人牙乳头细胞内Smad4表达的免疫组化研究

目的 :观察转化生长因子 - β超家族的细胞内信号转导分子Smad4在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程。从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)和骨形成蛋白 - 2 (recombinanthu manbonemorphogennticprotein ,rhBMP - 2 )刺激培养的细胞 ,免疫组化观察。结果 :TGF - β1和rhBMP - 2实验组胞核内均可见Smad4蛋白强阳性表达 ,但胞浆内未见Smad4蛋白阳性表达 ;对照组胞浆内可见Smad4蛋白阳性表达 ,核内未见阳性表达。结论 :观察到Smad4在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程 ,提示Smad4可能同时参与TGF - βs和BMPs的细胞内信号转导过程。TGF - βs和BMPs在牙齿发育中信号传递可能都是通过Smad4的信号传导途径实现的。

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

目的 :观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)信号转导中的作用。 方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用TGF -β1和骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein ,BMP2 )刺激培养的细胞 ,免疫组化观察。结果 :TGF - β1和BMP2刺激组均可见Smad2蛋白表达 ,但与对照组相比无明显差异。TGF - β1组可见Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,BMP2组未见此作用。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad2蛋白的表达 ,Smad2能特异地转导TGF - β1信号至核内发挥作用 ,提示TGF - β1调控成牙本质细胞分化的作用可能是通过Smad2信号途径实现的。

Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达及其意义的探讨

目的 :观察转化生长因子 - β超家族特异的细胞内信号转导基因Smad4在人牙乳头细胞内的表达 ,及其在转化生长因子 - β1(TGF - β1)和骨形成蛋白 - 2 (BMP - 2 )作用下的变化 ,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用TGF - β1和BMP - 2刺激培养的细胞 ,分别从刺激前后的细胞中提取总RNA和总蛋白 ,采用Northern和Western印迹杂交方法 ,从mRNA和蛋白水平观察Smad4基因的表达及变化。结果 :从mRNA和蛋白水平观察到Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达。但在TGF - β1和BMP - 2作用下表达无变化。 结论 :研究证实Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达 ,Smad4基因在信号转导过程中无量的变化 。

rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 + 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 + 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 + 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 + 聚集和直接贮存的作用。

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化

目的 :观察人牙乳头细胞内Smad1mRNA的表达及在BMP2作用下 ,细胞内Smad1mRNA的表达变化 ,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法 :原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后 ,提取总RNA ,采用Northernblot法 ,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果 :从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达 ,但在BMP2作用 6、12、2 4h后 ,Smad1mRNA表达量无显著变化。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径 ,牙乳头细胞内Smad1mRNA表达量不受BMP2调控。

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制。方法采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响。结果ADAM28AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升。结论ADAM28反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化。

激素和生长因子对人牙乳头细胞增殖的影响

目的：探讨激素和生长因子对体外培养人牙乳头细胞增殖的影响。方法：用ＭＴＴ法观察不同浓度的１，２５－二羟基维生素Ｄ３、胰岛素和表皮生长因子对离体培养的人牙乳头细胞生长的影响。结果：在１０－９～１０－７ｍｏｌ／Ｌ浓度范围时，１，２５－二羟基维生素Ｄ３对细胞增殖具有抑制作用，浓度越高，作用时间越长，抑制作用越强。胰岛素和生长因子对细胞增殖有一定促进作用，与浓度成正相关，分别在加药后第３天、４天作用最强。结论：在一定浓度和作用时间内。

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的 :观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子 - β超家族信号转导中的作用。方法 :原代培养的人牙乳头细胞 ,分别以骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein -2 ,BMP - 2 )和转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)刺激 ,免疫组化检测Smad5的表达 ,图像分析仪半定量。结果 :人牙乳头细胞 (空白对照组 )胞浆内可见Smad5阳性表达 ,胞核内未见阳性表达 ;BMP- 2实验组胞核内Smad5强阳性表达 ,胞浆内为弱阳性表达 ;TGF - β1实验组细胞胞浆Smad5阳性 ,胞核未见表达。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad5的表达 ,Smad5能转导BMP - 2信号至核内发挥作用 ,但不能转导TGF -β1信号 ,提示BMP - 2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号转导途径实现的。

人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆

目的 :从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白 (BMP)细胞内信号转导基因 Smad1的功能性结构域— MH2结构域。方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,从培养的细胞中提取总 RNA,逆转录合成 c DNA第 1条链 ;设计上下游引物 ,进行 RT- PCR,扩增 Smad1基因 MH2结构域的基因片段 ;将所获得的基因片段定向插入 PUC19载体 ;转化大肠杆菌 JM10 9,挑选阳性克隆 ,鉴定后进行序列测定。结果 :获得的 Smad1MH2 结构域的 c DNA片段大小为 44 4bp,并且成功构建 PU C19/ MH2重组质粒。结论 :人牙乳头细胞内存在 Smad1信号转导途径 ,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过

骨形成蛋白-2对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量的影响

目的 观察人牙乳头细胞内Smad1蛋白的表达及骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein - 2 ,BMP2 )对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量影响。方法 原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理 6h、12h、2 4h、48h后 ,提取总蛋白质 ,采用WesternBolt法 ,从翻译水平观察Smad1基因的表达变化。结果 从翻译水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达 ,但在BMP2作用 48h内 ,Smad1蛋白表达量无显著变化。结论 人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径 ,牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量不受BMP2影响。

激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨激素和生长因子对人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用改良酶动力学的方法，测定不同浓度的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、胰岛素、ＥＧＦ及ＴＧＦ－β在不同时间内对体外培养人牙乳头细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对酶活性有增强作用，并与其浓度及作用时间呈正相关关系；胰岛素、ＥＧＦ和ＴＧＦ－β对酶有抑制作用，随作用时间延长，抑制越明显。结论：激素和生长因子对人牙乳头细胞的碱性磷酸酶作用不同。

磷酸化cAMP反应元件结合蛋白对发育期人牙乳头细胞增殖和分化的影响

目的构建CBP抑制表达慢病毒载体,探讨CBP有效表达沉默后对体外培养人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)的增殖及分化影响。方法利用基因重组技术构建重组慢病毒建立牙乳头细胞沉默稳转细胞,采用CCK-8检测细胞增殖的变化,采用检测分化相关蛋白的表达评价CBP对HDPC分化能力的影响。结果测序结果提示成功构建四组人CBP基因的重组慢病毒;转染HDPC后,通过RT-PCR和蛋白质印迹法筛选获得有效靶点的重组慢病毒;CCK-8检测结果表明HDPC在CBP表达下调后增殖活性受到抑制;慢病毒介导CBP沉默后影响了HDPCs相关分化蛋白ColI、OCN、OPN的表达,较对照组显著下调(P<0.05);牙乳头细胞的ALP活性在转染重组慢病毒后5,7,14d后显著降低(P<0.05);结论成功构建了高效CBP抑制表达载体,CBP沉默可抑制HDPCs的增殖和分化。

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对体外培养的人牙乳头细胞 (humandentalpapillacells,HDPC)牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)合成分泌的影响。方法 :原代方法培养出人牙乳头细胞 ,用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第 5代人牙乳头细胞 ,免疫组化观察结果 ,并采用图像分析的方法 ,进行半定量分析。结果 :PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达 ,诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内 ,呈一定的浓度依赖性 ,0 .3μg/mL为刺激最佳浓度。 结论 :PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1,对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用 ,可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。

BMP2对人牙乳头细胞c-fos和c-jun诱导作用的研究

目的:探讨生长因子BMP2对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的诱导作用。方法:采用免疫组织化学和图像分析的方法,观察特定浓度的BMP2在不同时间点对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的影响。结果:不加刺激时人牙乳头细胞c-fos、c-jun在胞浆阴性表达,胞核不表达或弱阳性表达。200ng/mLBMP2刺激30min后,c-fos和c-jun在胞浆胞核均出现表达,但较稀疏;刺激1h胞核胞浆内表达明显增强,浆内表达较核内弱;2hc-fos和c-jun在细胞核内表达最强,12h胞核着色明显变浅,24h基本已无阳性着色。结论:生长因子BMP2可诱导体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达,整个过程约持续24h;c-fos和c-jun的表达存在核转位现象,提示c-fos和c-jun参与了BMP2的信号转导过程。

激素和生长因子对人牙乳头细胞骨钙素合成分泌的影响

目的：探讨激素和生长因子对人牙乳头细胞骨钙素合成分泌的影响；方法：采用放射免疫的方法进行测定。结果：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对骨钙素的合成分泌具有明显增强作用，胰岛素、ＥＧＦ对其合成有促进作用，但较弱。而ＴＧＦ－β抑制骨钙素的合成分泌。结论：人牙乳头细胞合成分泌骨钙素受这些因子不同程度的影响。

牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究

目的探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用。方法应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布。结果成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达。结论ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化。

人牙乳头细胞cDNA文库的构建及初步筛选

人牙乳头细胞ｃＤＮＡ文库的构建及初步筛选赵大为①史俊南①金明②王方②肖明振①（第四军医大学①牙髓生物学实验室②分子生物学实验室）牙乳头细胞作为致密的胚胎性的间充质细胞，本身可分化为成牙本质细胞，在牙齿发育中起着重要调节作用。为筛选、分离和克隆牙本质特...

金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析。结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01。结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡。