人热休克蛋白72基因的克隆、原核表达与纯化

目的 克隆人热休克蛋白 72 (HSP72 )基因 ,原核表达并纯化蛋白产物 ,以探讨其生物学功能 .方法 从热休克的人肝癌细胞株 SMMC- 772 1中 ,用 RT- PCR方法扩增得到HSP72基因并克隆到原核表达载体 p QE- 30中 ,在大肠杆菌JM10 9中用 IPTG诱导下表达的蛋白经 FPL C梯度洗脱和Sephacryl S2 0 0凝胶过滤纯化 ,经 SDS- PAGE电泳后转印到NC膜上 ,用 anti- HSP72单抗作探针 ,进行 Western blot鉴定 .结果 克隆的基因序列分析结果与有关报道一致 ,所构建的 p QE- 30 HSP72载体在大肠杆菌中表达出与预期大小相符的 Mr为 72 0 0 0的蛋白 ,经鉴定确系 HSP72蛋白 .结论 克隆了人 HSP72基因 ,并对该基因进行了原核表达与纯化 。

热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)对人类ether-a-go-go相关基因(hERG)-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型(WT)、突变型(A561V)、杂合型(WT/A561V)细胞模型,采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载(Itf NC)、Hsp90减表达(Hsp90-)、过表达空载(Ovp NC)或Hsp90过表达(Hsp90+)质粒至各细胞模型(即Itf NC组、Hsp90-组、Ovp NC组、Hsp90+组),另设不加载体的对照(Ctl)组,采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG(135 kDa)蛋白表达水平均较野生型明显升高(均P<0.05)。野生型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)、hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),突变型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),杂合型细胞模型Hsp90+组hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05)。融合Hsp90和hERG蛋白后,Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质,Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少,Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较,Hsp90+组Ikr曲线左移14.709,斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50 mV处达到最高;杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30 mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05),在30、40 mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05)。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用,而上调Hsp90可促进WT/A561V hERG的折叠转运,进而影响通道功能。

大鼠热休克蛋白72基因真核表达载体构建及在COS7细胞中的表达

背景:体外克隆、表达热休克蛋白,尤其正常时少量或不表达,而应激时大量表达的热休克蛋白72对研究其缺血再灌注损伤中的作用尤为重要。目的:构建热休克蛋白72基因真核表达载体并于COS7细胞内表达,为HSP72蛋白免疫调节功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR技术从BABL/C大鼠肝细胞中扩增出热休克蛋白72cDNA,经限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的相应酶切位点,并将重组质粒转染COS7细胞,进行基因表达鉴定。结果与结论:重组质粒插入基因序列检测证实为热休克蛋白72cDNA,并能在COS7细胞稳定表达。成功构建热休克蛋白72真核表达载体,并于COS7细胞中成功转录与表达。

严重烧伤大鼠肾脏热休克蛋白72基因表达的研究

目的：研究严重烧伤和热休克处理大鼠肾脏热休克蛋白72（HSP72）基因表达，并讨论其作用和意义。方法：采用HSP72特异性引物，利用反转录聚合酶链式反应（RT－PCR）和原位杂交技术观察肾脏HSP72mRNA变化；用免疫印迹观察蛋白质表达的变化。结果：①烧伤早期大鼠肾脏热休克蛋白表达是逐渐增加的，到24h，其mRNA和蛋白质均处于高表达水平。②热休克预处理后大鼠肾脏热休克蛋白表达峰值在6h～12h，在24h其表达水平仍比正常对照高。③HSP72mRNA在近曲小管、远曲小管、集合管和髓拌上皮细胞均有分布。结论：烧伤后肾脏hsp72mRNA表达较热预处理后时间长，HSP72分布广泛。

卡介苗热休克蛋白70基因修饰的树突状细胞疫苗体内抗瘤作用的研究

目的:探讨卡介苗热休克蛋白70 (BCG HSP70)基因修饰的树突状细胞(DCs)疫苗体内抗瘤效应。方法:从急性白血病患儿骨髓中培养未成熟树突状细胞(imDCs),形态学观察及流式细胞术鉴定后,利用脂质体2000将BCG HSP70基因转入imDCs细胞表面,免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定。取健康BALB/C裸鼠,第0天皮下接种HL-60细胞,第7~10天可形成皮下结节的白血病裸鼠模型,将其随机分为6组,移植瘤内分别接种PBS液、不做任何处理的imDC (imDC组);空载体(pDisplay)转染的imDC (imDC-neo组);重组载体(pDisplay-HSP70)转染的imDC (HSP70组);rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (TNF-α组);以及pDisplay-HSP70转染 + rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (HSP70 + TNF-α组)。每周1次,共2次,于给药第14天处死裸鼠。观察各组肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线;计算裸鼠体重的变化情况;以及HE染色观察肿瘤组织切片。结果:1) 骨髓培养的细胞形态特点及细胞表面标志均符合imDCs特征。共聚焦显微镜观察检测证实BCG HSP70表达在转染后的imDCs细胞表面。2) HSP70 + TNF-α组HLA-DR、CD80、CD86阳性率分别为(78.42 ± 8.01)%,(83.00 ± 6.75)%和(88.51 ± 4.44)%,明显高于HSP70组((55.13 ± 4.84)%,(59.93 ± 3.88)%和(62.33 ± 5.42)%)、TNF-α组((57.28 ± 5.63)%,(60.31 ± 6.20)%和(63.70 ± 3.78)%);HSP70组与TNF-α组比较无明显差异(p > 0.05)。3) 体内杀瘤效应:HSP70-DC组肿瘤体积变化(40.94)明显小于PBS对照组、imDC组及imDC-neo组(185.72,181.16和180.18),但大于HSP70 + TNF-α组(17.60) (p < 0.05)。HSP70-DC组、TNF-α组及HSP70 + TNF-α组肿瘤切片染色可见不同程度的核固缩、碎裂及溶解、空泡现象,以HSP70 + TNF-α组最明显。结论:BCG HSP70基因修饰的DC疫苗在小鼠体内可诱导出较强的杀瘤效应,且与细胞因子联合作用更强。

脓毒症患儿尿肝型脂肪酸结合蛋白、血清热休克蛋白72水平检测对早期急性肾损伤及预后的评估价值

目的:探讨尿肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)及血清热休克蛋白72(Hsp72)对脓毒症患儿继发急性肾损伤(AKI)及预后的预测价值。方法:选取2018年6月至2021年4月都江堰市妇幼保健院儿童重症监护病房(PICU)收治的脓毒症患儿216例,根据其是否发生AKI分为AKI组(80例)和非AKI组(136例),并根据AKI的分期标准进一步将AKI组分为AKI-1期组(28例)、AKI-2期组(23例)及AKI-3期组(29例)。根据28 d的生存情况将患儿分为存活组(165例)和死亡组(51例)。比较各组尿L-FABP、血清Hsp72水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估尿L-FABP、血清Hsp72水平对脓毒症患儿继发AKI及预后的预测价值;采用单因素Logistic回归法分析尿L-FABP、血清Hsp72水平升高与脓毒症患儿继发AKI和发生死亡的风险相关性。结果:AKI组患儿尿L-FABP、血清Hsp72水平高于非AKI组(P<0.05);尿L-FABP、血清Hsp72水平AKI-3期组>AKI-2期组>AKI-1期组>非AKI组;死亡组尿L-FABP、血清Hsp72水平高于存活组(P<0.05)。ROC曲线显示,尿L-FABP、血清Hsp72和尿L-FABP+血清Hsp72预测脓毒症患儿继发AKI的曲线下面积(AUC)为0.893、0.823、0.920,尿L-FABP+血清Hsp72的AUC高于尿L-FABP、血清Hsp72(Z分别为5.819、4.972,P<0.05),其灵敏度和特异度分别为89.4%和80.6%;尿L-FABP、血清Hsp72和尿L-FABP+血清Hsp72预测脓毒症患儿预后的AUC为0.786、0.817、0.902,尿L-FABP+血清Hsp72的AUC高于尿L-FABP、血清Hsp72(Z分别为4.763、3.796,P<0.05),其灵敏度和特异度分别为89.6%和80.9%。Logistic回归分析显示,尿L-FABP、血清Hsp72水平升高与脓毒症患儿继发AKI和发生死亡的风险显著相关(P<0.05)。结论:尿L-FABP、血清Hsp72是预测脓毒症患儿继发AKI及预后的有效指标,两者联合检测有助于提高AKI诊断和预后评估的效能。

河流型水牛热休克蛋白表达量及其基因多态性对精液品质的影响

为了研究热休克蛋白对河流型水牛精液品质的影响,试验选取年龄相近的摩拉、尼里/拉菲种公牛各8头,采集鲜精检测精子活力,各分为高活力组(≥0.65)和低活力组(<0.65),每组4头。分别提取试验牛的鲜精总蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印记(Western bolt)、蛋白灰度分析并计算热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白70(HSP70)的相对表达量,对HSP70基因CDS区多态性位点与精液品质性状进行相关性分析。结果:(1)HSP60、HSP70蛋白在2个品种牛的精液中均有表达;高活力组与低活力组的HSP60蛋白相对表达量无显著差异(P>0.05),高活力组HSP70蛋白相对表达量显著高于低活力组(P<0.05)。(2)HSP70基因CDS区多态性位点与精液品质性状存在相关性。在C602T位点,摩拉CC基因型采精量最多(P<0.05),活精子数最多(P<0.05),CT基因型精子抗冻性最强(P<0.05);尼里/拉菲CC基因型精子活力最高(P<0.05),活精子数最多(P<0.05),精子抗冻性最强(P<0.05)。在A1284T位点,摩拉AA基因型活精子数最多(P<0.05)。结论:研究结果进一步验证了活力高的精子HSP70基因表达量高;摩拉、尼里/拉菲公牛HSP70基因CDS区有3个碱基对出现核苷酸多态性,核苷酸多态性产生的不同基因型对其采精量、活精子数、精子抗冻性等性状有影响。初步推断HSP70基因多态性位点可作为选择河流型水牛精液品质性状的辅助遗传标记。

热休克蛋白72和诱导型一氧化氮合酶基因在体外循环术前后先天性心脏病患儿心肌的表达及其作用

目的研究热休克蛋白72(HSP72)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在慢性缺氧型及非缺氧型先天性心脏病患儿体外循环术(CPB)前后的表达及其相关性;探讨HSP72和一氧化氮(NO)对缺血缺氧心肌的作用。方法在已确诊先天性心脏病(房间隔缺损、室间隔缺损、法洛四联症)住院患儿中,随机抽取18例分为慢性缺氧组[动脉氧饱和度(SaO2)<85%]及非缺氧组(SaO2>95%),每组9例。两组分别于CPB中主动脉交叉钳夹(ACC)前、CPB结束时收集患儿心肌标本保存在液氮中。试验采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定心肌细胞中HSP72和iNOSmRNA的相对含量,比较两组心肌CPB前后HSP72和iNOSmRNA水平,并分析其临床意义。结果①与CPB术前相比,非缺氧组及慢性缺氧组HSP72mRNA水平均明显增高(P<0.05);CPB术前及术后,慢性缺氧组HSP72mRNA水平均明显高于非缺氧组(P<0.05)。②与CPB前相比,非缺氧组iNOSmRNA水平明显增高(P<0.05),而慢性缺氧组iNOSmRNA水平无明显变化(P=0.795);CPB术前及术后,慢性缺氧组iNOSmRNA水平均明显高于非缺氧组(P<0.05)。结论缺血应激上调了非缺氧型先天性心脏病患儿心肌组织HSP72、iNOS及慢性缺氧型先天性心脏病患儿心肌组织HSP72的基因表达,慢性缺氧应激也上调了慢性缺氧型先天性心脏病患儿心肌组织HSP72。

醒脑开窍针刺法干预实验性脑梗塞大鼠热休克蛋白基因表达的研究

目的 :揭示醒脑开窍针刺法治疗脑梗塞的分子机制。方法 :采用分子杂交的技术 ,观察了实验性脑梗塞大鼠缺血区脑组织HSP70 mRNA的转录水平 ,并观察了醒脑开窍针刺法对缺血区脑组织HSP70 mRNA表达的干预作用。 结果 :发现醒脑开窍针刺法可增加梗塞区皮质、纹状体、海马HSP70 基因的表达。证实了醒脑开窍针刺法对缺血后的脑细胞的保护作用优于常规针刺法 。

脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。

电针刺激对心脏手术病人心肌热休克蛋白mRNA基因表达的影响

观察电针刺激对心脏手术病人心肌细胞热休克蛋白mRNA基因表达的影响。 2 8例ASD病人 ,随机分为针麻组 (组Ⅰ ,n =6 ) ,针刺加全麻组 (组Ⅱ ,n =10 ) ,和全麻组 (组Ⅲ ,n =9) ,于转流前 10min ,停转流 ,停转流 30min ,停转流 1h测定CK MB。结果 :① 3组病人停转流和转流后1hCK MB均较转流前明显增加 ,但组Ⅲ的升幅明显高于组Ⅰ和组Ⅱ ;②针刺组HSP70 mRNA表达高于对照组 (P <0 0 5)。因此针刺有增加缺血心肌细胞HSP70

小菜蛾热休克蛋白基因的鉴定及其表达模式分析

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)在昆虫应对外界胁迫刺激时起着重要作用。为了系统研究小菜蛾Plutella xylostella HSP基因家族,根据家蚕的HSP蛋白序列,采用本地Blast程序对小菜蛾全基因组数据库进行同源序列检索,从小菜蛾基因组数据库中鉴定了25个HSP基因,包括2个HSP90、8个HSP70和15个sHSP(small heat shock protein,sHSP)基因。小菜蛾、家蚕Bombyx mori、黑腹果蝇Drosophila melanogaster和赤拟谷盗Tribolium castaneum的HSP系统进化分析显示,昆虫的小分子量热休克蛋白sHSP具有很强的种属特异性,HSP70家族的保守性比sHSP强。小菜蛾HSP基因表达模式分析显示,与敏感品系对比,抗性品系(抗毒死蜱和抗氟虫氰品系)中HSP基因具有不同的表达模式。小菜蛾1,2和3龄幼虫HSP基因表达模式较为接近,而与4龄幼虫中的表达模式相差较大;4龄幼虫和蛹中的表达模式相近;雌成虫和雄成虫中的表达模式显著不同,与果蝇精子形成有关的两个热休克蛋白HSP23和HSP27基因[分别为CCG003980.1(Px23.5)和CCG005412.2(Px27.5)],在小菜蛾雄成虫中的表达量显著高于雌成虫。研究结果表明小菜蛾HSP基因不仅在杀虫剂抗性、发育分化,甚至在生殖上均可能起着重要的作用。本研究为深入研究小菜蛾HSP与生长发育、抗逆行为的相互关系奠定了基础。

企鹅珍珠贝热休克蛋白70基因的克隆与序列比较分析

采用同源克隆和锚定PCR技术,从企鹅珍珠贝Pteria penguin中克隆到热休克蛋白hsp70基因的cDNA全序列。cDNA全长2 308 bp,3’非编码区域(UTR)为234 bp,5’UTR为118 bp,开放阅读框(ORF)为1 956 bp,编码651个氨基酸,分子量为70.97 kd,理论等电点为5.24,有2个糖基化位点:NKSI和NVSA,并含有HSP70家族的3个签名序列:IDLGTTYS,DLGGGTFD和IVLVGGSTRIPKIQK,以及C末端的保守序列EE-VD。结合BLAST分析的结果,可以确认获得的cDNA序列为企鹅珍珠贝HSP70的编码序列。与合浦珠母贝Pinctada fucata hsp70的氨基酸序列相比,企鹅珍珠贝多1个糖基化位点NVSA,少1个氨基酸,包括1个氨基酸插入和2个缺失。两者的氨基酸序列一致性高达92%,突变位点52个;两者的核苷酸序列一致性高达79%,突变位点416个。系统发育分析表明两者的亲缘关系最近,与传统分类相符,然后与太平洋牡蛎等聚合在一起。该基因的克隆和比较分析为进一步深入研究珍珠贝类的抗逆机理、抗性育种及其进化具有重要意义。

人肝细胞癌及其配对非癌肝组织、正常肝组织中热休克蛋白Hsp90基因mRNA水平的分析

为定量分析和比较 2 2对人肝细胞癌 (HCC)及其配对非癌肝组织 (PNL)和 2例正常肝 (NL)组织中热休克蛋白Hsp(heatshockprotein) 90基因mRNA的表达水平 ,用狭缝杂交法检测hsp90 βmRNA的表达 ;并进一步用以特异性复合cRNA为内参照的定量RT PCR法对hsp90α和hspβmRNA的表达进行分析比较 .狭缝杂交结果显示 ,hsp90 βmRNA在 1 3例 ( 59 1 % )PNL中的表达平均升高至NL的 1 87倍 ;在 2 1例 ( 95 5% )HCC中的表达平均升高至NL的 3 45倍 ;在 2 0例 ( 90 9% )HCC中的表达平均升高至PNL的 2 75倍 .以cRNA为内参照的mRNA定量RT PCR结果显示 ,hsp90αmRNA在1 8例 ( 81 8% )PNL中的表达平均升高至NL的 3 0 6倍 ;在全部 2 2例HCC中的表达平均升高至至PNL的 2 0 8倍和NL的 5 1 0倍 .hsp90 βmRNA仅在小部分 ( 8例 ,36 4% )PNL中的表达轻度升高至NL的 1 2 7倍 ,而在全部 2 2例HCC中的表达显著升高至PNL的 2 95倍和NL的 2 52倍 .hsp90α和hsp90 β可能分别在人HCC发生、发展的不同阶段发挥不同的作用 ;以cRNA为内参照的定量RT PCR法是较狭缝杂交法更为灵敏、准确和快捷的mRNA定量分析方法 .

栉孔扇贝热休克蛋白70基因cDNA的克隆与分析

应用表达序列标签法,获得了栉孔扇贝HSP70基因cDNA的部分序列,然后利用锚定PCR技术克隆到了该基因的全长cDNA。克隆到的HSP70 cDNA全长2553bp,编码区全长1902bp,可以编码634个氨基酸。Blast分析表明该序列与其他生物的HSP70基因具有很高的相似性。在该cDNA序列编码的氨基酸序列中含有3个HSP70家族的特征模体,结合Blast分析的结果,可以确认所获得的cDNA序列是栉孔扇贝HSP70的编码序列。该基因的克隆为进一步深入研究栉孔扇贝的抗逆机理以及指导扇贝的遗传选育和遗传改良都具有重要的理论意义。

抗热休克蛋白72多克隆抗体血清的制备和检测

目的探讨在大肠杆菌中表达人热休克蛋白72(hHSP72)与组氨酸(His)的融合蛋白并制备其抗体血清的方法。方法将hHSP72片断插入His融合表达载体pPROEX1TM,重组载体酶切鉴定后,在大肠杆菌中经异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得His hHSP72融合蛋白。采用纯化后的HSP72免疫新西兰白兔,制备抗血清;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测重组抗原的免疫活性。结果重组质粒酶切鉴定结果表明,hHSP72基因已正确插入到pPROEX1TM中,经IPTG诱导后,表达出分子质量约为73ku的蛋白,获得了效价为1∶100000的多克隆抗体。Western blot检测证明,所制备的多克隆抗体可以与hHSP72特异性结合,其效价高于市售的单克隆抗体。结论用hHSP72片断在大肠杆菌中能成功表达,并能制备得到多克隆抗体;这种多克隆抗体是一种新的高特异性和高灵敏度的试剂。

黄粉虫热休克蛋白70基因的克隆、序列分析与表达(英文)

为给黄粉虫Tenebriomolitor抗逆机理研究提供理论依据,本研究采用PCR和RACE法从黄粉虫幼虫中克隆出一个热休克蛋白70基因Tmhsp70,并运用半定量RT-PCR法检测其在黄粉虫不同发育阶段的mRNA表达水平。结果表明:克隆出的Tmhsp70序列全长2282bp,具有一个富含A的115bp5'-非翻译区和一个1935bp的开放阅读框及一个富含A、T的232bp3'-非翻译区。5'-非翻译区含有7个热休克元件nGAAn,3'-非翻译区末端有长22bp的Poly(A)尾。Tmhsp70编码的黄粉虫热休克蛋白(TmHSP70)具有3个典型的HSP70特征基序(IDLGTTYS,IFDLGGGTFDVSIL和IVLVGGSTRIPKIQQ)和1个胞质HSP70末端特征基序(EEVD),无信号肽和跨膜区域,包含2个主要的结构域,即:N-端42kDa的高度保守ATPase功能域和C-端18kDa的保守多肽结合功能域。ATPase功能域的三级结构由2个大球形亚功能域组成,具有1个核苷酸结合中心;多肽结合功能域形成1个双层4股β-折叠片样的三明治结构和2个α-螺旋,内含1个多肽结合通道。此外,黄粉虫Tmhsp70mRNA的表达具有热激诱导和发育调控的特征。半定量RT-PCR分析表明,42℃热激1h的黄粉虫各发育阶段Tmhsp70mRNA的表达量上升了1.4～26.9倍。25℃下1日龄黄粉虫蛹中的Tmhsp70mRNA表达量要高于其余各发育阶段的累积表达量;42℃热激1h后90日龄幼虫中的Tmhsp70mRNA表达量最丰富,既高于30日龄和60日龄幼虫中的累积表达量,也高于15日龄和30日龄成虫中的累积表达量。这些结果为进一步研究黄粉虫热休克蛋白的结构、功能和表达调控及其与抗逆性的关系奠定了基础。

铜诱导大鼠大脑皮层和海马组织bax、bcl-2和热休克蛋白70基因的表达

目的 通过观察铜诱导大鼠大脑皮层和海马组织凋亡基因bcl 2、bax和热休克蛋白 70 (HSP70 )的mRNA表达 ,了解神经组织对铜诱导的反应性变化。方法 建立铜诱导鼠模型 ,提取实验组和对照组大脑皮层和海马组织RNA并反转录cDNA ,用bax、bcl 2、HSP70和 β actincDNA特异性引物在适宜条件下PCR扩增 ,半定量分析cDNA比值 ,并经t检验。结果 实验鼠皮层、海马组织中bax基因表达较对照组鼠明显增强 (P <0 .0 5 ) ,bcl 2基因表达无差异 ,HSP70表达明显减弱 (P <0 .0 5 )。结论 铜诱导大鼠bax基因表达增强 ,推测可能细胞凋亡增强 ;HSP70基因表达减弱 。

心肌特异性高表达热休克蛋白27转基因鼠建立

目的:建立人热休克蛋白27(heat shock protein27,Hsp27)基因在小鼠心肌特异性表达的转基因鼠模型。方法:将人心肌Hsp27cDNA插入含有心肌特异性表达启动子αMHC的pBSⅡ-SK+载体中,限制性内切酶EcoRI酶切、纯化后,获得含有αMHC启动子-Hsp27cDNA-HGHpolyA的线性DNA片段,以显微注射法将目的基因导入受精卵,PCR筛选基因型,Western blot鉴定转移基因的表达和表达的组织特异性。结果和结论:共获得两个转基因系小鼠,均呈心肌组织特异性高表达。

家蚕热休克蛋白70家族基因的染色体定位及表达特征

热休克蛋白70家族(Hsp70)是非常保守的蛋白家族,每个物种的Hsp70家族都有多个成员,每个成员都可能具有特殊的功能。为了能够对家蚕Hsp70家族各成员进行科学命名和了解其特有的功能,分析家蚕Hsp70家族成员的编码基因及其在染色体上的定位,并通过实时荧光定量PCR方法检测这些基因在5龄第3天幼虫中肠、脂肪体和丝腺组织中的转录表达情况。家蚕诱导型Hsp70家族成员Bmhsp70A和Bmhsp70B的编码基因集中分布在第27号染色体上,有多个拷贝;组成型Bmhsp70家族成员的编码基因则分布在不同的染色体上,一般仅有1个拷贝。家蚕Hsp70家族基因中有10个能转录并翻译蛋白质产物的成员,还有1个能正常转录但不能正确翻译的假基因。实时荧光定量PCR结果表明:在常温(25℃)条件下,组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-4和Bmhsc70-3的表达水平较高,而其它基因成员的表达水平则相对较低,诱导型Bmhsp70家族基因成员在常温下也有一定程度的基础表达;40℃热激2 h后,Bmhsp70家族所有基因的表达水平都有所升高,其中诱导型Bmhsp70家族基因Bmhsp70B和Bmhsp68的转录表达上升水平远高于组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-3和Bmhsc70-4。不同表达类型的家蚕Hsp70家族基因成员在5龄幼虫中肠、丝腺和脂肪体中的表达情况不同,热激2 h后的表达变化规律也不完全相同,提示家蚕Hsp70家族成员具有各自特殊的功能。