生长抑素Ⅱ型受体SSTR2蛋白的理化性质及生物信息学分析

利用生物信息学方法在线分析生长抑素Ⅱ型受体SSTR2的理化性质、信号肽、跨膜结构、分泌蛋白类型、亚细胞定位、磷酸化位点修饰、空间结构及蛋白互作网络等,并通过MEGA5.0软件建立SSTR2蛋白的系统进化树。结果显示,该基因编码369个氨基酸,分子式为C_(1898)H_(2984)N_(470)O_(513)S_(23),相对分子质量为41332.79,等电点理论值为9.15,不稳定系数为37.16。SSTR2是一种碱性稳定亲水蛋白,无信号肽,存在7个跨膜区,作用于质膜结构;二级结构主要为α-螺旋,属7tmGPCRs超家族,且含有1个7tmA_SSTR2结构域;与SSTR2相互作用的蛋白质包括CORT、SST、NPY、GHRL、GNAI1、GNAI2、GNAI3、SHANK1、HIVEP2。SSTR2基因及其编码蛋白在进化上高度保守,可能参与G蛋白偶联受体信号通路,进而发挥其作用。本研究通过对SSTR2蛋白的理化性质及生物学功能进行分析,为深入研究该蛋白在疾病发生中的机制以及为靶向治疗神经内分泌肿瘤等肿瘤药物研发提供理论依据。

神经介素B及受体NMBR和PD-L1在H9N2亚型流感病毒感染过程中的相互作用研究

神经介素B(NMB)及其G蛋白偶联受体(NMBR)发挥的抗甲型流感病毒免疫反应,以及甲型流感病毒感染诱导细胞程序性死亡配体1(PD-L1)高表达均与NF-κB信号通路有直接关系,而NF-κB信号通路的激活受ERK信号通路的调控。为深入探究NMB与NMBR调节H9N2亚型流感病毒感染诱导PD-L1上的作用,本研究以H9N2亚型流感病毒为模式毒株,基于NMBR干扰和过表达细胞系、PD-L1干扰和过表达细胞系以及C57BL/6小鼠,采用RT-PCR和Western blot方法分析NMB与NMBR对PD-L1表达变化以及ERK磷酸化的影响。结果显示:H9N2亚型流感病毒感染诱导的NMBR和PD-L1表达之间存在着负调控的关系,外源性NMB可以有效激活小鼠体内NMBR的表达,进而抑制PD-L1表达,NMB与NMBR也能影响H9N2感染诱导的ERK磷酸化水平。综上,H9N2亚型流感病毒感染诱导表达的NMB与NMBR通过ERK信号通路调节PD-L1的表达而发挥抗流感病毒作用,将为深度剖析宿主-甲型流感病毒之间的互作关系提供新的科学依据。

生长抑素受体亚型SSTR-2和SSTR-3mRNA在原发性肝癌中的表达

目的:了解原发性肝癌组织中生长抑素受体somatostatinreceptor,SSTR亚型SSTR2和SSTR3基因的表达情况。方法:采用逆转录-PCR法检测27例原发性肝癌患者癌组织和癌旁组织中生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR3mRNA的表达。结果:27例原发性肝癌患者的癌组织和癌旁组织SSTR2mRNA的表达阳性率分别为81.5%(22/27)和96.3%(26/27)SSTR3mRNA在肝癌组织中表达的阳性率为66.7%(18/27),在癌旁组织中的阳性率为51.9%(14/27)。结论:大多数原发性肝癌肿瘤组织中有一种以上生长抑素受体亚型基因的表达。

生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析肝癌组织中生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的关联性,为应用生长抑素及其类似物诊断和治疗肝癌奠定理论基础。方法:肝癌患者肝组织标本22例,采用RT-PCR检测并鉴定肝癌癌组织、癌旁组织及正常肝组织SSTR2和SSTR5 mRNA表达率,分析表达率与肿瘤特征之间的关系。结果:SSTR2 mRNA肝癌癌组织的表达率为81.8%(18/22),表达水平为118.27±17.25,与正常肝组织[36.4%(8/22),69.49±19.43]比较差异有显著性(P<0.05);与癌旁组织[72.7%(16/22),111.18±23.74]比较差异无显著性(P>0.05);癌旁组织与正常肝组织比较差异有显著性(P<0.05)。SSTR5 mRNA表达率和表达水平肝癌癌组织[18.2%(4/22),51.67±30.32]、癌旁组织[18.2%(4/22),49.56±27.61]及正常肝组织[9.1%(2/22),48.73±15.72]三组间两两比较差异均无显著性(P>0.05)。高分化肝癌组织中[SSTR2 100%(18/18),SSTR5 25%(4/16)]和无淋巴结转移的肝癌组织中表达率[SSTR2 25.0%(4/16),SSTR5 100%(4/4)]分别高于低分化的表达率[0(0/4),0(0/6)]和有淋巴结转移的表达率[0(0/6),0(0/18)](P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期[SSTR2 85.7%(12/14),SSTR5 21.4%(3/14)]与Ⅲ、Ⅳ期[75.0%(6/8),12.5%(1/8)]表达率比较差异无显著性。结论:SSTR2 mRNA亚型在肝癌中呈高表达,其表达率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移有关联性,与肝癌的分期无关联。

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA在消化系肿瘤中的表达

目的探讨消化系统恶性肿瘤组织中生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的相关性。方法收集消化系肿瘤标本共66例,均经手术及病理证实。男性44例,女性22例,PCR扩增SSTR2、SSTR5 mRNA,并进行琼脂糖凝胶电泳,测其OD值并进行分析。结果不同肿瘤SSTR2 mRNA的表达频率不同,肝癌组织明显高于胃癌、结肠癌和胰腺癌(P<0.05),胃癌、结肠癌和胰腺癌之间表达无明显差异。肝癌癌组织与癌旁组织之间表达水平无明显差异,但与正常组织表达水平有显著差异(P<0.05);胃癌、结肠癌和胰腺癌癌组织与癌旁组织、正常组织之间表达无显著性差异(P>0.05)。SSTR5 mRNA的表达频率和表达水平在消化系肿瘤中差异不显著(P>0.05)。结论(1)胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌组织中有SSTR2、5亚型表达,以SSTR2亚型为主。(2)SSTR2亚型在胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌的表达频率及表达水平不同。在肝癌中呈高表达,在胃癌、结肠癌及胰腺癌中表达水平较低。(3)SSTR2、5亚型的表达频率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移密切相关,结肠癌与肿瘤分期有密切关系。(4)SSTR2亚型鉴定对胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌是否适合生长抑素治疗具有一定指导意义。

生长抑素受体亚型在人鼻咽癌细胞株CNE_2中表达

背景与目的:生长抑素受体(somatostatin receptor SSTR)在许多肿瘤组织均有表达,为生长抑素类似物如奥曲肽用于这些肿瘤的治疗提供了生物学基础,但对生长抑素受体在鼻咽癌中表达情况的研究甚少。本研究旨在了解生长抑素受体基因在鼻咽癌细胞中的表达情况,为生长抑素类似物用于鼻咽癌治疗的进一步研究提供试验基础。方法:采用RT-PCR法和SP免疫组化法联合检测体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE2的SSTRs表达,并对PCR mRNA产物测序以鉴定结果。结果:RT-PCR提示人鼻咽癌细胞株CNE2分别表达生长抑素受体亚型SSTR1、SSTR2、SSTR4;免疫组化结果:人鼻咽癌细胞株CNE2表达SSTR1、SSTR2A为强阳性(>60%),表达SSTR4为弱阳性、SSTR2介于两者之间、SSTR3和SSTR5则无表达。结论:我们的研究证实人鼻咽癌细胞株CNE2有多种生长抑素受体亚型基因表达,且以表达SSTR1、SSTR2较多。

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5在人原发性肝癌组织中的表达

目的研究生长抑素受体亚型SSTR2和SSTR5在人原发性肝癌组织中的表达情况。方法应用免疫组织化学方法分别检测25例原发性肝癌组织和14例癌旁肝硬化组织SSTR2、SSTR5的表达。结果18例(72%)肝癌组织至少表达一种生长抑素受体亚型,表达部位位于肝癌细胞的胞浆及胞膜,10例(71.4%)癌旁肝硬化组织至少表达一种受体亚型;肝癌的分化程度、TNM分期、血清AFP水平、乙肝病毒水平、肝功能Child-pugh分级等与受体的表达无明显相关性。结论72%原发性肝癌组织中表达生长抑素受体亚型SSTR2和(或)SSTR5,肝癌组织在受体的表达上存在差异性。

人胃癌、癌旁及浅表性胃炎组织生长抑素受体各亚型表达及临床意义

目的研究生长抑素受体(SSTR)各亚型在人胃癌、癌旁及浅表性胃炎组织的表达及其临床意义。方法对40例手术及胃镜活检取得的胃癌及癌旁组织和浅表性胃炎组织标本(其中手术29例,胃镜活检11例)应用免疫组化方法检测组织中SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5的表达。同时检测病理类型及淋巴结转移。结果胃癌组SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5表达较浅表性胃炎及癌旁组明显减少(P<0.01)。浅表性胃炎组及癌旁组间差异无统计学意义(P>0.05)。有淋巴结转移组与无淋巴结转移组SSTR1、SSTR3表达无统计学差异(P=0.270,P=0.125)。无淋巴结转移组较有淋巴结转移组SSTR2、SSTR5表达增高(P<0.05)。中高分化胃癌组SSTR1、SSTR2、SSTR3表达较低分化胃癌表达增高(P<0.05)。结论SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR5的减少可能在胃癌的发生发展中发挥一定作用,SSTR2、SSTR5的表达与胃癌有无淋巴结转移有关,SSTR1、SSTR2、SSTR3的表达与胃癌分化程度有关。

乳腺癌雌激素受体亚型与表皮生长因子受体-2表达的关系

目的 研究人乳腺癌组织中雌激素受体亚型 (ERα和ERβ)与表皮生长因子受体 - 2 (HER -2 )表达的关系。方法 应用RT -PCR方法检测 30例人乳腺癌组织中ERα和ERβ的mRNA的表达水平 ,应用免疫组织化学的方法检测HER - 2表达水平 ,对两者进行比较。结果 HER - 2高表达的患者ERα/ERβ比值明显低于HER - 2低表达的患者 (P <0 0 1)。结论 乳腺癌患者中雌激素受体亚型的表达可能受HER - 2调节。

生长抑素受体2在结直肠神经内分泌肿瘤中的表达及意义

目的:研究生长抑素受体(somatostafin receptor,SSTR)亚型SSTR2在结直肠神经内分泌肿瘤组织中的表达情况,以及与临床病理特征的关系.方法:收集结直肠神经内分泌瘤患者组织标本及相关临床病理资料,应用免疫组织化学En Vision二步法检测肿瘤组织中SSTR2表达情况.结果:56例患者纳入研究,其中SSTR2阳性表达率为76.8%.SSTR2的阳性表达与淋巴结转移、肿瘤浸润肌层、出现远处转移关系密切(P<0.05),但是与性别和年龄无关(P>0.05).此外,肿瘤的最大径及组织学分级也与SSTR2阳性表达有关(P<0.05).结论:SSTR2异常表达与重要的临床病理学特征相关,SSTR2可能成为一个新的结直肠神经内分泌瘤诊断和预后的分子指标.

生长抑素受体-2和金属蛋白酶-2在大肠癌中的表达及意义

目的:检测生长抑素受体(SSTR)-2、金属蛋白酶(MMP)-2在大肠癌组织中的表达,分析其表达与病理类型及转移的关系。方法:采用免疫组化法检测SSTR-2,MMP-2在对照组、结肠腺瘤型息肉以及结肠癌组织中的表达。结果:SSTR-2在结肠癌中的阳性率及表达强度最低(31.5%),显著低于腺瘤型息肉(P<0.01),在高、中分化的腺癌中阳性表达高于低分化腺癌(P<0.05),SSTR-2在结肠腺瘤型息肉和正常结肠黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),在结肠腺瘤型息肉中重度不典型增生明显低于轻-中度不典型增生(P<0.05),SSTR-2表达与结肠癌浸润深度及远处转移无关(P>0.05);MMP-2在结肠癌组织中阳性表达明显高于腺瘤型息肉(P<0.01),MMP-2在结肠腺瘤型息肉和正常结肠黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),在结肠腺瘤型息肉中,重度不典型增生明显高于轻-中度不典型增生(P<0.05),MMP-2表达与结肠癌临床分期和淋巴结转移相关。结论:SSTR-2表达下降对诊断结肠癌有一定价值,MMP-2在结肠癌中高表达,在结肠癌的发生、发展和浸润转移中起重要作用,可作为反映结肠癌进展的生物学指标。

生长抑素受体2在结直肠癌中的表达

目的:检测生长抑素Ⅱ型受体(SSR2)mRNA在结直肠癌组织中的表达并研究其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测37例结直肠癌患者癌远旁黏膜、癌近旁黏膜、肿瘤组织中SSR2mRNA的表达情况,分析不同组织表达阳性率及表达强度的差别。结果:SSR2mRNA在癌远旁黏膜、癌近旁黏膜、癌组织表达阳性率分别为100%、91.9%、83.8%,表达阳性率差异有统计学意义(P=0.038),结直肠癌组织中SSR2mRNA表达强度明显低于正常黏膜(P=0.021)。在结直肠癌组织中SSR2mRNA的表达阳性率与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关(P=0.021,P=0.005),其表达强度也与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关(P=0.013,P=0.019),而其表达率及表达强度与病人年龄、性别、肿瘤大小、部位及血清CEA的水平无显著相关性。结论:SSR2mRNA在结直肠癌中表达明显降低,其表达率及表达强度与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关,可能与肿瘤的发生、发展有一定的关联。

扩张性心肌病患者生长抑素受体2表达变化及诊断意义

目的探讨扩张性心肌病(DCM)患者血清生长抑素受体2(SSTR2)水平及其临床意义。方法采用酶联免疫双抗夹心法对2010年6月至2013年6月就诊的52例DCM患者和同期60例对照者外周血中SSTR2水平进行检测,同时检测两组血清中脑钠肽(BNP)水平,并结合研究对象一般临床资料、超声心动图、其他血清学指标进行综合分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价SSTR2对DCM的诊断价值。结果心功能分级为Ⅲ-Ⅳ级的DCM患者,血清SSTR2与BNP水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但是对于心功能Ⅱ级的患者,仅SSTR2水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析结果表明,Ⅲ-Ⅳ级患者SSTR2、BNP水平与左心室射血分数(LVEF)均呈负相关关系(r=-0.53、-0.43,P<0.05),但是Ⅱ级患者仅SSTR2与LVEF呈负相关(r=-0.45,P<0.05)。ROC曲线显示,对于Ⅱ级患者,SSTR2的诊断曲线下面积为0.702,明显优于BNP的诊断曲线下面积(0.573)。结论 DCM患者血清SSTR2水平增高,与患者心肌纤维化、心肌细胞肥大和心力衰竭有密切关系。尤其是心功能Ⅱ级的DCM患者,SSTR2相对于BNP,灵敏度更高,能及时反映DCM患者早期心功能不全,是一项具有潜力的生物学指标。

射血分数正常的心功能不全患者血清生长抑素受体2的检测

目的：评估射血分数正常的心功能不全（HFNEF）患者血清生长抑素受体2（SSTR2）和血中N-末端脑钠肽前体（NT-pro BNP）表达的变化。方法：选取自2010年4月至2013年4月住院的97例HFNEF患者和76名健康人进入研究。用免疫荧光加微激光技术和ELISA法分别检测所有研究对象血清SSTR2和气血NT-pro BNP的水平,并与研究对象的临床资料和超声心动图进行比较。绘制ROC曲线,选定SSTR2诊断HFNEF的最佳阈值。结果：HFNEF组患者SSTR2、NT-pro BNP水平均明显高于健康人组（P〈0.001）。HFNEF患者SSTR2水平与心功能分级、LAD、IVST、LVPWT、E/Ea、NT-pro BNP水平呈正相关（r=0.511、0.378、0.334、0.420、0.403和0.446,P〈0.05）;与LVEF呈负相关（r=-0.613,P〈0.001）。SSTR2的诊断曲线下面积为0.873（95%CI：0.812-0.899,P〈0.001）,优于NT-pro BNP的诊断曲线下面积0.664（95%CI：0.622-0.689,P=0.042）,两者联合诊断的ROC曲线下面积为0.899（95%CI：0.875-0.921,P=0.033）。根据ROC曲线结果,当SSTR2的诊断阈值为10.9μg/L时,其诊断的灵敏度为73%,特异度为82%。结论：血清SSTR2对HFNEF患者心室重塑的早期诊断具有重要意义,与NT-pro BNP联合诊断HFNEF的效果更佳。

生长抑素2型受体在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与凋亡的相关性

目的检测卵巢癌组织中的细胞凋亡情况,探讨细胞凋亡与生长抑素2型受体(SSTR2)表达的相关性。方法采用链霉素亲生物素-过氧化物酶法(S-P法)进行免疫组织化学染色,SSTR2阳性染色为棕黄色颗粒,定位于细胞膜及细胞浆;采用TUNEL试剂盒检测凋亡细胞,胞核中有棕黄色颗粒散在分布者为阳性细胞。均根据阳性细胞的比例判定结果。结果经统计学处理表明,SSTR2的表达与卵巢肿瘤的病理类型、组织学分级、有无腹水等有显著相关性(P<0.05),上皮性卵巢癌组织中细胞凋亡和SSTR2表达呈正相关(r=0.895,P<0.05)。结论卵巢癌组织细胞中SSTR2的表达可能参与细胞凋亡的调节机制,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用,并与恶性程度关系密切,有可能成为卵巢癌预后评估的参考指标。

生长抑素2型受体在12株肿瘤细胞中的表达

目的研究多种肿瘤细胞是否广泛表达生长抑素2型受体(SSTR2),以期探讨生长抑素类似物应用于各种肿瘤治疗的可能性。方法分别提取肺癌、鼻咽癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌及胰腺癌6种肿瘤,共12株细胞的总RNA,用反转录PCR检测SSTR2 mRNA的表达,同时制备12株细胞的总蛋白样品,经免疫印迹检测SSTR2蛋白的表达。结果除1株肺癌细胞外,其余11株细胞都表达SSTR2 mRNA;有1株肺癌细胞,2株胰腺癌细胞不表达SSTR2蛋白。结论除胰腺癌外,生长抑素2型受体在多种肿瘤细胞中的表达有较大的普遍性。

H9N2亚型流感病毒感染过程中神经介素B及受体对NF-κB信号通路泛素酶的调控

神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。

肿瘤生长抑素受体亚型的分布与表达

报道了于１９９２～１９９４年相继克隆成功的５种人类生长抑素受体亚型（ｈＳＳＴＲ１～ｈＳＳＴＲ５）的分子生物学特性，总结了应用放射性配体结合分析法对ｈＳＳＴＲ１～ｈＳＳＴＲ５与２种天然生长抑素（ＳＳＴ－１４及ＳＳＴ－２８）及４种人工合成的生长抑素类似物（ＳＳＡ）的选择性结合特性的研究结果。重点讨论了ｈＳＳＴＲ各亚型在神经内分泌性肿瘤中的分布与表达，简述其对了解肿瘤发生发展所具有的理论意义及其对肿瘤进行受体闪烁显像和受体介导治疗的临床价值。