人牙髓组织中TLR-2的表达研究

目的探讨Toll样受体-2(TLR-2)在人牙髓组织中的分布与表达。方法对10颗健康牙髓和10颗炎症牙髓分别进行免疫组化和逆转录实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测,研究TLR-2的分布与表达。结果 TLR-2在健康人牙髓组织中表达呈阴性,在炎症牙髓组织中表达呈阳性。炎症牙髓组织中TLR-2阳性表达率显著高于健康牙髓组,差异有统计学意义(P<0.01)。2组牙髓组织标本总R N A R T-PCR扩增产物电泳显示,炎症牙髓标本均在β-actin条带之上368bp位置出现条带,而健康牙髓标本未见对应条带。结论 TLR-2在炎症牙髓组织中存在弱阳性表达,提示TLR-2可能参与了人牙髓组织的炎症和免疫反应。

S-100蛋白和胶质酸性蛋白在人牙髓组织中表达的研究

目的：观察Ｓ－１００蛋白和胶质酸性蛋白（ＧＡＦＰ）的阳染神经纤维在人第三磨牙的分布。方法：免疫组化染色。结果：Ｓ－１００蛋白的阳性神经纤维广泛分布于牙髓组织，在牙髓中央区其表现为神经束，或环绕于血管壁，在牙髓的周边形成神经网，少许神经末稍进入成牙本质细胞层或前期牙本质。在龋坏牙本质下的成牙本质细胞下层有较多的神经分布。ＧＡＦＰ的阳性纤维分布类似于Ｓ－１００蛋白阳性纤维。结论：Ｓ－１００蛋白和ＧＡＦＰ阳染可显示人牙髓神经纤维支配。

不同年龄段牙髓组织比例及牙髓干细胞分布的实验研究

目的通过观察不同年龄段前磨牙及第三磨牙牙髓占牙齿的比例,及干细胞分布情况,评估牙齿组织工程临床适宜的选材标本。方法临床收集不同年龄段因正畸或其他原因拔除的无龋坏、无牙周疾病等的健康前磨牙及第三磨牙,分别称重牙齿及牙髓并计算比例。扫描电镜观察牙髓表面形态。脱钙后病理切片观察,牙髓组织内成牙本质细胞层完整与否,观察细胞与纤维成分比例;阿尔新蓝-希尔红染色,偏振光显微镜观察有无双折射现象;免疫组化染色观察,间充质干细胞特异性标记物STRO-1以及成牙本质相关蛋白牙本质涎蛋白DSP的表达情况,评估牙髓干细胞在牙髓组织中的分布情况。结果随着年龄的增长,前磨牙及第三磨牙牙髓占牙齿比例逐渐缩小,11～20岁年龄段与31～40岁、41～50岁,以及50岁以上年龄段比较,有统计学差异。扫描电镜下可见摘除的牙髓组织类似树桩,有些区域比较平滑,有些区域表面有不规则突起。牙髓组织内存在双折射。STRO-1阳性表达细胞在牙髓组织中散在分布,在血管周围较密集。DSP表达则主要集中在牙本质区域及成牙本质细胞内,牙髓内仅有少量表达。结论随着年龄的增长,牙髓逐渐萎缩,牙髓干细胞的分布集中于血管周围,在牙髓组织内散在分布,未分化的牙髓干细胞不表达成牙本质相关蛋白DSP。

牙髓干细胞研究进展

干细胞是一类具有自我更新、高度增生能力和多相分化潜能的细胞,能够产生高度分化的功能细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前,已在体外成功地扩增出人体多种组织的成体干细胞,自从2000年Gronthos等[1]发现人牙髓组织中存在成体干细胞即牙髓干细胞（dental pulp stemcells,DPSCs）后,近十年来国内外学者对牙髓干细胞的培养、生物学特性、细胞表型、分化能力及重组为诱导性多潜能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）等方面已进行了大量研究,本文就牙髓干细胞的研究现状综述如下。

成体人牙髓干细胞的分离与鉴定

目的从成体人牙髓组织中分离培养牙髓干细胞,初步探讨其分化潜能。方法选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙,取出牙髓,采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液,有限稀释法原代培养。扩大培养细胞克隆,检测STRO1的表达。体外诱导分化后对各克隆从碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节形成、牙本质涎蛋白(DSP)表达、OilRedO染色、PPARr2基因表达等方面进行检测。结果克隆来源细胞STRO1表达阳性。在矿化液诱导下,克隆细胞呈现明显高的ALP活性;能够形成矿化结节;可以分泌表达DSP,已向成牙本质细胞方向发生了分化。成脂肪诱导后,OilRedO染色阳性,可检测到PPARr2基因表达。结论从成体人牙髓组织中可以分离培养出干细胞,在体外能有效增殖并保持低分化状态。