内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响

目的研究内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响。方法培养HPLFs细胞,将细胞分为LPS刺激0 mg/L(对照组)、1 mg/L(实验Ⅰ组)、10 mg/L(实验Ⅱ组),应用ELISA法检测IL-6、TNF-α因子的表达情况。结果 LPS刺激6 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS刺激12 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组也显著高于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。HPLFs细胞中TNF-α、IL-6的表达随LPS刺激浓度呈剂量依赖性;且对照组、及Ⅰ组、Ⅱ组经LPS刺激12 h的TNF-α、IL-6表达均显著高于刺激6 h,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论内毒素脂多糖(LPS)能够刺激人牙周膜成纤维细胞分泌TNF-α、IL-6炎症因子。

罗红霉素对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6释放的影响

目的：探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）释放的影响。方法：采用ELISA方法，检测在不同剂量的罗红霉素作用下，脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果：LPS刺激后人牙周膜细胞TNF-α的释放显著高于正常对照组（360pg／ml vs 80pg／ml，3 h，P〈0．05）。与L组相比，罗红霉素组（20μg／ml）TNF-α水平12h显著降低，3—6h与L组无明显差异，而12h（520pg／ml vs 710pg／ml）、24h（220pg／ml vs 680pg／ml）显著降低（P〈0．05）。LPS组IL-6水平显著高于正常对照组（360pg／ml vs 105pg／ml，P〈0．05），罗红霉素组（20μg／ml）IL-6分泌量在6h（420pg／ml vs 670pg／ml）、12h（590pg／ml vs 810pg／ml）和24h（340pg／ml vs 630pg／ml）较L组均显著降低（P〈0．05）。结论：罗红霉素能显著抑制LPS刺激后人牙周膜细胞IL-6、TNF-α的释放。

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24 h,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKL mRNA表达,RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。

幽门螺杆菌对人牙周膜成纤维细胞形态学及TNF-α产物的影响

目的:观察幽门螺杆菌(H.pylori)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)的形态学变化及表达TNF-α的影响。方法:体外分别培养hPDLF100细胞株和H.pylori国际标准产毒株NCTC11637,将hPDLFs分别于浓度为1×108、2×107、4×106、8×105CFU/mL的H.pylori共同培养;分别于培养6、12、24、48 h,倒置显微镜下观察PDLFs形态学变化;于培养0、6、12、24、36、48 h采用ELISA法检测各组细胞培养上清中TNF-α的表达水平。结果:随着H.pylori菌液浓度的增大和作用时间的延长,PDLFs细胞形态由贴壁的梭形变为圆形,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,并且细胞周围出现碎片;PDLFs与不同浓度H.pylori共同孵育0、6、12、24、36、48 h后,各浓度组各时间点培养上清中的TNF-α值均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:H.pylori对人牙周膜成纤维细胞有较明显的细胞毒作用,并能诱导其产生TNF-α。

苯妥英钠对内毒素作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响

目的:观察苯妥英钠(PHT)对内毒素(LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:原代培养h PDLFs,分别与100 mg/L LPS、不同浓度PHT(5、20 mg/L)以及100 mg/L LPS+不同浓度PHT共同培养24 h后,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察不同浓度PHT对LPS作用下h PDLFs增殖活性的影响;采用免疫细胞化学SP法检测PHT对LPS作用下h PDLFs内TNF-α的表达情况。结果:100 mg/L的LPS可明显抑制h PDLFs的增殖活性、刺激h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);20 mg/L PHT可明显促进h PDLFs的增殖(P<0.05),并可明显抑制h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);将20 mg/L PHT与100 mg/L LPS联合作用于h PDLFs时,可明显逆转LPS对h PDLFs增殖(P<0.05),明显拮抗LPS介导h PDLFs表达TNF-α(P<0.05)。结论:20 mg/L PHT对LPS作用下的h PDLFs具有保护作用。

中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的研究中药黄芩苷对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法(ELISA),检测培养上清液中TNF-α的水平。结果0．001～10μg／ml黄芩苷和2μg／ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激HPLFs分泌TNF-α的活性(P＜0．01),而不同浓度组之间比较,抑制作用无显著性差异(P＞0．05)。结论黄芩苷对LPS刺激HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用,与地塞米松抗炎效果相近,作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关,揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制。

GRP78-c-Src信号通路介导周期性牵张力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究

目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成。结果GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞。周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05)。结论GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化。

利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和炎症反应的影响

目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、低糖给药组(L+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)和高糖给药组(H+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)。采用CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞迁移能力,应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western blot法测定牙周膜成纤维细胞中Bax、Bcl-2表达水平,采用酶联免疫吸附法检测牙周膜成纤维细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、C反应蛋白(CRP)的表达水平。结果与L组相比,H组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移数量、胞内Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平升高(P<0.05)。H+G组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移细胞数量、胞内Bcl-2蛋白水平显著高于H组(P<0.05);而细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平则低于H组(P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的牙周膜成纤维细胞凋亡,通过调控Bax/Bcl-2表达和降低炎症反应,从而促进牙周组织愈合修复。

没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。

bFGF对牙周膜成纤维细胞与骨髓间充质干细胞共育影响的体外研究

目的探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLFs分化的影响。方法体外培养大鼠BMSCs和PDLFs,并进行细胞鉴定。采用Millicell悬挂式细胞共育室建立BMSCs/PDLFs间接共培养模型。将实验分为5组:阴性对照组(单独BMSCs组);阳性对照组(单独PDLFs组);实验组:0 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组、1 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组和10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组。在细胞共育的第3天、第5天和第7天进行ALP活性测定。培育至2 w后,停止共育,RT-PCR法监测各组细胞的骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,COLⅢ)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和金属蛋白酶1(metalloproteinase 1,ADAMTS1)的mRNA含量。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果ALP活性测定显示第3天、第5天和第7天共培养后,在各个时间点,各实验组与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示阴性对照组与其余4组的OCN和OPN mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),后4组之间差异无统计学意义(P>0.05);单独BMSCs组与其余4组的COLⅢ和ADAMTS1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组的COLⅢ、ADAMTS1 mRNA表达量高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF能诱导BMSCs向PDLFs分化,高浓度组(10 ng/mL)bFGF的诱导效果优于低浓度组(1 ng/mL)。

黄芪多糖调控AMPK⁃mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

目的探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^(-1)组(0.1 mg·mL^(-1) APS)、0.2 mg·mL^(-1)组(0.2 mg·mL^(-1) APS)、0.4 mg·mL^(-1)组(0.4 mg·mL^(-1) APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比细胞增殖抑制率与凋亡率则明显增多。与对照组相比,0.1 mg·mL^(-1)和0.2 mg·mL^(-1) APS显著抑制细胞自噬,而0.4 mg·mL^(-1) APS则促进细胞自噬;与对照组相比,Beclin⁃1、LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ、半胱氨酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)、bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、p⁃AMPK/AMPK在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比表达水平则显著增加;p62、survivin、Bcl⁃2、p⁃mTORC1/mTORC1表达水平与其呈现相反趋势。结论APS具有促进HPLF细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用,并可能通过调节AMPK⁃mTORC1通路抑制细胞自噬的发生。

胶原蛋白肽对人牙周膜成纤维细胞损伤的保护作用

文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能有效降低TLR4和NF-κB的表达量,对炎症因子的分泌产生明显的影响。作用机理可能是,CP作为一种信号分子作用于TLR4,通过抑制TLR4和NF-κB的表达来抑制LPS引起的炎症反应,从而促进hPDLFs增殖。

TNF-α对牙周膜成纤维细胞ephrinB2/EphB4表达量的影响

目的:检测不同浓度TNF-α对牙周膜成纤维细胞ephrinB2/EphB4表达量的影响。方法:收集因正畸需要拔除的健康牙齿,培养原代牙周膜成纤维细胞;用不同浓度TNF-α分别刺激24 h,48 h后检测牙周膜细胞ephrinB2/EphB4 mRNA及蛋白表达量。结果:24 h组ephrinB2与EphB4 mRNA浓度均降低,差异有统计学意义(P<0.05);48 h低浓度组对ephrinB2 mRNA表达量无影响,0.1μg/L使EphB4 mRNA表达量增加,高浓度组使ephrinB2/EphB4 mRNA表达量下降;24 h组,TNF-α浓度为0.1~1μg/L时,ephrinB2/EphB4蛋白表达量无明显变化,TNF-α浓度为10~1000μg/L时ephrinB2/EphB4蛋白表达量下降;48 h组,0.1μg/L TNF-α作用后使EphB4蛋白表达量上升,ephrinB2蛋白表达量无明显变化,1μg/L作用后,ephrinB2/EphB4蛋白表达量均无明显变化,10~1000μg/L刺激后ephrinB2/EphB4蛋白表达量均下降。结论:24 h时TNF-α使ephrinB2/EphB4 mRNA与蛋白表达量均降低,但在48 h时,低浓度作用下EphB4表达量上升,是否可以为低浓度炎症状态下骨改建的研究提供参考。

抗肿瘤坏死因子单抗对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞TRAIL和TNF-α的影响

目的:观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)肿瘤坏死因子(TNF)受体相关凋亡诱导配体(TRAIL)和TNF-α的诱导作用及抗肿瘤坏死因子单抗(抗TNF单抗)对其的影响,探讨TNF超家族参与牙周病的可能作用机制。方法:HPLFs培养至第6代,加入不同浓度的脂多糖(0、0.1、1、10、100μg/m L)培养24 h,分为命名为Z0组、Z0.1组、Z1组、Z10组、Z100组,并取Z1组浓度的脂多糖,在加药的同时加抗TNF单抗75μg/m L(Z1+75组)。分别采用实时荧光定量PCR法或Western blot法测定TRAIL和TNF-αm RNA或蛋白的表达。结果:Z1组、Z10组HPLFs TRAIL m RNA的表达水平显著高于Z0组或Z0.1组(均P<0.05),Z1组与Z10组之间差异无统计学意义(P>0.05);Z100组显著高于Z0组(P<0.05)且与Z0.1组、Z1组和Z10组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。Z1组或Z10组TNF-αm RNA的表达水平显著高于Z0组或Z100组(均P<0.05);Z1组与Z10组之间,Z0组、Z0.1组和Z100组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。HPLFs TRAIL蛋白的表达水平在Z100组<Z0组<Z0.1组<Z1组(均P<0.05或<0.01);Z10组显著高于Z0组或Z100组(均P<0.01),但与Z0.1组或Z1组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。抗TNF单抗治疗后TRAIL m RNA及蛋白和TNF-αm RNA的表达水平显著低于Z1组(P<0.05和P<0.01)。TRAIL和TNF-αm RNA的表达水平呈显著直线正相关(r=0.819,n=30,P<0.01)。结论:HPLFs经脂多糖诱导后,其TRAIL和TNF-α的表达呈现先升高后下降,且随脂多糖的浓度变化而相应地变化,这种诱导作用能被抗TNF单抗所抑制。

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形 。

人牙周膜成纤维细胞增殖与压力关系的初步观察

目的 :在体外培养环境下观察压力对人牙周膜成纤维细胞 (HPLF)增殖的影响。方法 :取第 4～ 6代培养的HPLF ,应用可控压力细胞加载装置分别间断性施加 3 0、60、90kPa的压力 ,分别在培养 3、5、7d后用MTT法测定各组的A值。结果 :HPLF在 3 0、60、90kPa的压力培养环境下MTT反应的A值显著小于对照组 ,压力值越大 ,A值越小。结论 :3 0、60、90kPa间断性压力可显著抑制HPLF细胞增殖 ,该抑制作用随压力值增大而增强。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF48h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200μmol/L及400μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响

目的明确碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响,以探讨在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法同一只SD大鼠来源的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞经传代培养至第4代,建立体外创伤模型,分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养,观察细胞迁移情况,四唑盐比色实验(MTT)测定细胞的增殖速度。结果普通培养基中,成骨细胞迁移速度快于成纤维细胞。加bFGF培养基中牙周膜成纤维细胞迁移速度明显快于其他各组,同时MTT结果显示加入bFGF能明显促进两种细胞的增殖。结论bFGF能明显促进牙周膜成纤维细胞的增殖、移行。

内毒素对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌100μg/ml浓度可使体外培养的人牙周膜成纤维细胞线粒体膜破裂、溶酶体膜受损、细胞出现大量空泡表明细胞功能受损。