低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。

活化α7乙酰胆碱受体促进LPS刺激的人牙髓干细胞牙/骨向分化

目的:探讨活化α7乙酰胆碱受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)联合钙离子(calcium ion,Ca^(2+)对LPS刺激的人牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)牙/骨向分化的影响。方法:分离培养DPSC,流式细胞术对DPSC进行表面标志物表达鉴定。CCK-8检测α7-nAChR激动剂PNU-282987和Ca^(2+)对DPSC增殖的影响。通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和染色筛选PNU-282987促进DPSC表达ALP活性的最佳浓度。用大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)模拟炎性微环境刺激DPSC。采用免疫印迹分析(Western blot,WB)、实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和茜素红染色等方法检测牙/骨向分化的相关蛋白:Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-I)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialoprotein,DSPP)、骨钙素(osteopontin,OPN)、ALP、核心转录因子-2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX),相关基因(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)和矿化基质表达情况。Fura-2AM用于检测细胞内Ca^(2+)流动情况。结果:CCK-8实验显示,PNU-282987浓度低于10μmol/L时对细胞增殖无抑制作用,且此浓度处理LPS刺激的DPSC后ALP活性增加最明显;Ca^(2+)浓度低于2 mmol/L对细胞增殖无抑制作用;Western blot和RT-qPCR实验显示,PNU-282987及Ca^(2+)处理后的LPS刺激的DPSC牙/骨向分化相关蛋白(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)和相关基因(COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX)的表达及矿化基质形成均明显上调,二者联合后上调最显著(P <0.001)。Fura-2 AM钙离子探针结果显示DPSC细胞内Ca^(2+)浓度增加。结论:10μmol/L PNU-282987联合2 mmol/L Ca^(2+)可以促进LPS刺激的DPSC的牙/骨向分化能力。

PDGFD对人牙髓干细胞迁移及成牙本质向分化的作用

目的:探讨人重组血小板来源的生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGFD)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)迁移及成牙本质向分化的作用。方法:利用酶解法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定所培养的间充质干细胞表面分子标志物的表达,诱导hDPSCs三系分化并使用相应染色鉴定,以表征其多向分化潜能。应用细胞划痕实验检测PDGFD对hDPSCs迁移能力的影响,利用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测PDGFD对hDPSCs成牙本质相关mRNA及蛋白表达的影响,利用碱性磷酸酶(alkaline phosphataseI,ALP)和茜素红(alizarin red staining,ARS)染色检测PDGFD对hDPSCs矿化的影响。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:细胞形态学分析、流式细胞术鉴定和三系分化结果显示,所分离得到的细胞符合hDPSCs特征,并且具有多向分化潜能。细胞划痕实验结果表明,12 h时,仅50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的迁移能力有影响;24 h时,10和50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的迁移能力均有影响。PCR结果显示,10与50 ng/mL的PDGFD均对hDPSCs的成牙本质分化有促进作用,50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的成牙本质分化更为显著。蛋白免疫印迹实验、ALP及ARS染色所得结果和PCR结果相同。结论:成功分离并培养了具有典型间充质干细胞表型和多向分化潜能的hDPSCs。10和50 ng/mL浓度的PDGFD对hDPSCs的迁移和成牙本质向分化均有促进作用,其中50 ng/mL的PDGFD的促进作用更为显著。

重组人生长激素促进人牙髓干细胞的成骨分化

背景:既往研究表明人牙髓干细胞具有良好的成骨分化潜能,是骨组织工程中潜在的种子细胞,目前重组人生长激素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化的作用尚不明确。目的:探究重组人生长激素对人牙髓干细胞增殖及成骨分化的影响。方法:采用组织块培养法分离培养人牙髓干细胞,根据药物浓度梯度筛选后,选取10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素干预为实验组,正常培养基培养为对照组。在干预后第1,3,5,7天采用CCK-8法检测人牙髓干细胞的增殖情况。选取含10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素的成骨诱导液干预人牙髓干细胞,在诱导第7天,采用碱性磷酸酶染色及其半定量分析法检测碱性磷酸酶活性,采用荧光定量RT-qPCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的mRNA表达,在诱导第14天,采用茜素红染色观察成骨矿化情况。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,从干预第3天开始,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素均能促进人牙髓干细胞增殖,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);②与对照组比较,100,250,500μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.01);100,250μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的茜素红染色矿化结节数显著增多(P<0.01);250μg/L重组人生长激素组Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素的mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01),100,250μg/L重组人生长激素组Runt相关转录因子2的mRNA表达量升高(P<0.01);③上述结果表明,250μg/L重组人生长激素更适合促进人牙髓干细胞增殖和成骨分化。

Epi-1对脂多糖诱导人牙髓干细胞炎症反应的影响

目的研究生物活性肽Epi-1在脂多糖(LPS)诱导下的炎症微环境中对人牙髓干细胞(hDPSC)表达炎症因子的影响和可能机制。方法通过组织块酶消化法分离、培养hDPSC,并通过流式细胞术鉴定。利用CCK-8试剂检测Epi-1对hDPSC细胞活性的影响,筛选出适宜的浓度。实验分为4组,分别为空白对照组(不含LPS和Epi-1)、LPS组(1.0μg/mL LPS)、2.5μg/mL Epi-1组(1.0μg/mL LPS和2.5μg/mL Epi-1)和5.0μg/mL Epi-1组(1.0μg/mL LPS和5.0μg/mL Epi-1),通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测Epi-1对hDPSC白介素(IL)-6、IL-1β、IL-8基因表达的影响,进一步通过蛋白质免疫印迹法检测核因子κB信号通路关键蛋白p65、p-p65的表达情况,使用荧光探针检测活性氧生成情况。采用SPSS 22.0分析数据。结果在2.5、5.0μg/mL的质量浓度下,Epi-1无明显细胞毒性;Epi-1可显著降低LPS诱导后hDPSC中IL-6、IL-1β、IL-8的mRNA表达(P<0.01),减少p-p65的表达(P<0.05)和活性氧的生成(P<0.001)。结论Epi-1可能通过抑制核因子κB信号通路的激活和减轻氧化应激反应,从而降低LPS诱导的hDPSC的炎症反应。

抑制连接蛋白43介导半通道活性促进脂多糖诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成牙本质分化过程中的作用和机制。方法:建立SD大鼠上颌第一磨牙损伤模型,免疫荧光(im munofluorescence,IF)染色检测Cx43在牙髓组织损伤后修复中的表达模式变化。分别采用0、1、10、100和1 000 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,筛选最适浓度,随后抑制和过表达hDPCs中Cx43的表达。实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法检测Cx43和成牙本质分化相关因子牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP-1)、成骨相关转录因子(osterix,Osx)表达及细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)活性变化。进一步对hDPCs施以特异性Cx43通道抑制剂,检测Cx43介导的通道活性在hDPCs成牙本质分化中的作用,初步探讨Cx43调节LPS诱导的hDPCs成牙本质分化的作用和机制。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学处理。结果:IF结果显示,在健康牙髓组织中,Cx43主要表达于成牙本质细胞层,牙损伤3~24 h,Cx43表达减弱,随后逐渐上调,直至正常水平;损伤后3天~2周,表达呈下调趋势,并且表达于成牙本质细胞层和固有牙髓中。以10 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,可显著上调DSPP的mRNA表达(P<0.01)。抑制Cx43,可显著上调hDPCs内LPS诱导的DSPP、DMP-1和Osx mRNA表达(P<0.05);过表达Cx43,则显著抑制LPS诱导的成牙本质分化相关因子表达(P<0.01)和DSPP荧光强度。以10 ng/mL LPS激活hDPCs内ERK信号,过表达Cx43可显著减弱LPS诱导的ERK信号活性(P<0.01)。抑制Cx43介导的半通道,促进LPS诱导的hDPCs成牙本质分化相关因子mRNA表达和ERK信号活性(P<0.05);而阻断Cx43介导的细胞间通道,则抑制成牙本质分化。结论:Cx43参与调控牙髓组织的损伤后修复,并且其表达整体呈下调趋势;抑制Cx43或阻断HC,可促进LPS诱导的ERK信号活性和hDPCs成牙本质分化。

大黄素调节HMGB1/TLR4信号通路对脂多糖诱导的人牙髓成纤维细胞焦亡的影响

目的:探讨大黄素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙髓成纤维细胞(HDPFs)焦亡的影响。方法:分离培养HDPFs,筛选大黄素最佳浓度,随机将HDPFs分成control组(正常培养)、LPS组、大黄素低、中、高剂量组、pcDNA组(转染pcDNA3.1)和pcDNA-HMGB1组(转染pcDNA3.1-HMGB1),qRT-PCR检测细胞中HMGB1 mRNA表达水平,MTT法、平板克隆实验、流式细胞仪分别检测细胞增殖和焦亡;ELISA检测细胞上清中IL-18、IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测细胞中焦亡蛋白Nod样受体蛋白3(NLRP3)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)及HMGB1、TLR4蛋白表达。结果:与control组比较,LPS组细胞HMGB1 mRNA水平、焦亡率、IL-18、IL-1β、TNF-α水平、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD、HMGB1、TLR4蛋白水平显著升高,A 490值、集落形成数显著降低(P<0.05);与LPS组比较,大黄素低、中、高剂量组细胞中以上各项指标水平显著降低,A 490值、集落形成数显著升高,其中大黄素高剂量组变化更显著(P<0.05);过表达HMGB1减弱了大黄素对LPS诱导的HDPFs细胞焦亡和炎症的抑制作用,及对细胞增殖的促进作用(P<0.05)。结论:大黄素通过抑制HMGB1/TLR4通路,抑制NLRP3炎症体活化,从而减轻LPS诱导的HDPFs细胞焦亡。

脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性变化;培养7,14,21 d应用茜素红(AR)染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果①CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低(P<0.05)。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d,TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异;培养21 d,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低(P<0.05)。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21 d后,相比0 ng/mL组,1 ng/mL,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组ALP染色变浅,且ALP活性降低(P<0.05)。②CCK-8实验显示不同浓度LPS作用hDPSCs 24 h和48 h后细胞增殖活性没有明显差异,而1μg/mL和10μg/mL组LPS作用hDPSCs 72 h后OD_(450)值大于0μg/mL组(P<0.05)。ALP成骨诱导染色显示培养7,14,21 d,不同浓度LPS作用后ALP染色和ALP活性变化不明显。AR成骨诱导染色显示培养7 d,LPS各浓度组的矿化程度不明显;10μg/mL LPS培养14,21 d矿化程度较0μg/mL低(P<0.05)。结论LPS对hDPSCs成骨分化的影响取决于LPS浓度和作用时间,高浓度LPS促进hDPSCs增殖。TNF-α抑制hDPSCs的增殖和成骨分化。

模拟微重力对人牙髓干细胞微丝及细胞迁移能力的影响

目的:探讨模拟微重力对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)微丝及迁移能力的影响。方法:利用旋转培养系统(rotary cell culture system,RCCS)将HDPSCs分为常规对照组和微重力培养组,分别于4、12、24、48、72h行免疫荧光染色,观察微丝的变化;72h后,透射电镜观察微丝骨架变化及细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:4h时即有粗大的微丝纤维束解聚,24～72h变得模糊,紊乱,且出现多向排列趋势;实验组细胞迁移数量少于对照组(P<0.05)。结论:人牙髓干细胞微丝在模拟微重力环境下发生改变,呈时间依赖性并使细胞迁移能力降低。

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的 :探讨 b FGF和 TGF-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响。方法 :采用 MTT法分别测定了 b FGF和 TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及 DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓干细胞分化能力的影响。结果 :0～ 40 ng/ m L范围内 ,b FGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖 ,且具有浓度和时间依赖性 ,而 TGF-β促增殖作用较弱 ;两者联合作用 ,促增殖作用无显著提高 ,而促分化作用显著增强 ,不仅细胞形态明显改变 ,而且碱性磷酸酶活性显著提高 ,DSP、DMP-1呈阳性表达 ,向成牙本质细胞样细胞分化。结论 :b FGF和 TGF-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用 ,为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。

IL-6对人牙髓细胞、牙周膜细胞生长影响的实验研究

目的：了解ＩＬ－６对构成牙髓、尖周组织主要细胞生长的影响，揭示ＩＬ－６在牙髓、尖周病变过程中的作用。方法：应用细胞培养技术，采用ＭＴＴ比色法进行细胞生长及存活状态测定。结果：ＩＬ－６抑制牙髓细胞、牙周膜细胞的生长，并呈时间和剂量依赖关系，两细胞间无显著差异。结论：ＩＬ－６可能对牙髓。

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异。方法组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异。结果不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用。HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附。

SHH和bFGF体外诱导人牙髓干细胞向神经细胞分化的研究

目的:研究体外使用音猬因子(SHH)、碱性成纤维生长因子(bFGF)体外诱导人牙髓干细胞(DPSCs)分化为神经细胞的可行性,以优化人牙髓干细胞向神经细胞分化的诱导条件。方法:从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第三磨牙中提取牙髓,采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液,有限稀释法培养分离的原代人牙髓干细胞,并进行克隆化培养,检测间充质干细胞特异性标志物STRO-1的表达。将人牙髓干细胞分别接种于含有不同浓度诱导液,MTT法检测不同时间、两种因子单独或联合对细胞增殖能力的影;免疫荧光法检测抗微管相关蛋白(MAP-2)、神经元烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。透射电镜观察诱导前后细胞超微结构。结果:克隆来源细胞的间充质干细胞特异性标志物STRO-1表达阳性。100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF单独作用促增殖作用最强(P<0.05),碱性成纤维生长因子bFGF单独作用各组及对照组均未检测出神经元样细胞。音猬因子SHH作用各组检测到阳性细胞。而100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF联合增殖和分化作用均优于其它组。透射电镜观察到神经元样细胞表现。结论:100μg/L音猬因子和20μg/L碱性成纤维生长因子联合可以在体外有效诱导人牙髓干细胞分化为神经细胞。

人牙髓干细胞的体外培养及神经样诱导分化

背景:牙髓组织来源干细胞的发现及概念的确立有助于从细胞水平上认识牙齿发育和再生修复机制。目的:了解人牙髓干细胞向神经元样细胞诱导分化能力和诱导分化条件。方法:取健康青年人的第三磨牙的牙髓组织后,制成单细胞悬液,加入含有体积分数为15%胎牛血清α-MEM培养基在6孔板培养,传代培养后加入丁羟基茴香醚、forskolin、β-巯基乙醇、碱性成纤维细胞生长因子诱导剂进行培养。结果与结论:免疫荧光和反转录-聚合酶链反应检测显示,诱导2周后人牙髓细胞除了stro-1,Col-Ⅰ,牙本质涎蛋白表达阳性外,还有巢蛋白,神经元特异性烯醇化酶的表达也是阳性,而牙龈纤维细胞表达均为阴性。说明人牙髓组织中存在成体干细胞,在一定的诱导培养条件下,牙髓干细胞有向神经元样细胞分化的潜能。

牙本质粘结剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的:评价全酸蚀牙本质粘结剂和自酸蚀牙本质粘结剂对人牙髓细胞的毒性作用。方法:用人牙髓细胞为实验细胞,采用MTT比色分析法,对4种牙本质粘结剂(Prime&Bond NT,Single Bond,XenoⅢ,iBond)进行体外细胞毒性研究。结果:不同浓度的粘结剂稀释液均可使人牙髓细胞的形态有所改变。4种牙本质粘结剂的细胞毒性有显著性差异,且作用时间和浓度的改变对其细胞毒性有影响。全酸蚀粘结剂比自酸蚀粘结剂的细胞毒性强。结论:4种牙本质粘结剂在体外对人牙髓细胞均有一定程度的细胞毒性,其中Single Bond的毒性较强,临床使用粘结剂时应合理选择粘结剂和掌握固化时间。

黄芩苷对LPS诱导人牙髓细胞TLR4表达及TNF-α分泌的影响

目的:研究脂多糖(LPS)诱导人牙髓细胞(HDPCs)炎症信号受体——Toll样受体4(TLR4)表达、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌情况以及黄芩苷对其的影响,并探讨黄芩苷可能的细胞保护作用机理。方法:采用组织块法原代培养人牙髓细胞,免疫组化技术鉴定细胞来源,流式细胞术(FC)与酶联免疫法(ELISA)分别检测TLR4与TNF-α的表达。结果:正常HDPCs微量表达TLR4与TNF-α;100μg/mLLPS诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α显著增加(P<0.01);与对照组比较,10μg/mL黄芩苷诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α,差异无统计学意义(P>0.05);0.001～20μg/mL黄芩苷均可抑制LPS诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α,随着黄芩苷浓度升高,TLR4与TNF-α表达逐渐降低,且不同浓度组间比较,抑制作用有显著性差异(P<0.01)。结论:LPS可能通过TLR4信号受体参与牙髓组织炎症过程。黄芩苷可抑制由LPS诱导的TLR4表达及TNF-α分泌,对LPS引起的牙髓炎可能具有潜在的治疗作用。

牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF的表达

目的:研究牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF基因的表达变化,探讨HIF-1α和VEGF与正畸牙髓组织维持内环境稳定的关系。方法:通过细胞牵张应力加载系统,对细胞施加频率为1.0 Hz、大小为15%形变率的牵张应力,分别加力6 h、12 h、24 h、48 h和72 h。实时定量PCR检测不同时间点HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化。采用SPSS12.0软件包对数据进行统计学分析。结果:未加力前,HIF-1αmRNA表达极其微弱;加力6 h时,表达开始升高(P<0.05);持续增加至24 h时,表达最显著(P<0.05);加力48 h时,表达缓慢下降(P<0.01);至加力72 h时,表达下降至未加力前(P>0.05)。未加力前,VEGF mRNA表达微弱,加力6 h表达开始升高,但无显著差异(P>0.05);加力12 h时,VEGF mRNA表达开始明显增强(P<0.05),持续增加至72 h加力结束时(P<0.05)。结论:牵张力可诱导人牙髓细胞HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化,两者可能在维持正畸受力后牙髓内环境稳定中发挥重要作用。

中药骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞体外增殖的实验研究

目的：探讨中药骨碎补对体外培养的人的牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块法外培养人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞，取第4、5代培养细胞随机分为实验组和对照组，实验组加不同浓度的骨碎补，对照组只加培养液。通过HE染色观察其对牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞的形态、结构及生长增殖的影响，通过MTT法和考马斯亮蓝法对实验组和对照组的细胞生长情况和总蛋白合成的检测。结果①在10-1000μg/ml浓度范围内骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞均有促增殖作用（ P ＜0.05），尤以100μg/ml浓度最为明显（ P ＜0.01）；②总蛋白测定结果显示在骨碎补浓度为10μg/ml时，对照组与其总蛋白含量差异无统计学意义（ P ＞0.05），实验组细胞总蛋白含量随骨碎补浓度增加高于对照组（ P ＜0.05），尤以500μg/ml骨碎补浓度组作用牙髓成纤维细胞最佳；而100μg/ml骨碎补浓度组作用牙龈、牙周膜成纤维细胞最显著。结论骨碎补在有效作用浓度范围内，其促增殖效应和总蛋白含量与骨碎补浓度呈剂量依赖关系，随着浓度的增加促增殖作用增强、总蛋白含量增加，浓度达到最大作用后，随着浓度增加作用反而呈现减弱趋势。

NLRP3、Caspase-1炎症体通路在人牙髓成纤维细胞中表达和相关调控因素的初步检测

目的:研究人牙髓成纤维细胞(human dental pulp fibroblasts,HDPF)中炎症体NLRP3、Caspase-1基因和蛋白的表达和相关调控因素。方法:分别利用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测NLRP3、Caspase-1、P2X7、IL-1β基因和NLRP3、Caspase-1蛋白在正常HDPF中的表达情况;利用荧光实时定量PCR检测变异链球菌和ATP刺激后,HDPF中NLRP3、Caspase-1、P2X7、IL-1β基因表达的变化。结果:NLRP3、Caspase-1蛋白和NLRP3、Caspase-1、P2X7、IL-1β基因在正常HDPF中均有表达;HDPF经ATP和变异链球菌共同刺激后,NLRP3、Caspase-1、P2X7、IL-1βmRNA表达水平均明显升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而单独ATP或变异链球菌刺激后,各基因的表达水平变化不明显(P>0.05)。结论:在正常HDPF中存在着NLRP3、Caspase-1炎症体通路;ATP和变异链球菌共同刺激能调节NLRP3、Caspase-1炎症体通路。

富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响及机制。方法从人牙髓组织中分离出人牙髓干细胞(h DPSCs),h DPSCs随机分为对照组及实验组,CCK8实验检测PRF刺激h DPSCs第0、1、3、5及7天时细胞增殖情况;RT-PCR检测PRF刺激h DPSCs第0、3、7及14天时碱性磷酸酶(ALP)的m RNA表达情况;流式细胞仪检测PRF刺激h DPSCs 7 d后细胞的凋亡情况,Western blotting检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、p38、p-p38蛋白表达。结果实验组第1天时细胞的增殖与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),第3、5、7天时细胞的增殖均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);实验组第3天时ALP mRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),第7和14天时ALP mRNA表达均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白、p-p38蛋白表达实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),实验组细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均下降,p-p38蛋白表达上调,p38蛋白表达两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PRF可促进hDPSCs的增殖,上调ALP的mRNA表达,抑制其凋亡,其机制与激活p38信号通路有关。