miR-203靶向RUNX2对牙周膜干细胞成骨分化能力的调控作用

目的:体外研究miR-203对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响及调控机制。方法:分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后miR-203和RUNX2的表达;分别转染miR-203沉默及过表达模拟物;qPCR检测miR-203和RUNX2 mRNA水平的表达;Western blot检测RUNX2蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;生物信息学分析miR-203的靶基因,双荧光素酶报告实验验证;共转染miR-203 inhibitor和RUNX2 siRNA,分析共转染后对RUNX2表达及细胞成骨分化能力的影响。结果:成骨诱导液诱导后牙周膜干细胞中miR-203的表达水平显著下调,而RUNX2的表达水平明显升高;miR-203过表达可明显抑制h PDLSCs的成骨分化能力和RUNX2的表达,抑制miR-203的表达,则结果相反;通过生物信息学分析miR-203的潜在靶基因含有RUNX2,双荧光素酶报告实验验证RUNX2为miR-203的靶基因;进一步实验结果表明沉默RUNX2可逆转miR-203 inhibitor对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论:miR-203可靶向调控RUNX2对人牙周膜干细胞成骨分化能力产生影响,提示miR-203在h PDLSCs组织工程损伤修复过程中发挥着重要作用。

周期性动态压力对人牙周膜干细胞中力生长因子表达的影响

目的：探讨周期性动态压力对人牙周膜干细胞（h PDLSCs）膜片中力生长因子（MGF）表达的影响。方法：取第3代h PDLSCs及其膜片,并按照不同压力将其随机分为0（对照）、0～90、0～120、0～150 KPa组后,置于细胞压力加载室内以0.1 Hz频率连续加载1 h。分别于加压后0、12、24、36 h各时间点,用CCK-8法检测各组细胞的增殖;RT-PCR法检测各组h PDLSCs膜片中MGF、ALP、Col-ⅠmRNA的表达。结果：0～120 KPa组可显著促进h PDLSCs增殖（P〈0.05）,其次为0～150 KPa组;各周期性动态压力作用于h PDLSCs膜片后12 h均能明显上调其MGF mRNA表达水平（P〈0.05）,受力后24 h达到峰值;36 h后表达水平下降,除0～120 KPa组仍明显高于对照组（P〈0.05）外,其他两组均回到对照组水平。其中以0～120 KPa组的MGF mRNA表达水平最高（P〈0.05）,且在该压力条件下还能明显促进h PDLSCs膜片中Col-Ⅰ、ALP mRNA的表达（P〈0.05）。结论：0～120 Kpa/1 h周期性动态压力能促进h PDLSCs膜片中MGF mRNA的表达,促进该细胞的增殖与分化潜能。