米诺环素对人牙周韧带细胞矿化能力的影响

目的探讨米诺环素对人牙周韧带细胞(periodontal Iigament cells,PDLCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度的米诺环素(0,1,5,20,100,200mg/L)加入体外培养的第4代HPDLcs中,孵育4天后,检测其对细胞ALP活性的影响;将第4代的PDLCs在体外进行长期培养,实验组加入矿化液和米诺环素(20mg/L或100mg/L),对照组只加矿化液。28天后用茜素红与VonKossa染色检测矿化结节的形成。结果20mg/L和100mg/L的米诺环素能显提高PDLCsS的ALP活性,其中20mg/L具有最大的促进效应,对体外矿化结节的形成,亦有一定程度的促进作用。结论米诺环素有促进牙周韧带细胞向成骨细胞方向转化的趋势,从而有助于牙周新附着的形成。

黄芩苷对人牙周韧带细胞超微结构的影响

目的 :观察黄芩苷对人牙周韧带细胞超微结构的影响。方法 :10ng/mL的黄芩苷孵育人牙周韧带细胞 5d ,采用透射电镜观察人牙周韧带细胞超微结构的变化。结果 :与对照组比较 ,用药组细胞的内质网、线粒体等明显增多。结论 :黄芩苷能促进细胞的代谢和蛋白质的合成 。

人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损

背景:近年来,组织工程技术作为新型组织再生模式,为牙周缺损修复提供了新的思路和方法。目的:观察人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损的效果。方法:采用多次沉淀法将第4代人牙周韧带细胞以1.5×109 L-1的浓度接种于聚羟基乙酸支架上,制备细胞-支架复合体。取10只杂种犬,建立牙周组织缺损模型后随机分组,实验组牙周组织缺损处植入细胞-支架复合体,对照组牙周组织缺损处直接直接龈瓣冠向复位缝合。术后4周内,检测两组牙周组织缺损处胶原组织、新生毛细血管、新生牙骨质、新生牙槽骨与新生牙周膜组织;术后8周,进行牙周组织缺损处苏木精-伊红染色。结果与结论:实验组术后1,2,3,4周的胶原含量、新生毛细血管数量、新生牙骨质、新生牙槽骨、新生牙周膜组织均显著多于对照组(P<0.05)。术后8周,实验组新生牙槽骨的结缔组织面存在较多血管排列,牙槽骨与牙周膜的链接呈锯齿状,可看见薄层牙骨质沉积;对照组仅见新生牙槽骨和牙骨质形成,部分位于切迹以下。结果表明,人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体可促进牙周组织再生。

人牙周韧带细胞成骨诱导分化后的超微结构观察

目的观察成骨诱导分化培养前后,人牙周韧带细胞超微结构的变化。方法对人牙周韧带细胞进行体外培养,并进行成骨诱导分化,14d后行透射电子显微镜观察。结果体外成骨诱导分化培养后,人牙周韧带细胞内细胞器发达,数目较常规培养条件下明显增多。细胞内可见大量的基质小泡、髓样结构及中、低电子密度的圆形和椭圆形小泡样结构。结论人牙周韧带细胞是一种具有成骨潜能的细胞,经成骨诱导分化培养后,其超微结构具有成骨细胞和成牙骨质细胞的特点。

人牙周韧带细胞在SGBG/PHBV三维支架材料上分泌功能的研究

目的研究人牙周韧带细胞(periodontal ligament cells PDLCs)在溶胶-凝胶生物活性玻璃(sol-gel bioglass,SGBG)/聚羟基烷酸酯(poly-3-hydroxy butyrate-co-3-hydroxy valerate,PHBV)三维支架上的分泌功能,为牙周组织工程支架的选择提供依据。方法通过体外细胞培养实验,人牙周韧带细胞与SGBG/PHBV体外三维培养的直接接触法,测定上清液羟脯氨酸含量,检测材料对细胞分泌功能的影响。结果实验组上清液羟脯氨酸含量测定值与对照组有显著性差异,材料不影响细胞的分泌功能,同时支架材料的三维结构更能促进细胞的分泌功能。结论 SGBG/PHBV作为支架材料,有良好的生物相容性,有望应用于牙周组织缺损的组织工程修复。

四环素和多西环素对人牙周韧带细胞生物学活性的影响

目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用。方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500滋g/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1～100滋g/ml的浓度范围内,2种药物对细胞形态无影响。在20～100滋g/ml的浓度范围内,四环素显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P﹤0.01),而多西环素只在20滋g/ml时,能显著促进细胞DNA的合成(P﹤0.01)。当2种药物的浓度增至2500滋g/ml时,不仅使细胞的镜下形态发生明显改变,而且严重抑制细胞的生物学活性。结论在合适的浓度范围内,四环素能显著促进HPDLCs的增殖及生物合成,多西环素的促进作用不明显,而浓度过高时两者均具有细胞毒性。

纤维结合蛋白对人牙周韧带细胞DNA合成及超微结构的影响

采用显微分光光度计图像分析技术及透射电镜观察纤维结合蛋白与人牙周韧带细胞作用后，细胞ＤＮＡ合成和超微结构的变化，结果显示：加纤维结合蛋白组的牙周韧带细胞核面积值、核总吸收值和核平均吸收值均较对照组高（Ｐ＜０．０１），提示纤维结合蛋白可促进牙周细胞ＤＮＡ的合成。超微结构示纤维结合蛋白组细胞核内常染色质含量明显较对照组丰富，且胞浆中含有更多量的微丝、线粒体等细胞器，表明在促进牙周愈合时，纤维结合蛋白可能通过调节微丝聚合度、刺激某些蛋白质合成而起作用。

血小板源性生长因子对人牙周韧带细胞在壳聚糖-磷酸三钙支架材料上附着和增殖的影响

目的:研究血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)在壳聚糖-磷酸三钙(chitosan/tricalcium phosphate,CTCP)支架材料上附着和增殖的影响。方法:将一定体积的CTCP支架材料置96孔培养板内,取第5代hPDLC接种在材料表面。实验组加入含PDGF-BB的DMEM培养液,使得PDGF-BB终浓度分别为1ng/mL、10ng/mL和100ng/mL;对照组仅加入DMEM培养液。孵育24h及72h后分别对材料上的细胞计数;72h后对标本行扫描电镜观察。结果:与对照组相比,各浓度PDGF-BB组培养24h后均可促进hPDLC在CTCP支架材料上的附着,呈浓度依赖关系,差异具有统计学意义(P<0.05),其中100ng/mL为最有效浓度;同时培养72h后各浓度PDGF-BB组均能促进hPDLC在CTCP支架材料上的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);扫描电镜观察发现PDGF-BB组较对照组hPDLC在材料上附着数量增加,伸展更充分。结论:hPDLC在CTCP支架材料上的附着和增殖可被PDGF-BB所增强。

PDTC对LPS刺激的人牙周韧带细胞的作用研究

目的:探讨核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithioearba-mate,PDTC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙周韧带细胞的干预作用。方法:采用组织块法分离培养人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)。实验分为对照组与实验组,对照组细胞以含10μg/ml LPS的培养基培养;实验组分别以PDTC10、100、1 000μmol/L预处理细胞30 min后,加入含相同浓度LPS的培养基培养。ELISA检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、IL-8分泌量的改变。免疫荧光检测干预前后细胞内NF-κB的核转移改变。结果:PDTC抑制HPDLCs增殖,10μmol/L PDTC预处理对HPDLCs分泌IL-1β和IL-8无影响,其余2种浓度均可抑制IL-1β和IL-8的分泌,1 000μmol/L PDTC的抑制作用更强,与其它各组相比差异具有显著性(P<0.05)。免疫荧光显示PDTC预处理后细胞核NF-κB的表达明显减弱或消失。结论:PDTC可以抑制LPS刺激的HPDLCs分泌IL-1β与IL-8和细胞内NF-κB的核转移,说明NF-κB信号通路在牙周病的发生过程中具有重要作用,阻断该通路可能成为牙周病药物治疗的一种新策略。

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人牙周韧带细胞的作用

背景:主要来源于因正畸或阻生拔除的健康牙培养而成的人牙周韧带细胞已成为牙周组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:了解采用重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染对体外培养的人牙周韧带细胞增殖及细胞周期的影响。方法:体外培养人牙周韧带细胞,经重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染,分为3组:对照组、空载病毒组、碱性成纤维细胞生长因子转染组。用RT-PCR,Western blot检测人牙周韧带细胞在转染前后碱性成纤维细胞生长因子基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝比色法观察细胞生长的优化作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果与结论:对照组、空载病毒组未检测到碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白表达;碱性成纤维细胞生长因子转染组碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多。各组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。

3种根尖倒充填材料对体外人牙周韧带细胞创伤模型创面愈合的影响

目的:利用牙周细胞体外创伤模型,探讨MTA、银汞合金和IRM对人牙周韧带细胞生长的影响。方法:在培养皿中形成人牙周韧带细胞的融合培养物,以机械方法去除宽3mm的细胞层条带,形成体外创伤模型。在受损培养物中,分别加入以上3种根尖倒充填材料的浸提液,并以含有10%胎牛血清的培养液作为阳性对照组,含有0.1%胎牛血清的培养液作为阴性对照组。继续培养2、6、9d,对每个时间点细胞增殖能力和对创面的覆盖能力进行检测,应用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:第2天时,细胞增殖能力为MTA组>银汞合金组≈IRM组;第6天和第9天时,细胞覆盖能力为MTA组>银汞合金组>IRM组(P<0.05)。结论:3种材料中,MTA的生物相容性最好,其次是银汞合金,而IRM最差。

AMPK/NF-κB参与牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙周韧带细胞的炎症反应

目的:探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, PgLPS)刺激对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)引起炎症反应的机制的影响。方法:体外培养hPDLCs,以PgLPS梯度浓度进行干预,CCK-8法检测细胞活性,qRT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8、AMPK、NF-κB mRNA的表达水平,ELISA法检测上清IL-6、IL-8的浓度,Western Blot法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、核转录因子抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的蛋白活性。结果:与对照组相比,PgLPS刺激能提高细胞IL-6、IL-8分泌,降低细胞p-AMPK表达,增强p-IκBα、p-NF-κB表达,且均呈现浓度依赖性(P<0.05);AMPK、NF-κB、IL-6和IL-8的核酸表达水平(mRNA)与蛋白变化一致(P<0.05)。结论:在体外培养的hPDLCs中,AMPK/NF-κB信号通路可能参与了PgLPS诱导的炎症反应。

米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞生物活性的影响

目的 研究米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞(HPDLCs)增殖及生物合成的影响。方法 将不同浓度的米诺环素(1、5、20、100、500、2500 mg/L)加入体外培养的HPDLCs,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果 在5-100mg/L的浓度范围内,米诺环素可显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P<0.01)。但高浓度(2500 mg/L)的米诺环素则严重抑制细胞的生物学活性。结论 一定浓度的米诺环素能提高HPDLCs的生物学活性,但过高浓度的米诺环素具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。

人牙周韧带细胞膜片的体外实验研究

目的观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力;构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白。方法通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细胞分别用成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养,茜素红及油红O染色检测hPDLCs的成骨、成脂能力;制备成熟的hPDLCs膜片,苏木素-伊红(HE)及免疫组织化学染色法鉴定膜片细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白的表达情况。结果经原代培养的hPDLCs抗波形蛋白染色阳性,干细胞标志物STRO-1染色阳性,证实hPDLCs来源于间充质并具有干细胞潜在分化能力;hPDLCs在诱导成骨、成脂分化培养14～16d后,茜素红及油红O染色结果阳性提示hPDLCs具有良好的成骨及成脂分化能力;HE染色及免疫化学染色发现hPDLCs膜片高表达细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白。结论本研究从细胞分离培养,来源鉴定、多向分化潜能诱导及细胞膜片技术等方面证实PDLCs中存在成体干细胞,提示hPDLCs膜片能为牙周组织再生种子细胞提供新来源,可进一步深入研究。

人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。 方法 :取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜 ,用组织块培养法培养PDLCs。β -TCP多孔陶瓷加工成片状 ,作为细胞支架 ,将 4-7代PDLCs与 β -TCP进行体外三维培养 ,2周后观察细胞生长状况。 结果 :PDLCs在 β -TCP支架材料上附着、增殖并复层生长。结论 :β -TCP具有良好的生物相容性 。

人牙周韧带细胞成骨分化的差异表达蛋白质组学研究

目的获得人牙周韧带细胞诱导成骨分化通路中的调节蛋白，探讨牙周韧带细胞诱导成骨分化的分子机制。方法应用胶内差异双向电泳结合基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱鉴定等蛋白质组学技术筛选人牙周韧带细胞诱导成骨分化的差异表达蛋白质组。结果获得人牙周韧带细胞诱导成骨分化7d的差异表达蛋白质图谱，确认有显著差异的蛋白质斑点61个，质谱鉴定29个蛋白质，包括细胞骨架蛋白及细胞骨架相关蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、基质合成、代谢酶和信号传导等蛋白。其中一组细胞骨架蛋白及细胞骨架相关蛋白同时发生改变，与牙周韧带细胞成骨分化早期细胞骨架重组、有丝分裂和细胞迁移等过程紧密相关。结论建立了人牙周韧带细胞成骨分化早期的差异蛋白质组图谱，为牙周韧带细胞成骨分化的蛋白调控机制进一步研究提供了实验依据。

牙周韧带细胞与骨髓基质细胞表面抗原表达的比较

目的:比较骨髓基质细胞与正常人牙周韧带细胞表面抗原的表达情况,探讨牙周韧带细胞与骨髓基质细胞的关系。方法:体外培养人牙周韧带细胞及骨髓基质细胞,采用免疫组化SP法检测细胞中CD14、CD44、CD105、CD34的表达,并进行图像分析。结果:与骨髓基质细胞相似,人的牙周韧带细胞上表达CD44、CD105,不表达CD34、CD14。结论:人的牙周韧带细胞与骨髓基质细胞在表面抗原特性上有相似性。

富血小板血浆对牙周韧带成纤维细胞在牙骨质表面附着及增殖的影响

目的探讨应用富血小板血浆(PRP)对人牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)在健康牙和牙周病患牙牙骨质表面附着和增殖情况的影响。方法采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞用于实验。分别制备健康牙和牙周病患牙牙骨质块置于96孔板,附着实验在接种细胞后加入含10%PRP和不含PRP的培养液,4小时后MTT法检测附着细胞数量;增殖实验在接种细胞常规培养24小时,而后加入不含血清的培养液培养48小时,更换为含10%PRP和不含PRP的培养液,24小时后MTT法检测细胞数量;并以扫描电镜观察细胞在牙骨质表面的情况。结果附着实验中10%PRP组附着细胞数量较不含PRP组明显增多;增殖实验中10%PRP组和不含PRP组细胞数量无明显差异。结论10%PRP可促进人PDLFs在健康牙和牙周病患牙牙骨质块上的附着,但对细胞在牙骨质块上的增殖无明显影响。

基于p38 MAPK信号通路探讨山柰酚对牙周膜细胞活力、增殖和克隆形成的作用研究

目的 探讨山柰酚在人牙周韧带源性间充质干细胞(h PDL MSC)活力、增殖和克隆形成中的作用及对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法 体外培养hPDL MSC细胞系,分为0μmol·L^(-1)、0.01μmol·L^(-1)、0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)山柰酚组,SB203580组,10μmol·L^(-1)山柰酚+SB203580组。分别采用细胞计数试剂盒-8法、5-乙基-2’-脱氧尿苷法、平板克隆法、Western blotting法检测细胞活力、增殖、克隆形成及p38 MAPK通路蛋白水平。结果 药物处理48 h后,与0μmol·L^(-1)山柰酚组相比,0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)山柰酚组细胞活力升高(P <0.05),且细胞形状从细长变成更立方体;药物处理48 h后,与0μmol·L^(-1)山柰酚组相比,0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)和10μmol·L^(-1)山柰酚组EDU阳性率升高,1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)山柰酚组克隆形成数增多,10μmol·L^(-1)山柰酚组p-p38蛋白表达升高(P <0.05);与10μmol·L^(-1)山柰酚+SB203580组相比,10μmol·L^(-1)山柰酚组p-p38蛋白水平、EDU阳性率、克隆形成数较高,而SB203580组p-p38蛋白表达、细胞活力、EDU阳性率、克隆形成数较低(P <0.05)。结论 山柰酚可促进hPDL MSC细胞活力、增殖和克隆形成能力,且激活p38 MAPK通路是其分子机制之一。

SGBG/PHBV与人牙周膜细胞的生物相容性

【目的】研究溶胶-凝胶生物活性玻璃(SGBG)/聚羟基丁酸戊酸共聚酯(PHBV)与人牙周韧带细胞(PDLC)的生物相容性,为牙周组织工程支架的选择提供依据。【方法】采用组织块法培养原代人PDLC,分为浸提液组和对照组接种于96孔板,每组9孔,分别加入浓度为100%、75%、50%、25%、0%的浸提液,48 h后采用MTT比色分析法的浸提液实验对材料进行毒性评级。采用人PDLC与SGBG/PHBV体外三维培养,扫描电镜下观察细胞形态及生长情况。实验组采用SGBG/PHBV复合培养,对照组采用普通培养基培养,培养12、24、48 h后,每组取27个样本定量检测上清液碱性磷酸酶(ALP)含量。【结果】浸提液培养结果显示:毒性评级为1级和0级。扫描电镜示人PDLC在三维支架上贴附生长均良好。实验组上清液ALP含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】SGBG/PHBV对人PDLC无毒性,SGBG/PHBV和人PDLC三维培养,表现出良好的生物相容性,有望应用于进一步的牙周组织工程的研究。