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人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达
被引量:
3
1
作者
王丽
杜晓明
+6 位作者
王林林
史西保
藤蔓
李功权
权凯
郭军庆
张改平
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2011年第3期56-59,共4页
提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列...
提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPE1-1和Hspe1-1,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%。将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达。检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致。Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白。为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础。
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关键词
热
休克
蛋白
人热休克蛋白1
鼠
热
休克
蛋白
1
基因克隆
原核表达
下载PDF
职称材料
人热休克蛋白转录因子1 DNA结合结构域的表达、纯化和晶体生长
2
作者
回佳菡
唐咏
+2 位作者
张春玲
许凌峰
李雪梅
《生物技术通讯》
CAS
2006年第6期875-877,共3页
目的:获得大量热休克转录因子1(HSF1)DNA结合结构域(DBD)蛋白,用于晶体生长的三维结构解析。方法:将DBD基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中并获得高效表达,经过Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析、ResourceQ纯化后,蛋白纯度达到95...
目的:获得大量热休克转录因子1(HSF1)DNA结合结构域(DBD)蛋白,用于晶体生长的三维结构解析。方法:将DBD基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中并获得高效表达,经过Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析、ResourceQ纯化后,蛋白纯度达到95%以上。结果:圆二色谱仪分析蛋白质的二级结构结果显示α螺旋占33%,β折叠占15%;采用悬滴气相扩散法得到了针状DBD晶体。结论:纯化的蛋白质与同源性达68%的Kluyveromyceslactis的DBD有相似的空间构象。获得的蛋白质晶体为进一步的三维结构解析奠定了基础。
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关键词
人热
休克
蛋白
转录因子1
DNA结合结构域
表达
蛋白
质纯化
晶体生长
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职称材料
题名
人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达
被引量:
3
1
作者
王丽
杜晓明
王林林
史西保
藤蔓
李功权
权凯
郭军庆
张改平
机构
河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2011年第3期56-59,共4页
基金
河南省科技攻关项目(0823004532084)
文摘
提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPE1-1和Hspe1-1,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%。将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达。检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致。Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白。为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础。
关键词
热
休克
蛋白
人热休克蛋白1
鼠
热
休克
蛋白
1
基因克隆
原核表达
Keywords
Heat-shock
1
0 kDa protein(Hsp
1
0)
Homo sapiens heat shock
1
0 kDa protein
1
(chaperonin
1
0)(HSPE
1
)
Mus musculus heat shock protein
1
(chaperonin
1
0)(Hspe
1
)
Gene cloning
Protein expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
人热休克蛋白转录因子1 DNA结合结构域的表达、纯化和晶体生长
2
作者
回佳菡
唐咏
张春玲
许凌峰
李雪梅
机构
中国科学院生物物理研究所
沈阳农业大学生物技术学院辽宁沈阳
沈阳农业大学生物技术学院
出处
《生物技术通讯》
CAS
2006年第6期875-877,共3页
文摘
目的:获得大量热休克转录因子1(HSF1)DNA结合结构域(DBD)蛋白,用于晶体生长的三维结构解析。方法:将DBD基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中并获得高效表达,经过Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析、ResourceQ纯化后,蛋白纯度达到95%以上。结果:圆二色谱仪分析蛋白质的二级结构结果显示α螺旋占33%,β折叠占15%;采用悬滴气相扩散法得到了针状DBD晶体。结论:纯化的蛋白质与同源性达68%的Kluyveromyceslactis的DBD有相似的空间构象。获得的蛋白质晶体为进一步的三维结构解析奠定了基础。
关键词
人热
休克
蛋白
转录因子1
DNA结合结构域
表达
蛋白
质纯化
晶体生长
Keywords
heat shock transcription factor
1
DNA-binding domain
expression
purification
crystallization
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达
王丽
杜晓明
王林林
史西保
藤蔓
李功权
权凯
郭军庆
张改平
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2011
3
下载PDF
职称材料
2
人热休克蛋白转录因子1 DNA结合结构域的表达、纯化和晶体生长
回佳菡
唐咏
张春玲
许凌峰
李雪梅
《生物技术通讯》
CAS
2006
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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