期刊文献+
共找到1篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化 被引量:2
1
作者 吴思思 蒋维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期723-727,共5页
目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌... 目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni^(2+)NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测。结果重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85%以上,每升菌液获得2.5 mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。结论成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。 展开更多
关键词 人生长分化因子11 原核表达 复性 纯化
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部