kg时保护作用最明显。结论:在体外,来那度胺能够有效抑制HFLS细胞增殖,促进其凋亡,并抑制其炎性因子的表达;在体内,能够缓解小鼠关节内炎症发展,显著降低小鼠关节中炎性因子的表达水平,为来那度胺将来应用于HA的临床治疗提供了理论和实验依据。