氟化物对体外器官培养人牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响

目的 观察氟对牙胚细胞增殖及相关调控蛋白表达的影响。方法 采用人牙胚体外器官培养模型 ,组织学观察低浓度 (10mg·L- 1 )和高浓度 (2 5mg·L- 1 )氟对细胞增殖的影响 ;免疫组织化学及图像分析技术检测氟对细胞周期蛋白D1 (cyclinD1 )和细胞增殖核抗原 (PCNA)表达的影响。结果 氟处理组细胞增殖受抑 ,cyclinD1 和PCNA的表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 氟化物可能通过抑制cyclinD1 和PCNA的表达引起细胞增殖抑制 。

氟对体外器官培养人牙胚骨形成蛋白表达的影响

目的 通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟对分泌前期牙胚的影响 ,观察培养第 2、4、6、8天时BMP表达的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析。结果 BMP的表达主要在造釉器。成釉细胞 ,中间层细胞和星网状层细胞均有BMP表达 ,牙乳头细胞或成牙本质细胞不表达BMP。 2 5mg·L-1氟时从培养第 6天开始BMP表达增强 ;5 0mg·L-1氟时从培养第 2天到第 6天BMP的表达增强 ,培养第 8天时BMP的表达降低。

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化 ,探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法 :制备人牙胚发育各期组织标本 ,采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果 :DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞 ,在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性 ,在成釉细胞中有一过性表达 ,即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达 ,但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论 :观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化 。

体外培养的人牙胚上皮细胞的成釉分化

人表皮干细胞可以作为牙齿再生中上皮源性的种子细胞,但是其成釉分化的效率低下.本研究分离培养了人牙胚上皮细胞,利用E13.5的小鼠牙间充质与其重组,构建重组牙胚,对其成釉分化的潜能和机制进行研究.研究结果发现,体外培养的P1代人牙胚上皮细胞成釉率高达50%.随着传代次数的增加,成釉率明显下降.通过对牙上皮发育分化相关基因的表达检测和分析表明,重组牙胚成牙分化能力和成釉潜能的下降与牙上皮发育相关基因的表达状态密切相关.特别是FGF8表达水平的下调以及PITX2不同亚型在人牙胚细胞中表达量的不均衡,可能是导致人牙胚细胞成釉潜能下降并丧失的主要原因.本研究结果为理解牙齿再生过程中上皮源性的种子细胞的成釉机制提供了新的实验数据,对进一步提高表皮干细胞在牙齿再生过程中的成釉率有指导意义.

釉原蛋白在人牙胚发育不同时期表达的免疫组化研究

目的：探讨釉原蛋白在人牙胚发育不同时期的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学方法观察釉原蛋白在不同发育阶段人牙胚中的分布。结果：在前成釉细胞、基底膜及前成牙本质细胞相邻部位都呈阳性反应。牙乳头细胞及牙本质呈阴性反应。釉原蛋白分布于釉质全层，在釉质浅层及与成釉细胞界面处呈线状强阳性染色，在后期矿化成熟时，成釉细胞及釉质染色阴性。结论：釉原蛋白与成釉细胞、成牙本质细胞的分化及釉质的矿化有关。

骨涎蛋白在人牙胚和下颌骨发育中表达的研究

目的 :观察骨涎蛋白 (BSP)在人牙胚发育和分化过程中的分布情况。方法 :采用免疫组化和原位杂交的方法进行人牙胚和下颌骨中BSP的定位研究。结果 :钟状期牙胚中成牙本质细胞BSP为强阳性 ,成釉细胞、前期牙本质和釉质为阳性 ;骨组织和成骨细胞呈强阳性 ;外釉上皮、星网状层、中间层、内釉上皮和牙乳头为阴性。免疫组化与原位杂交的结果基本一致。结论 :BSP与矿化组织如牙本质、釉质、骨组织的形成和矿化有关。

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 。

细胞内信号转导分子——Smad7在人牙胚发育中的表达和意义

目的 探讨Smad7在TGF_β调节牙胚发育过程中的作用。方法 采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果 人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布与TGF_β及其特异的信号转导分子Smad2、3有相似之处。 结论 Smad7可能在TGF_β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导通路中起一定的作用。

人牙本质涎磷蛋白启动子驱动LacZ报告基因在人牙胚间充质细胞中表达

牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达是细胞向成牙本质细胞分化的标志。试图分析人DSPP启动子及构建人DSPP启动子驱动的Lac Z基因表达的报告体系,从而方便快捷检测细胞是否向成牙本质细胞分化。为了建立能表达DSPP的细胞体系,分离了人牙胚间充质细胞,并用地塞米松诱导培养液进行诱导,结果显示,该诱导培养液能有效地诱导人牙胚间充质细胞DSPP基因的表达。利用双荧光素酶报告系统对4段人DSPP基因5′上游区域(-4 000-+54、-2 500-+54、-1 447-+54和-1 027-+54)进行分析,结果显示-2 500-+54区域的启动子活性最高。5′上游区从?2 500 bp延长到?4 000 bp时,启动子活性下降;5′上游区从-2 500 bp缩短至-1 447 bp时,启动子活性下降;再次将-1 447 bp缩短至-1 027 bp时,启动子活性进一步下降。结果暗示在-4 000 bp至-2 500 bp区域存在转录抑制元件,-2 500 bp至-1 027 bp区域存在转录激活元件。用-2 500-+54启动子区域和Lac Z基因构建ph DSPP-Lac Z慢病毒报告载体,并分别在人牙胚间充质细胞和永生化人牙胚间充质细胞系ih EDMC4上检测ph DSPP-Lac Z报告载体的功能,通过X-Gal染色,结果显示在2种细胞牙向分化过程中均可检测到Lac Z基因的表达。研究构建的ph DSPP-Lac Z慢病毒报告载体可为诱导人源细胞牙向分化、牙齿发育、牙齿再生工程等研究中DSPP的表达检测提供一种更加便捷的手段。

β-Catenin和Wnt5a蛋白在人牙齿早期发育过程中的表达

以人牙胚为材料,运用免疫组织化学染色技术分别检测经典Wnt信号通路的β-Catenin和非经典Wnt信号通路的Wnt5a的表达模式.结果表明:从12 W人牙胚帽状期到15 W钟状期,β-Catenin蛋白在牙上皮细胞的表达强于牙间充质细胞,且其在磨牙细胞的表达强于门牙;随着发育的成熟,β-Catenin蛋白在内釉上皮细胞的表达增强,而在外釉上皮层和星网状层的表达降低.Wnt5a蛋白在人牙胚中的牙间充质细胞的表达强于牙上皮;从帽状期到钟状期,Wnt5a蛋白在内釉上皮层和星网状层的表达降低,β-Catenin蛋白的表达整体明显高于Wnt5a.因此,经典Wnt信号通路在人牙齿早期发育过程中发挥重要的作用.

口腔组织病理学

不同条件下细胞冻存效果比较／李洁…∥临床口腔医学杂志．蕾状期成釉器重建体外模型的建立／胡冰…∥北京口腔医学．人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆／程岚…∥上海口腔医学．牙髓培养细胞特性与牙髓干细胞定位／刘少华…∥上海口腔医学．

LRP6、APC和DVL2基因在人牙齿早期发育中的表达模式

以人牙胚为材料,通过RNA原位杂交技术检测WNT/β-CATENIN信号通路的关键因子(受体LRP6,转导因子APC和DVL2)在人牙胚的帽状期和钟状期的表达模式.此外,利用Real-time PCR技术验证这些基因在钟状期的门牙和磨牙,以及磨牙的上皮和间充质的mRNA表达水平.结果显示,LRP6、APC和DVL2基因在帽状期和钟状期人牙胚的上皮和间充质均有表达,而且APC和DVL2基因在钟状期的门牙和磨牙的表达存在差异,LRP6和APC在牙胚上皮和间充质的表达存在差异.结果提示,WNT/β-CATENIN信号通路关键因子LRP6、APC和DVL2在人牙齿发育过程中存在重要的调控作用.