人生存素T34A重组腺病毒载体的构建、鉴定和体外表达

目的:采用高效简便的GatewayTM系统构建人生存素T34A基因重组腺病毒载体(Ad-hSurvivinT34A)。方法:从pORF9-hSurvivinT34A质粒中克隆人生存素T34A基因,经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切后插入到入门载体pEN-TR11的attL1和attL2之间,形成入门克隆;在高效重组酶的作用下,入门克隆与带attR1和attR2位点的病毒骨架载体Ad/CMV/V5-DEST发生体外同源重组,形成表达克隆Ad-hSurvivinT34A。鉴定正确后将其线性化,由Lipo-fectamine2000介导转染293细胞进行病毒包装,收集病毒上清。采用western Blot检测病毒感染的人宫颈癌细胞株Hela细胞中人生存素T34A蛋白的表达。结果:成功构建了人生存素T34A基因的重组腺病毒,该病毒能在细胞中高效表达。结论:本实验利用GatewayTM系统成功构建了Ad-hSurvivinT34A,与传统的腺病毒构建方法相比,更简便和高效,为下一步利用人生存素T34A进行肿瘤免疫基因治疗奠定实验基础。

乳腺癌发生发展相关蛋白研究进展

乳腺癌发生发展是一个复杂的病理过程,国内外诸多研究显示其可能与肿瘤细胞的多种相关基因产物表达水平及活性变化有关。本文结合国内外最新研究发现,将与乳腺癌发生发展相关的人Bcl-2相关X蛋白、Livin、人生存素、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂的研究进展情况做一综述。