美洲大蠊提取物抑制LPS诱导的人牙龈细胞与牙周膜细胞的炎症反应

目的:探讨美洲大蠊提取物( PAE)对脂多糖( LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞( HGFs)和牙周膜细胞( HPDLCs)炎症反应的影响及潜在的作用机制。方法:分别将原代培养的HGFs 和HPDLCs 分为对照组、LPS 组( 1 μg /ml)和PAE 干预组。通过MTT、ELISA 及免疫细胞染色法检测各组细胞活性及炎症反应。结果:各组细胞存活率没有显著性差异;LPS 可显著升高HGFs和HPDLCs 的Toll 样受体4( TLR4)与基质金属蛋白酶2( MMP2)表达、核转录因子-κB-p65( NF-κB-p65)核内转及白细胞介素6( IL-6)含量;PAE 对LPS 介导的2 种人源牙周病体外细胞模型的炎症反应均有浓度依赖性的抑制作用,其中PAE 对HGFs 与HPDLCs 炎症反应的有效抑制浓度分别为2 mg /ml 与0. 2 mg /ml。结论: PAE 能有效抑制LPS 激活的HGFs 和HPDLCs 炎症反应,其机制可能与抑制TLR4 /NF-κB 信号通路有关。

车前草苷通过抑制NF-κB/IL-6信号通路减弱LPS诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应

目的:探究车前草苷(PMS)通过抑制核因子-κB(NF-κB)/白细胞介素-6(IL-6)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应的影响。方法:将培养的人牙龈成纤维细胞(HGnF)随机分为:对照组、模型组(10mg/L LPS)、PMS低、高剂量组(50、100μg/mL PMS+10mg/L LPS)、激活剂组(10μM BAY11-7085+10mg/L LPS)、PMS高剂量+激活剂组(10μM BAY11-7085+100μg/mL+10mg/L LPS)。CCK-8法检测HGnF细胞活力,ELISA法检测HGnF细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)含量,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β及NF-κB/IL-6信号通道相关蛋白表达水平。结果:低、高剂量PMS可升高LPS诱导的HGnF细胞活力,降低上清液IL-1β、IL-6、IL-18含量、细胞IL-1β、iNOS及p-NF-κB/NF-κB、IL-6表达水平(P<0.05);激活剂BAY11-7085逆转了高剂量PMS对LPS诱导的HGnF细胞的上述指标的作用(P<0.05)。结论:PMS可能通过抑制NF-κB/IL-6信号通路改善由LPS诱导HGnF细胞的炎症。

电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞的影响

目的探讨电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的影响,为种植基台表面改性设计提供实验依据。方法根据试样不同表面进行分组:NC组(阴性对照,光滑表面无其他处理)、NM-1组(纳米网-1,1 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)、NM-2组(纳米网-2,5 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)。扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)观察不同试样表面形貌及HGFs在其表面的黏附状态,接触角测量仪测定试样表面亲水性。CCK-8评估HGFs在不同试样表面的增殖情况;qRT-PCR检测HGFs在不同试样表面Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COL1A1)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COL3A1)、纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、黏着斑蛋白(vinculin,VCL)、整合素α2(integrinα2,ITGA2)、整合素β1(integrinβ1,ITGB1)等黏附相关基因表达水平;免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察HGFs在不同试样表面vinculin蛋白表达情况;天狼猩红染色评价HGFs在不同试样表面胶原纤维分泌合成情况。结果SEM观察到NM-1组和NM-2组表面形成有序均一的三维网状结构,网格直径NM-1组约为30 nm,NM-2组约为150 nm;NM-1组和NM-2组对比NC组,水接触角显著下降(P<0.0001);NM-1组细胞增殖能力较NC组显著提高(P<0.01),NM-1组和NM-2组的水接触角及细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。SEM镜下可见HGFs黏附24 h后在各组试样表面均黏附良好,NM-1组和NM-2组细胞与NC组对比伸展面积更大,形态纤长,细胞伪足更发达。qRTPCR结果显示NM-1组中COL1A1、COL3A1、FN1、FAK、VCL等黏附相关基因表达水平显著高于NC组和NM-2组(P<0.01)。vinculin蛋白免疫荧光结果表明,NM-1组vinculin蛋白表达水平最高,单个细胞黏着斑数量最多(P<0.01)。天狼猩红染色结果显示NM-1组胶原纤维分泌合成量最高(P<0.0001)。结论Ti6Al4V经电化学脱合金改性后所构建的三维纳米网状结构有促进HGFs黏附增殖和胶原分泌合成的作用,其中网格直径约为30 nm的NM-1组对HGFs的促进作用明显。

灯盏花素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞损伤的影响

目的探讨灯盏花素(breviscapine,BVP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(porphyromonas gingivalis,Pg-LPS,简称LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)损伤的影响。方法体外培养HGFs细胞,分为对照组、LPS组、LPS+BVP低、中、高剂量组。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)及凋亡相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;TBA比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;二氢荧光素二乙酸酯(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组比较,LPS组HGFs细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+BVP低、中、高剂量组细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著降低(P<0.05)。结论BVP可通过抗炎、抗氧化作用减轻LPS诱导的HGFs细胞损伤。

细菌脂多糖诱导人牙龈上皮细胞β防御素-4表达的实验研究

目的观察不同浓度细菌脂多糖(BLPS)作用下原代培养的人牙龈上皮细胞(HGECs)β防御素-4(BD-4)的表达。方法体外原代培养HGECs,经免疫细胞化学鉴定,加入10、20、40、80、160μg/m L的BLPS,采用免疫组织化学和Western blotting检测BD-4蛋白在HGECs中的定位和表达变化。结果 HGECs组织块法原代细胞生长状态好,第3代细胞进行鉴定,Ck(AE1/AE3)(+)/Vimentin(-)。HGECs免疫细胞化学染色结果显示,HGECs胞浆可见棕黄色颗粒状着色,阳性染色弥漫分布于胞浆,随着BLPS浓度的增加表达更为强烈。Western Blotting结果显示,BD-4表达水平随BLPS浓度增加而增高。BD-4蛋白在BLPS浓度为160μg/m L表达的值最高,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论随着BLPS对牙龈上皮炎症刺激加重,BD-4表达增强,提示了BD-4在牙周炎症进程中的作用。

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形 。

新型牙髓治疗材料iRoot BP Plus对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的：比较新型牙髓治疗材料i Root BP Plus与矿物三氧化物凝聚体（mineral trioxide aggregate,MTA）对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性。方法：采用四甲基偶氮唑盐（methyl-thiazol-tetrazolium,MTT）法测定上述2种材料不同浸提时间（1、3、7 d）的浸提液原液及不同浓度稀（1：2、1：5）释液对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖的影响。细胞增殖率以x±s表示,采用SPSS20.0软件包对数据进行析因设计的方差分析。结果：i Root BP Plus和MTA的浸提液原液及不同浓度稀释液作用后的细胞增殖率界于77.31%~113.82%,细胞毒性分级为0或1级,评价结果为无细胞毒性。不同时间点、不同稀释度下,2种材料对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖率的影响无显著差异（F浓度＊时间＊材料=1.393,P=0.256）。结论 ：i Root BP Plus与MTA均对体外培养的人牙龈成纤维细胞无细胞毒性。

一氧化碳对肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β共同诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响

目的研究一氧化碳对炎性环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响。方法以50 ng.mL-1的肿瘤坏死因子(TNF)-α和10 ng.mL-1的白细胞介素(IL)-1β刺激加入或不加入500μmol.L-1一氧化碳释放分子(CORM)的人牙龈成纤维细胞,用Western blot法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1的蛋白表达,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测黏附分子的mRNA表达,用瞬时转染和报告基因测定法分析NF-κB的活性。结果TNF-α和IL-1β共同刺激后,人牙龈成纤维细胞ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达和蛋白表达均显著增强。CORM的加入可显著抑制ICAM-1和VCAM-1的表达。CORM可显著降低ICAM-1和VCAM-1诱导的NF-κB的活性。结论一氧化碳有可能成为牙周病治疗的一种极具潜力的新物质。

蜂胶对牙龈卟啉单胞菌及牙龈成纤维细胞的影响

目的了解蜂胶对牙龈卟啉单胞菌（porphyromonas gingival，Pg）生长的抑制作用及对人牙龈成纤维细胞的毒性作用。方法采用液体稀释法测定蜂胶对Pg的最小杀菌浓度（MBC），用MTT法测定不同浓度蜂胶作用24h后牙龈成纤维细胞的细胞相对增殖率（RGR），了解蜂胶作用24h后细胞连续7d的增殖回复情况。结果蜂胶对取的MBC为1．56g／L，相当于0．125～0．25mg／L的奥硝唑。蜂胶浓度为MBC时RGR达到70％以上；4g／L蜂胶组的RGR为52．1％，作用细胞24h后，连续7d细胞数持续增加，吸光度逐渐接近阴性对照组。结论蜂胶对Pg的生长有显著抑制作用，且细胞毒性较小，毒性作用可逆。

排龈药物对体外培养人牙龈成纤维细胞的毒性比较

目的评价6种常用的排龈药物对人牙龈成纤维细胞(HGF)毒性作用的大小,以指导临床选择最佳排龈药物。方法将6种不同体积分数的排龈药物(20%硫酸铝、5%硫酸铝、15.5%硫酸铁、13.3%硫酸铁、0.1%盐酸肾上腺素、0.01%盐酸肾上腺素)分别作用于体外培养的HGF,MTT比色法测定细胞的损伤与增殖,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果所有实验药物均能引起细胞的直接损伤与增殖抑制,细胞毒性由小到大分别是0.01%盐酸肾上腺素、0.1%盐酸肾上腺素、5%硫酸铝、20%硫酸铝、硫酸铁,2种体积分数的硫酸铁毒性比较差异无统计学意义(P>0.01)。透射电镜显示2种体积分数的盐酸肾上腺素及5%硫酸铝可引起细胞器数量减少,线粒体及内质网肿胀;20%硫酸铝造成细胞水肿明显,细胞核和染色质分布不均匀;硫酸铁可导致细胞变性。结论0.01%盐酸肾上腺素细胞毒性作用最小,硫酸铁毒性最大。

人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏

背景:牙龈成纤维细胞是牙龈固有结缔组织层中主要的细胞,在许多生理和病理过程中起着重要作用。目的:对人牙龈成纤维细胞进行原代培养、鉴定、冻存及复苏。方法:采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。对人牙龈成纤维细胞进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果与结论:人牙龈成纤维细胞原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学鉴定抗波性蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。牙龈成纤维细胞冻存与复苏成功,细胞经2次传代后生物学性状与原代相似。提示采用组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞及冻存与复苏方法可行。

内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响

目的观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用。方法通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响。结果MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱。结论LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程。

人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运

目的:研究人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运,并初步探讨转运的影响因素及牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性。方法:将人牙龈成纤维细胞与甲硝唑共同孵育1、5、10、15min后,弃去细胞外药液,收集各时间点细胞,用高效液相色谱法测定细胞内药物含量,用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果:(1)人牙龈成纤维细胞内甲硝唑含量分别为0.940±0.408ng/μg(药物浓度:20ug/ml)和1.977±0.266ng/μg(药物浓度:40μg/ml)。不同加药浓度和孵育时间下,甲硝唑的转运量差异有显著性(P<0.01)。(2)高效液相色谱法可以准确测定细胞内甲硝唑的含量。结论:(1)人牙龈成纤维细胞具有转运甲硝唑的能力,药物浓度和药物孵育时间会影响转运量,这证实了牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性。(2)高效液相色谱法可以准确,灵敏地测定细胞内药物的含量。

钛表面微沟槽形貌对人牙龈纤维细胞黏着斑蛋白表达的影响

目的 :比较不同尺寸微沟槽表面对人牙龈成纤维细胞(HGF)黏着斑蛋白vinculin表达的影响,作为选择种植体穿龈部分微沟槽尺寸的依据之一。方法:针对HGF大小,设计不同沟槽尺寸,利用光刻技术制作微沟槽形貌,沟槽宽度和间隔分别为15μm、30μm和60μm,沟槽深度为5μm和10μm,分组为T15/5、T15/10、T30/5、T30/10、T60/5和T60/10,光滑钛(T0)表面为对照组。通过免疫荧光、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹比较vinculin基因和蛋白水平的表达差异。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫荧光显示,随着沟槽宽度增加,vinculin的绿色荧光点增多,m RNA和蛋白水平表达T60最高,T15最低。相同沟槽宽度下,深度改变对该蛋白的表达无显著影响。结论:微沟槽形貌有利于vinculin蛋白的表达,表达量随着沟槽的宽度增加而增加。就vinculin蛋白的表达而言,T60组沟槽更适合作为穿龈部分的沟槽尺寸。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

富血小板血浆对人牙龈成纤维细胞增殖和迁移的影响

目的:体外研究不同浓度的机采富血小板血浆(PRP)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的增殖和迁移的影响。方法:不同浓度PRP(1%、5%、10%、20%、30%、50%),加入到原代培养的人牙龈成纤维细胞,无血清培养液为阴性对照,10%新生小牛血清为阳性对照,培养时间为3、5、7天,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖效果,Transwell系统测定细胞迁移效果。结果:PRP有明显促进增殖作用,不同浓度PRP与阴性对照组均有明显差异(P<0.01),且随着时间递增,增殖效果也明显增强(P<0.01)。在细胞迁移效果中,各浓度组均比阴性对照组效果好。结论:PRP对HGFs功能有明显促进效果,在一定浓度范围有浓度依赖性。

白细胞介素-10对人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-1β的抑制作用

目的 :探讨白细胞介素_10 (IL_10 )在牙周炎症反应中的抑制作用。方法 :用细胞培养法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养液上清中的IL_1β浓度 ;用MTT法检测人牙龈成纤维细胞 (HGF)对细菌脂多糖 (LPS)、IL_10的增殖反应。结果 :LPS以剂量依赖方式诱导HGF产生IL_1β,6h达最大分泌量 ;IL_1β的分泌可被IL_10抑制 ,10ng/mlIL_10作用 2 4h抑制效应达最大 ;LPS对HGF具有促增殖作用 ,而IL_10对HGF的增殖无影响。结论 :IL_10是一种抑制牙周炎症反应的细胞因子。

体外诱导人牙龈成纤维细胞多向分化潜能的实验研究

目的探索人牙龈成纤维细胞(h GFs)是否具有多向分化潜能,为组织工程学提供新的细胞来源。方法经志愿者知情同意后收集健康牙龈组织,组织块法培养h GFs。取第3代h GFs进行成骨、成软骨和成脂诱导,未分化诱导的细胞为对照组。分别用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色、阿利新蓝染色、油红O染色检测细胞成骨、成软骨和成脂能力。实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中成骨分化标志基因ALP、runt相关转录因子2(Runx2)、成软骨分化标志基因聚集蛋白聚糖(AGR)和成脂分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)的表达。结果成骨诱导组培养至7 d时ALP染色可见大量的蓝紫色沉淀,28 d时细胞周围有大量红染的钙结节沉积,而对照组无钙结节,培养至14 d细胞中ALP和Runx2表达明显高于对照组(P<0.01)。14 d时成软骨诱导组阿利新蓝阳性,成脂诱导组可见红色的脂肪滴,而对照组2种染色为阴性,AGR、PPARγ2表达均明显高于对照组(P<0.01)。结论 h GFs具有成骨、成软骨和成脂分化的多向分化潜能。

中药骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞体外增殖的实验研究

目的：探讨中药骨碎补对体外培养的人的牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块法外培养人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞，取第4、5代培养细胞随机分为实验组和对照组，实验组加不同浓度的骨碎补，对照组只加培养液。通过HE染色观察其对牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞的形态、结构及生长增殖的影响，通过MTT法和考马斯亮蓝法对实验组和对照组的细胞生长情况和总蛋白合成的检测。结果①在10-1000μg/ml浓度范围内骨碎补对人牙髓、牙龈、牙周膜成纤维细胞均有促增殖作用（ P ＜0.05），尤以100μg/ml浓度最为明显（ P ＜0.01）；②总蛋白测定结果显示在骨碎补浓度为10μg/ml时，对照组与其总蛋白含量差异无统计学意义（ P ＞0.05），实验组细胞总蛋白含量随骨碎补浓度增加高于对照组（ P ＜0.05），尤以500μg/ml骨碎补浓度组作用牙髓成纤维细胞最佳；而100μg/ml骨碎补浓度组作用牙龈、牙周膜成纤维细胞最显著。结论骨碎补在有效作用浓度范围内，其促增殖效应和总蛋白含量与骨碎补浓度呈剂量依赖关系，随着浓度的增加促增殖作用增强、总蛋白含量增加，浓度达到最大作用后，随着浓度增加作用反而呈现减弱趋势。

一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达影响的机制研究

目的研究一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)黏附分子表达影响的分子机制。方法体外培养HGF,以50 ng.mL-1的TNF-α和10 ng.mL-1的IL-1β刺激加入或不加入500μmol.L-1一氧化碳释放分子-3(CORM-3)的HGF;分别在刺激10、20 min后收集部分细胞,用Western blot法检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38的磷酸化水平;在刺激4 h后用Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的核内表达;在部分实验中,HGF在TNF-α、IL-1β及CORM-3刺激前以鸟苷酸环化酶特异性抑制剂1H-[1,2,4]噁二唑[4,3-α]喹喔啉-1-酮(ODQ)预处理8 h,刺激24 h后用Western blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果在TNF-α和IL-1β刺激细胞10min后,MAPK通路中p38、ERK和JNK的磷酸化水平即有明显升高,CORM-3能够明显抑制p38的磷酸化,而对ERK和JNK的磷酸化水平无明显影响;4 h后,CORM-3可明显抑制NF-κB-p65的核内表达。ODQ不能改变CORM-3对TNF-α和IL-1β共同刺激下ICAM-1表达水平的影响,说明CORM-3的作用并非通过鸟苷酸环化酶系统实现。结论一氧化碳对炎症环境下HGF黏附分子表达的抑制作用可能是通过对NF-κB的活性抑制和对MAPK p38磷酸化水平的抑制作用来实现的。