脂肪间充质干细胞过表达骨形态发生蛋白2促进骨质疏松大鼠牙槽骨缺损修复

背景:颌骨在骨质疏松症中最容易受累,脂肪间充质干细胞和骨形态发生蛋白2具有促进骨质疏松症骨再生的效果,然而骨形态发生蛋白2修饰的脂肪间充质干细胞对骨质疏松症牙槽骨缺损的修复作用鲜有报道。目的:探究过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞对骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的修复作用。方法:①将过表达骨形态发生蛋白2基因的慢病毒感染大鼠脂肪间充质干细胞,通过检测绿色荧光蛋白和骨形态发生蛋白2表达进行鉴定;②切除卵巢建立骨质疏松大鼠模型,于上颌两侧第一磨牙位置制备3 mm×3 mm×3 mm的圆柱形缺损;③假手术组和骨质疏松组大鼠植入明胶海绵,脂肪间充质干细胞组植入空载体慢病毒感染的脂肪间充质干细胞与明胶海绵复合体,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组植入过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞与明胶海绵复合体,1个月后进行相关指标检测。结果与结论:①脂肪间充质干细胞组和过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组转染效率均达到70%以上;与脂肪间充质干细胞组相比,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组骨形态发生蛋白2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);②假手术组骨缺损区可见大量新骨生成;与假手术组相比,骨质疏松组有少量新骨生成,新骨面积明显减小,碱性磷酸酶、骨钙素及骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白水平明显降低;与骨质疏松组相比,脂肪间充质干细胞组和过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组有大量新骨生成,新骨面积明显增加,碱性磷酸酶、骨钙素及骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白水平明显升高,且过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组优于脂肪间充质干细胞组(均P<0.05);③结果表明,骨形态发生蛋白2在骨质疏松大鼠牙槽骨表达较少,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞能够促进骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的成骨再生。

TGF-β信号通路对牙源性黏液瘤来源的间充质干细胞成骨分化的影响分析

目的探究转化生长因子-β(TGF-β)信号通路对牙源性黏液瘤(OM)来源的间充质干细胞(OMMSC)成骨分化的影响。方法选择2018年至2020年南京大学医学院附属口腔医院收治的OM患者2例,经手术取部分病灶标本进行OMMSC分离培养。另外选择于该院接受牙种植治疗的年轻患者5例,抽取颌骨骨髓进行颌骨骨髓来源的间充质干细胞(JBMSC)分离培养。通过细胞增殖实验、流式细胞术检测、茜素红S染色进行细胞鉴定。成骨培养7 d后通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β信号通路以及成骨相关基因的表达情况。观察小分子药物SB431542及TGF-β1干预对OMMSC、JBMSC成骨分化能力的影响。结果经分离获得的OMMSC、JBMSC具有梭形形态,表达间充质干细胞表面标志物,并具有成骨分化能力,符合间充质干细胞的特征。与JBMSC相比,OMMSC具有更强的增殖能力。RT-PCR检测结果显示,TGF-β/Smad信号相关因子在OMMSC中呈高表达(P<0.05),成骨相关因子骨桥蛋白(OPN)表达降低(P<0.05)。茜素红S染色结果显示SB431542可显著促进OMMSC成骨分化,而TGF-β1对OMMSC成骨分化有抑制作用。结论该研究成功对OMMSC进行了分离,发现TGF-β信号相关因子在OMMSC中呈高表达,抑制TGF-β信号转导通路可增强OMMSC的成骨能力,为改善OM患者骨缺陷提供参考。

牙源性间充质干细胞外泌体在牙髓再生中的作用机制

牙髓再生是一种基于组织工程治疗牙髓坏死的新策略,应用种子细胞结合支架和生长因子,实现牙本质、血管和神经的新生。外泌体是一类直径约为30~150 nm的细胞外囊泡,在调控细胞间信息和物质传递中发挥重要作用。2016年以来,牙源性间充质干细胞分泌的外泌体因其在牙髓组织再生领域展现出的巨大潜力而备受瞩目。本文介绍了牙源性间充质干细胞来源外泌体的种类和培养环境,并对牙源性间充质干细胞外泌体调控细胞成牙本质向分化、血管生成、神经再生和成骨向分化的作用和机制作一综述。

PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化修复牙槽骨缺损

目的:探究PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化对牙槽骨缺损的修复作用。方法:培养骨髓间充质干细胞,(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),并转染anti-miR-132、anti-miR-NC质粒。制备BMSCs来源外泌体(bone mesenchymal stem cells-exosomes,BMSCs-exo),蛋白质印迹法鉴定表达标志物。制备PF-127水凝胶和BMSCs-Exo复合物,PKH67标记法检测BMSCs的摄取;茜素红染色检测BMSCs的成骨能力;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测细胞中miR-132表达和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)mRNA表达。建立牙槽骨缺损大鼠模型,将大鼠随机分为PF-127水凝胶组、PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组。微型计算机断层扫描(Micro-computed tomography,micro-CT)评估牙槽骨缺损情况;蛋白质印迹法检测牙槽骨组织中ALP、OCN、Runx2蛋白表达。结果:anti-miR-132组BMSCs中miR-132表达明显低于anti-miR-NC组(P<0.05),提示anti-miR-132成功转染至BMSCs中。BMSCs-exo-anti-miR-NC组和BMSCs-exo-anti-miR-132组中外泌体标志物CD9和CD63显著表达。和BMSCs-exo-anti-miR-NC组相比,BMSCs-exo-anti-miR-132组中miR-132表达明显降低(P<0.05)。和PF127水凝胶组相比,BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组中miR-132表达均明显降低,茜素红染色相对活性、细胞中Runx2、ALP和OCN mRNA表达均明显增加,且PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组BV/TV比值、BMD、Tb.N和Tb.Th及细胞中Runx2、ALP、OCN蛋白表达均明显升高,Tb.Sp明显降低(P<0.05),且PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组变化最显著。结论:PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞来源外泌体来源干扰miR-132表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而促进牙槽骨缺损大鼠的修复。

骨髓间充质干细胞外泌体调控NLRP3炎性小体对糖尿病大鼠牙槽骨缺损的机制研究

目的 探究骨髓间充质干细胞外泌体通过调控NLRP3炎性小体信号通路影响糖尿病大鼠牙槽骨缺损愈合相关分子机制。方法 选取50只SD大鼠纳入研究,随机选取10只大鼠作为对照组,其余大鼠构建糖尿病+双侧上颌牙槽骨缺损模型,设置模型组、骨髓间充质干细胞外泌体组(BMMSC-Exos组)、MCC950组(NLRP3抑制剂)、BMMSC-Exos+MCC950组,其中BMMSC-Exos组、MCC950组、BMMSC-Exos+MCC950组SD大鼠分别尾静脉注射BMMSC-Exos及MCC950试剂,模型组注射等量盐水。模型构建28d后取大鼠上颌骨组织。TEM检测BMMSC-Exos形态,Westernblot检测BMMSC-Exos标志性蛋白CD9、CD63、CD81表达。检测各组大鼠空腹血糖水平、HE染色分析各组大鼠牙槽骨炎性浸润及Lance-Sandhu评分;Western blot检测各组大鼠牙槽骨组织内NLRP3炎性小体信号通路关键蛋白(NLRP3、caspase-1、IL-1β)、骨代谢关键蛋白(OPG、ALP、Collal)表达。结果 BMMSC-Exos直径大小在100 nm左右,呈双凹圆盘状态,膜结构完整;与纯BMMSCs相比,BMMSC-Exos标志物蛋白CD9、CD63、CD81的含量表达明显提升(P <0.05)。糖尿病大鼠模型建立成功,BMMSC-Exos干预、NLRP3抑制剂(MCC950)下调大鼠血糖水平(P <0.05);两者联合可以进一步下调大鼠血糖水平(P <0.05);与对照组相比,糖尿病牙槽骨缺损模型建立可以下调骨再生Lane-Sandhu评分、OPG、ALP、Collal的表达(P <0.05),上调NLRP3、caspase-1、IL-1β表达(P <0.05);BMMSC-Exos干预可以再次上调Lane-Sandhu评分及OPG、ALP、Collal蛋白表达(P<0.05),下调NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达(P <0.05)。与模型组相比,BMMSC-Exos及MCC950干预后大鼠骨再生Lane-Sandhu评分、骨代谢关键蛋白(OPG、ALP、Collal)的表达提升(P<0.05);两者联合可进一步上调大鼠骨再生Lane-Sandhu评分及骨代谢关键蛋白表达(P <0.05)。结论 骨髓间充质干细胞外泌体通过抑制NLRP3炎症小体活性来改善糖尿病牙槽骨缺损大鼠骨代谢,降低炎症反应,促进骨缺损的愈合。

牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好早期成骨效果:基于动物模型研究

目的评估牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架的骨缺损再生修复效果。方法培养牙槽骨骨髓间充质干细胞(Al-BMSCs)膜片和长骨骨髓间充质干细胞(Lon-BMSCs)膜片,熔融沉积成型技术制作PCL/HA支架。取新西兰大白兔共9只,建立双侧下颌骨缺损模型,按植入材料将其分为PCL/HA支架组(A组)、Lon-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(B组)、Al-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(C组),3组共得到18个样本,6个/组。术后4周处死动物,取下颌骨组织,行大体观察、锥形束CT分析、HE染色和Masson染色,对各组成骨情况进行分析。结果锥形束CT结果显示C组骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于A组和B组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。HE和Masson染色显示C组成骨最为活跃,有较多的新生骨和血管形成。结论牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好的早期成骨效果,为颌面部骨缺损再生修复提供了一种新的策略。

间充质干细胞在正畸牙移动及牙根吸收中的研究进展

错畸形的发病率在我国逐年升高,正畸治疗需求增加。牙移动是正畸治疗的基础,牙根吸收是正畸治疗的常见并发症,不利于牙齿健康。正畸疗程长,如何安全有效加速牙移动、减少牙根吸收是治疗的重点。间充质干细胞具有强大的增殖能力和多种细胞分化潜能,不仅通过分化为成骨细胞和调节破骨细胞生成来参与骨改建、加速牙移动,还通过免疫调节功能及组织再生效应抑制和修复正畸牙根吸收。文章综述了不同来源的间充质干细胞对正畸牙移动和牙根吸收的影响,以为今后干细胞在正畸领域的研究提供参考。

常见牙源性间充质干细胞及其在牙周再生的应用进展

牙源性间充质干细胞是牙周组织再生工程的重要研究方向之一,主要包括DPSC、PDLSC,GMSC等。通过选择具有性能和应用优势的牙源性间充质干细胞作为种子细胞,充分发挥其诱导组织再生的能力,可在体内实现一定程度的牙周软硬组织修复效果。在牙周组织再生工程中,合适的生物医学材料常可作为载体负载牙源性间充质干细胞用于牙周炎导致的牙周支持组织缺损。本文将回顾不同牙源性间充质干细胞群体的特性及其在牙周组织再生中的应用进展。

生长因子促进牙源性间充质干细胞对疾病治疗的研究进展

迄今为止,已有多种牙源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)从具有外胚间充质来源的牙齿和牙周组织中分离出来,主要包括牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)、脱落乳牙干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)、根尖乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)、牙囊干细胞(dental follicle stem cells,DFSC)、唾液腺干细胞(salivary gland stem cells,SGSCs)等。研究表明[1],牙源性MSCs可以与生长因子产生协同作用,使疾病的干细胞治疗产生更好的效果,此类以组织工程学为基础的疾病治疗方式,已成为目前的研究热点。本文对联合生长因子的牙源性MSCs治疗的研究进展作如下综述。

外胚层间充质干细胞的获取及应用

背景:外胚层间充质干细胞是一种成体干细胞,获取便捷、来源丰富,在机体组织修复与免疫调节等方面发挥着重要作用。目的:总结综述外胚层间充质干细胞获取与应用方面的最新进展。方法:检索Web of Science数据库中相关文章,检索词为“Ectodermal mesenchymal stem cells,Stem cell therapy,Spinal cord injury,Neurodegenerative disease,sepsis”,检索要求为研究原著与综述,检索时限为数据库建库至2021年,筛选出相关文献85篇,结合文献追溯法对所得文献进行分析总结。结果与结论:①外胚层间充质干细胞来源丰富、获取简便,其来源可以是牙组织、鼻黏膜和角膜组织等。与中胚层间充质干细胞相同的是,它们都具备多系分化能力和免疫调节功能。②而外胚层间充质干细胞与牙组织与神经组织具有同源性,因此具备更好的牙细胞、神经细胞分化能力,在牙组织修复、脊髓损伤修复、神经退行性疾病治疗等方面具有独特的优势,因此具备极为广阔的应用前景。③外胚层间充质干细胞的免疫调节功能同样不能忽视,目前虽仅有少量文献报道将其应用于脓毒血症等免疫疾病,但研究发现其免疫调节机制与中胚层间充质干细胞等并无二致,同时其还具备获取方式相对低损伤性等优势,因此外胚层间充质干细胞具有极佳的临床应用前景。

Notch和Wnt信号通路在自体骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白修复兔牙槽骨缺损中的表达

目的通过建立自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合富血小板纤维蛋白(PRF)修复兔拔牙窝骨缺损的动物模型,探讨Notch和Wnt信号通路在牙槽骨缺损修复过程中的表达及意义。方法选用36只健康雄性2月龄新西兰兔,随机分为4组,均于全身麻醉下微创拔除下颌左侧中切牙。A组植入BMSCs-PRF复合物,B、C组分别植入单一PRF和BMSCs,D组未植入任何材料作为空白对照。术后4、8、12周(每个时间点3只动物)处死动物,立即在骨缺损同一部位取材,制作骨标本,利用免疫组织化学和免疫荧光染色检测骨缺损修复过程中Notch1和Wnt3a的表达情况。结果免疫组织化学染色结果显示:第4、8周,A、B、C组Notch1和Wnt3a表达均高于D组(P<0.05);第12周,D组Notch1和Wnt3a表达高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光染色显示:第4周,骨缺损区新生骨细胞Notch1和Wnt3a的表达最多,随着时间的延长,骨缺损修复完成,表达逐渐降低。结论 Notch1和Wnt3a信号分子在BMSCs复合PRF促进骨缺损修复过程中均有表达,可以通过调控BMSCs的增殖与分化加速牙槽骨缺损修复的愈合过程;二者表达情况相似,有可能存在串话机制。

处理的牙本质基质对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究

目的采用体外研究的方法评价处理的牙本质基质(TDM)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法将获取的牙本质颗粒进行梯度脱矿处理,制备TDM浸提液。分离培养人BMSCs后,将BMSCs培养于TDM浸提液中,CCK-8法检测细胞的增殖情况,培养7 d后提取细胞总蛋白采用Western blot检测成骨相关蛋白:Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Runt相关转录因子-2(Runx2)的表达情况。结果 TDM浸提液培养后,与空白对照组及羟磷灰石/β-磷酸三钙组相比,细胞增殖明显;培养7 d后,TDM组的ColⅠ、Runx2蛋白的表达量明显增高。结论TDM可以促进BMSCs的增殖及成骨向分化,提示其应用于骨组织工程的可行性。

自体骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白促进拔牙窝骨愈合（英文）

背景:牙槽骨骨量不足将不能满足种植修复的审美和功能重建的要求。目的:观察自体第3代骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白修复新西兰兔拔牙创窝骨缺损的效果。方法:将27只新西兰兔随机等分为模型组、富血小板纤维蛋白组和骨髓间充质干细胞/富血小板纤维蛋白组,均拔除下颌左侧中切牙。骨髓间充质干细胞/富血小板纤维蛋白组牙槽窝内植入自体骨髓间充质干细胞与富血小板纤维蛋白的复合物,富血小板纤维蛋白组牙槽窝植入富血小板纤维蛋白,模型组牙槽窝不植入任何材料。结果与结论:1模型组兔牙槽嵴及黏膜明显凹陷,宽度变窄;而富血小板纤维蛋白组和骨髓间充质干细胞/富血小板纤维蛋白组兔牙槽骨骨壁厚度、牙槽骨宽度、高度差值、骨密度增加,且骨髓间充质干细胞/富血小板纤维蛋白组牙槽骨骨壁厚度、牙槽骨宽度、高度差值、骨密度大于富血小板纤维蛋白组;骨髓间充质干细胞/富血小板纤维蛋白组骨小梁排列情况优于富血小板纤维蛋白组和模型组。2结果说明骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白填充在拔牙窝内能够起到促进拔牙窝骨质生长,达到促进牙槽骨生长与修复的目的。

PRF复合自体骨髓间充质干细胞修复兔牙槽骨缺损的研究

目的:观察富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)复合自体第3代骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)修复牙槽骨缺损的能力。方法:取健康雄性2月龄新西兰兔36只,随机分为4组:PRF+BMSCs组、PRF组、BMSCs组、空白对照组,均在全麻下微创拔除下颌左侧中切牙。4组实验动物分别在4、8、12周处死。取其下颌骨进行牙槽骨标本测量,X线观察,组织学观察。结果:牙槽骨标本测量比较:4组牙槽嵴宽度、高度丧失值均存在差异(P<0.05);析因分析示PRF与BMSCs复合使用修复牙槽骨的效果优于单独使用PRF或BMSCs(P<0.05)。X线、组织学观察表明术后4、8、12周时拔牙窝骨吸收程度:PRF+BMSCs组<PRF组<BMSCs组<空白对照组,PRF+BMSCs组成骨情况均优于PRF组、BMSCs组、空白对照组。结论:PRF复合自体BMSCs可以促进牙槽骨的再生与修复,具有潜在的临床应用价值。

犬自体骨髓间充质干细胞介导HA-TCP修复牙槽骨缺损的实验研究

目的:研究成年犬骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)介导羟基磷灰石磷酸三钙(hydroxyapatite-tricalcium phosphate,HA-TCP)修复犬牙槽骨缺损。方法:用密度梯度离心贴壁培养法分离纯化成年犬的MSCs,将MSCs矿化诱导为成骨样细胞后与HA-TCP支架复合。选取3只成年犬,在876︱678根分歧处分别制备长宽高均为3mm的骨缺损。左侧作为实验组,牙槽骨缺损处植入MSCs-HA-TCP复合物;右侧作为对照组,将HA-TCP植入牙槽骨缺损部位。移植后8周处死实验动物,进行组织学观察,并进行图像分析。结果:实验组新生骨组织占缺损的百分比明显高于对照组,剩余材料占缺损的百分比低于对照组,具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSCs介导HA-TCP修复成年犬牙槽骨缺损效果优于单纯的HA-TCP修复犬牙槽骨缺损。

VEGF过表达的骨髓间充质干细胞对大鼠牙槽骨缺损修复的影响

目的:探讨VEGF过表达的BMMSCs对大鼠牙槽骨损伤修复的影响。方法:分离培养及鉴定BMMSCs;VEGF过表达载体转染BMMSCs;制备BMMSCs成骨膜片并鉴定;构建大鼠牙槽骨损伤模型并植入成骨膜片;术后2、4、6、8周Micro-CT扫描牙槽骨并计算骨体积分数。结果:分离后的BMMSCs形态多为菱形;VEGF过表达的BMMSCs荧光镜下可见明显绿色荧光,且VEGF表达提高(83.1±4.8)%(P<0.05)。Vonkossa染色发现,BMMSCs成骨膜片矿化结节染色阳性,胞外局部有黑色钙结节。植入BMMSCs膜片后,第4和8周模型大鼠牙槽骨骨体积分数增加(P<0.05);与BMMSCs膜片相比,过表达VEGF的BMMSCs膜片在第4、6和8周骨体积分数增加(P<0.05)。结论:VEGF过表达的BMMSCs能增强大鼠牙槽骨损伤的修复。

过表达牙本质涎磷蛋白的骨髓间充质干细胞部分牙向和骨向分化基因的表达

目的观察小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSC)过表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)后的形态学改变,并研究其部分牙向及骨向分化基因的表达情况。方法体外培养小鼠BM-MSC,通过腺病毒介导的方式将DSPP基因转染小鼠BM-MSC,通过标记基因GFP检测转染效率,观察转染后细胞的形态学改变,RT-PCR方法检测过表达DSPP的BM-MSC有无成牙和成骨基因的mRNA表达。结果成功获得小鼠BM-MSC,经腺病毒介导的DSPP基因转染BM-MSC的转染效率可达42.7%,转染后的细胞出现分化,似成牙本质样细胞。转染后细胞表达DSPP、DMP1、Msx1/2、Pax9、Lhx6/7、Sox9、Cbfα1、Osx、Col等多种牙向和骨向发育分化基因。结论过表达DSPP的BM-MSC出现细胞分化,并可表达多种牙向及骨向发育分化的基因。

混合信号诱导的大鼠骨髓间充质干细胞与支架材料复合成牙的体内研究

目的:研究经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与骨形态发生蛋白2(BMP-2)混合信号诱导的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体内环境中与不同支架材料复合后的成牙潜能。方法:将取自SD大鼠的BMSCs与牙胚细胞在bFGF和BMP-2混合信号诱导的微环境中共培养后分别接种于明胶海绵和3D打印的PVA/DCCP复合支架材料上,然后回植入同种异体大鼠肾被膜下。在回植后的第1、3、7、14、28天采集回植体样本,用实时定量PCR(RT-PCR)检测各组样本成牙相关基因成釉蛋白(AMBN)、牙本质基质蛋白1(DMP1)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)、以及同源异型盒基因1(DLX1)mRNA水平。结果:各基因在不同时间点的表达量与完整牙胚(E组)均存在统计学差异(P<0.05);上述4个成牙相关基因的表达水平在不同支架材料组之间具有显著性差异(P<0.001);不同成牙诱导信号对各个基因的表达水平也有一定影响。结论:在体内模拟环境下,经bFGF与BMP-2混合信号诱导的大鼠BMSCs与3D打印支架材料复合后能提高成牙基因的表达水平,促进牙体组织的形成。优选支架材料并构建合适的组织工程牙模型对实现非牙胚源性细胞向牙源性细胞的转化同样具有重要意义。

骨髓间充质干细胞参与牙髓损伤修复的体内实验研究

目的:观察体内的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)能否参与牙髓损伤的局部修复,初步探讨骨髓间充质干细胞在牙髓损伤修复中的作用。方法:构建绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞(GFP-BMMSCs)嵌合SD大鼠模型,30 d后,通过流式细胞术检测外周血单核细胞和骨髓间充质干细胞中荧光细胞的比例,冰冻切片观察心、肝、肾组织中是否有荧光细胞的分布,检测模型是否构建成功。然后利用该模型,通过制备牙本质缺损构建牙髓损伤模型,分别于牙本质缺损后5、10、15 d取材,切片,HE及免疫荧光染色,观察牙髓的病理变化以及GFP-BMMSCs在牙髓组织中的分布情况和变化。结果:HE染色可见牙本质缺损组初期有牙髓充血,后期牙髓炎症逐渐恢复并有修复性牙本质形成。免疫荧光染色可见牙髓组织中有荧光细胞的分布,牙本质缺损组比正常组中可见更多的荧光细胞,且随着牙髓炎症的恢复,荧光细胞减少。结论:牙髓损伤时,骨髓间充质干细胞可以迁移到损伤的牙髓处参与其损伤的修复。

骨形态发生蛋白4慢病毒载体构建及对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能影响

目的:构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能的影响,以期为组织工程牙筛选种子细胞。方法:以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP4基因的全长cDNA,转克隆至plenti6/v5-D-TOPO表达载体,构建出BMP4-plenti6/v5-D-TOPO重组慢病毒表达载体;转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,用MTT法检测转染前后细胞的增殖活性,实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1成牙相关基因的mRNA水平相对表达量的变化。结果:BMP4基因转染后,细胞体外增殖活性增强,成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1mRNA水平表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平差异无显著性意义。结论:BMP4可提高骨髓间充质干细胞体外增殖活性和牙向分化能力。