人生长激素型垂体腺瘤细胞PKCδ相关信号通路因子的激活及其对细胞增殖的作用

目的分析蛋白激酶C(protein kinase C,PKCs)相关信号通路因子在人生长激素(growth hormone,GH)型垂体腺瘤细胞的表达及调节细胞增殖的作用机制。方法收集2016年5月-2018年3月蚌埠医学院第一附属医院收治的8例GH型垂体腺瘤患者术中切除肿瘤组织进行原代培养,免疫组化法检测PKCδ、CREB、ERK1/2在细胞内的表达。将原代培养的细胞分为对照组(空白)、激动剂组(PMA)、抑制剂组(Rottlerin)、联合组(PMA+Rottlerin),各8株细胞,ELISA法检测各组GH分泌水平;CCK-8法检测细胞活性;Western blotting检测各组因子及磷酸化水平,使用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。结果 PKCδ、CREB、ERK1/2均较多见于GH型垂体腺瘤细胞质。与对照组比较,激动剂组GH分泌及细胞活性升高,抑制剂组明显降低(均P<0.01),联合组GH分泌及细胞活性低于激动剂组,高于抑制剂组(均P<0.01)。与对照组比较,激动剂组p-PKCδ、p-CREB、p-ERK1/2水平升高,抑制剂组三者水平降低(均P<0.01),联合组p-CREB、p-ERK1/2水平低于激动剂组,高于抑制剂组(均P<0.01)。结论 PKCδ、CREB、ERK1/2在GH型垂体腺瘤细胞中存在明显高表达,激活PKCδ表达可提高p-CREB水平促进GH分泌,同时提高p-ERK1/2水平促进细胞增殖。

垂体生长激素腺瘤细胞表皮生长因子受体的表达

目的 了解大鼠垂体生长激素腺瘤 (GH3 )细胞的表皮生长因子受体 (EGFR)的表达情况。方法 应用免疫组化的方法检测GH3 细胞及阴性对照U 2OS细胞和阳性对照HO8910PM细胞的EGFR表达情况。结果 GH3 细胞和HO8910PM细胞明显黄染 ,U 2OS细胞无明显染色 ;GH3 、U 2OS和HO8910细胞表达EGFR的阳性细胞率分别为 90 .5 7%、4 .84 %和 93.33%。结论 垂体生长激素腺瘤细胞中存在着广泛的EGFR表达 ,而且具有较高的表达强度。

生长抑制素类似物在生长激素型垂体腺瘤中的应用

药物治疗是GH型垂体腺瘤的重要治疗方法之一,首选生长抑素类似物,目前主要有奥曲肽和兰瑞肽两类。有近年来,对其临床应用前景的重视程度不断提高。奥曲肽和兰瑞肽均为人工合成的8肽化合物,通过作用于细胞表面的生长抑素受体,来达到其抑制生长激素分泌的药理作用。肿瘤细胞表面生长抑素受体数量的多少与药物的反应情况相关,而在多数GH型垂体腺瘤中,存在生长抑素受体的高表达。国外不少研究提示:它能够有效缓解各种相关的临床症状,降低血GH或IGF-1水平,在部分患者可缩小肿瘤体积。但在能否改变肿瘤质地的问题上,还存在争议。同时,本类药物的临床不良反应较少,其临床应用前景广泛。与奥曲肽相比,兰瑞肽的使用更为方便,患者的依从性更好。本文对这方面的文献资料进行复习。

GHRP-6对培养的垂体生长激素腺瘤和正常胚胎垂体细胞促GH分泌特征

目的 研究人工合成的生长激素释放剂GHRP 6对体外培养的人垂体生长激素腺瘤细胞GH分泌影响 ,并分析其可能的临床意义。方法 用原代细胞培养技术 ,观察了 6例垂体GH腺瘤细胞和 4例正常胚胎垂体细胞对GHRP 6、生长释放激素 (GH releasinghormone,GHRH)和生长抑素 (somatostatin ,SS)的体外分泌效应。 结果 GHRP 6对所有 6例GH腺瘤细胞GH分泌表现出明显的刺激效应 (P <0 0 1) ,但远不如正常垂体细胞敏感 ,但GH腺瘤细胞对持续的GHRP 6刺激反应时间延长。GHRH和SS仅对部分GH腺瘤细胞有作用 ,且SS不能完全阻断GHRP 6对于GH分泌的刺激效应。结论 GH腺瘤细胞对于体外GHRP 6持续刺激的异常反应 ,表明垂体GH腺瘤中可能存在GH释放剂受体 (GHS R)所固有的负反馈机制———“脱敏”机制的减弱 。

生长激素型垂体腺瘤患者术前应用索马杜林的疗效观察

目的研究生长激素型垂体腺瘤患者术前接受索马杜林治疗的效果。方法回顾近两年来我院收治的23例生长激素型垂体腺瘤患者,在患者接受手术前依照药物说明书和文献推荐的方法给予索马杜林缓释凝胶皮下注射,接受治疗期间定期给予影像学和内分泌水平的检查,疗程结束后统计数据并分析。结果接受治疗23例患者中,13(56.5%)例患者血清GH水平及IGF-1水平可降至正常,15(65.2%)例患者肿瘤直径较治疗前缩小程度≥50%,9(56.3%)例患者视力较治疗前好转,6(75.0%)例患者头痛减轻或消失,4(80.0%)例关节疼痛减轻,7(43.8%)例鼾症或OSAS病情好转。结论对于合适的病例,术前给予一段时间的索马杜林治疗,可使肿瘤体积缩小,患者内分泌水平恢复正常,并有可能因此降低手术困难和风险,减少围手术期并发症发生率。

经鼻蝶入路垂体瘤切除术治疗生长激素型垂体腺瘤并发睡眠呼吸暂停综合征的疗效观察与护理

目的观察生长激素型垂体腺瘤并发睡眠呼吸暂停综合征行经鼻蝶窦入路垂体瘤切除术的治疗效果,总结护理要点。方法对43例生长激素型垂体腺瘤并发呼吸暂停综合征的疗效患者行经鼻蝶窦入路垂体瘤切除术,手术前后比较患者激素水平和血氧饱和度的差异,观察患者睡眠呼吸暂停综合征的疗效改善情况。结果手术后,患者生长激素、胰岛素样生长因子、血氧饱和度水平均优于手术前;睡眠呼吸暂停综合征发生率低于手术前(均P<0.05)。结论行经鼻蝶窦入路垂体瘤切除术治疗生长激素型垂体腺瘤并发睡眠呼吸暂停综合征的疗效效果较好。有效的经口呼吸锻炼,保持患者有效的通气,做好并发症的护理对提高手术成功率具有重要意义。

生长激素型与无功能型垂体腺瘤的垂体后叶MRI高信号影分析

目的探讨生长激素型与无功能型垂体腺瘤的垂体后叶MRI高信号影的特点。方法回顾性分析45例无功能型垂体腺瘤与16例生长激素型垂体腺瘤的MRI影像资料。结果 45例无功能型垂体腺瘤中,39例可见垂体后叶高信号影,其中位于鞍上24例,鞍内3例,鞍内及鞍上均可见12例;16例生长激素型垂体腺瘤中,15例出现垂体后叶高信号影,其中位于鞍上1例,鞍内14例。无功能型垂体腺瘤的体积明显大于生长激素型腺瘤体积(P<0.05),向鞍上及海绵窦侵犯的发生率明显高于生长激素型垂体腺瘤(P<0.05),而向鞍下侵犯及局限于垂体窝内生长的发生率低于生长激素型垂体腺瘤(P<0.05)。无功能型与生长激素型垂体腺瘤垂体后叶高信号影的最长径线分别为(8.32±3.37)mm、(5.83±1.64)mm,最短径线分别为(1.67±0.33)mm、(2.23±0.75)mm,差异有统计学意义(P<0.05)。结论生长激素型与无功能型垂体腺瘤的生长特点不同,其垂体后叶MRI高信号影的表现形式也不同。

内分泌激素水平监测对生长激素型垂体腺瘤患者手术远期疗效的研究

目的探究在生长激素型垂体腺瘤患者手术远期疗效中内分泌激素水平监测的应用价值。方法选取我院在2011年1月至2014年1月期间收治的生长激素型垂体腺瘤患者40例为研究对象,回顾性分析患者手术前后甲状腺激素、血清生长激素、促甲状腺素、泌乳素、促肾上腺皮质激素、血皮质醇的情况,并对患者随访1年,评价其远期治疗效果。结果 3例为生长激素垂体腺瘤全切患者,与术前相比,术后7 d内生长激素水平下降明显,与之后的生长激素水平基本一致。结论手术疗效可根据术后7 d的生长激素水平进行判断,临床治愈指标为在7 d内生长激素下降到2.5μg/L,内分泌激素水平监测值得推广应用。

经鼻-鞍区外侧入路神经内镜手术切除伴海绵窦侵犯的垂体生长激素型腺瘤

目的探讨经鼻-鞍区外侧入路神经内镜手术切除伴海绵窦侵犯的垂体生长激素型腺瘤的疗效。方法回顾性分析2016年1月至2021年3月经鼻-鞍区外侧入路神经内镜手术治疗的13例伴海绵窦侵犯的垂体生长激素型腺瘤的临床资料。结果肿瘤全切除10例,次全切除3例。9例(69.2%)达生化缓解标准。3例术后未缓解,接受放疗(14 Gy),其中1例获得缓解。术后平均随访28.3个月,1例术后生化缓解,但肢端肥大症复发;复查MRI显示,1例次全切除出现肿瘤复发;随访期间无死亡。结论经鼻-鞍区外侧入路神经内镜手术切除伴有海绵窦侵犯的垂体生长激素型腺瘤,效果良好。

“交叉通讯”在人垂体生长激素腺瘤激素分泌中的调控作用研究

目的:探讨在人垂体生长激素腺瘤中,细胞内信号的交叉通讯对生长激素分泌的调控作用。方法:采用体外垂体生长激素(GH)腺瘤细胞培养方法,观察在生长激素释放激素(GHRH)和人工合成的GH释放肽(GHRP-6)刺激下,2种垂体腺瘤细胞内信号系统的交叉通讯在GH释放中的调控作用。结果:GHRH和GHRP-6对垂体腺瘤的GH分泌有协同刺激效应。cAMP、PKC在两种信号传导系统的交叉通讯中起着重要作用。结论:在垂体GH腺瘤的激素释放调控中,多种细胞内信号的“交叉通讯”有重要意义。

α-干扰素和奥曲肽对垂体生长激素腺瘤的作用

目的 研究α 干扰素 (IFN α)和奥曲肽 (SMS)对人垂体腺瘤细胞激素分泌的影响。方法 将垂体生长激素 (GH)腺瘤 (11例 )标本进行体外细胞培养 ,每例培养细胞随机分成IFN α组、SMS组、IFN α +SMS组及对照组 ,每组 3管 ,观测药物干预后细胞激素分泌量的变化。结果 干预 2天和 4天时 ,IFN α对 6 0 % (6 /10例 )和 70 % (7/10例 )垂体腺瘤细胞GH分泌有明显抑制 ,与对照组比较GH分泌量减少 2 2 %～ 5 4 %和 30 %～ 6 1% (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,其中 ,6 7% (4/6例 )和 83% (5 /6例 )侵袭性垂体腺瘤细胞GH分泌受到明显抑制 ,与对照组比较GH分泌量减少 2 2 %～ 38%和 30 %～ 5 5 % (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ;SMS对 4 0 % (4/10例 )垂体腺瘤细胞GH分泌无明显抑制作用 ,而IFN α对其中 3例有明显抑制GH分泌效应 ,与对照组比较GH分泌量减少 38%～ 5 4 %和 4 3%～ 6 1% (均P <0 .0 1)。结论 IFN α对大多数垂体GH腺瘤 ,尤其是侵袭性垂体腺瘤激素分泌有抑制作用 。

生长激素型垂体腺瘤经鼻蝶入路术后长期疗效的列线图预测模型的构建和验证

目的分析生长激素(GH)型垂体腺瘤患者神经内镜下经鼻蝶入路手术后长期预后因素,建立GH型垂体腺瘤术后的列线图预测模型。方法选取2014年1月—2020年1月于徐州医科大学附属医院经鼻蝶手术治疗的GH型垂体腺瘤患者作为研究对象,收集临床资料进行分析。运用LASSO回归分析筛选最佳预测因子,将预测因子进行多因素Logistic回归分析进一步筛选,构建列线图预测模型。采用一致性指数(C-index)、受试者工作特征曲线(ROC)、校准曲线以及临床决策曲线(DCA)从区分度、校准度和临床效用3个方面验证该模型的性能。结果共连续纳入96例GH型垂体腺瘤患者。在最后的随访中,61例(63.5%)达到缓解标准。以影响术后缓解的4个危险因素,即术前随机GH、术前胰岛素生长因子(IGF-1)、Knosp分级和肿瘤最大直径(MPAD)构建术后长期未缓解的预测模型。该列线图模型的C-index为0.806,提示该模型的区分度较高,ROC曲线下面积AUC为0.897[95%CI(0.828,0.967)],灵敏度为97.1%,特异度为73.8%。校准曲线证实该模型预测结果与观察结果吻合较好(P=0.615)。DCA决策曲线显示该模型具有较好的临床效用。结论术前随机GH、术前IGF-1、Knosp分级和MPAD是预测GH型垂体腺瘤患者经鼻蝶术后长期疗效的独立预测因素。该列线图预测模型显示良好的区分度和核准度,可以帮助临床医生预测术后缓解情况疗效,指导制定个体化的随访计划和治疗方案。

假包膜外切除技术在生长激素型垂体腺瘤神经内镜下经鼻蝶手术中的应用

目的探究假包膜外切除技术在生长激素(growth hormone,GH)型垂体腺瘤神经内镜下经鼻蝶手术中的应用价值。方法回顾性分析GH型垂体腺瘤神经内镜下经鼻蝶手术患者60例,按其治疗方式分为对照组和观察组,各30例。对照组行假包膜内切除术,观察组行假包膜外切除术。比较2组患者总肿瘤切除率、不同肿瘤大小及Knosp分级患者肿瘤切除率、并发症、对生活质量、GH水平及胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平的影响。结果观察组患者总肿瘤全切除率90.00%,高于对照组的66.67%,且观察组大腺瘤患者全切除率高于对照组,2级、3级生长激素型垂体腺瘤患者肿瘤全切除率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后3个月观察组患者功能、总体健康状况指标评分高于对照组,症状、特异性指标分值低于对照组,GH、IGF-1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论假包膜外切除技术应用于GH型垂体腺瘤神经内镜下经鼻蝶手术中,对提升临床肿瘤切除率、改善患者生活质量及降低GH、IGF-1水平均有积极意义。

Epac1对垂体腺瘤细胞增殖和细胞周期的影响及分子机制研究

目的探索垂体生长激素腺瘤细胞增殖的分子机制。方法收集12例肢端肥大症患者的功能性生长激素垂体腺瘤(fGH-PA)组织样本。qPCR法测定fGH-PA组织和大鼠RGC-5、MMQ、GH3细胞中cAMP直接激活的交换蛋白1(Epac1)mRNA表达水平。免疫组织化学测定fGH-PA组织中Epac1蛋白表达情况。Western blot测定MMQ、GH3细胞中Epac1蛋白表达情况。在GH3细胞中过表达或敲低Epac1,或敲低cAMP反应元件结合蛋白(CREB),流式细胞术测定细胞周期变化;CCK-8法测定细胞增殖能力;Western blot测定细胞内p-CREB、CREB、Cyclin D1、CDK2、p21的表达情况。结果qPCR和免疫组织化学结果显示,与旁侧正常组织相比,fGH-PA组织中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,与RGC-5细胞相比,MMQ和GH3细胞中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。在GH3细胞中过表达Epac1后,与Control组相比,Epac1-OE组G0/G1期和S期细胞占比明显减少(P<0.05),G2/M期细胞占比明显增多(P<0.05);细胞增殖能力明显增强(P<0.05);细胞内p-CREB和Cyclin D1的表达水平明显升高(P<0.05),CDK2和p21的表达水平明显降低(P<0.05),而CREB的表达水平无明显变化(P>0.05)。在GH3细胞中敲低Epac1或敲低CREB后,上述所有结果均发生逆转(P>0.05)。结论垂体生长激素腺瘤细胞中Epac1过表达能够上调细胞内p-CREB的水平,并促进腺瘤细胞通过G1/S期检查点,发生细胞周期检查点失调和大量增殖,但不影响CREB的表达水平。

人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌

目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growthhormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%,46%,96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01);培养液中均含有相应激素,且3种方法的激素分泌量没有统计学差异(P>0.05);腺瘤细胞分别呈GH,PRL阳性表达,成纤维细胞表达I型胶原。结论方法Ⅲ可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。

垂体泌乳素分泌腺瘤细胞体外培养和激素分泌的研究

为研究垂体泌乳素 (PRL)腺瘤体外细胞培养及激素分泌的特征 ,选择经临床、手术和病理证实的 7例垂体PRL 腺瘤和 3例 PRL/ GH混合性腺瘤 ,采用细胞培养技术 ,观察细胞形态的改变和生长的特点 ,观测培养基基础激素分泌量随时间的改变。结果显示 :10例垂体腺瘤细胞培养成功 8例 ,成活率为 80 % ,贴壁后的细胞被拉长 ,呈椭圆形或梭形 ,呈团状或片状生长 ,培养基中 PRL 分泌量在 1周内维持较高水平 ,1周后缓慢下降 ,而 GH分泌量呈现迅速下降的趋势。提示培养基中高 PRL

鞍区混合性神经节细胞瘤-垂体腺瘤3例临床病理分析

目的探讨鞍区混合性神经节细胞瘤-垂体腺瘤的临床病理特征及发病机制。方法分析3例混合性神经节细胞瘤-垂体腺瘤的临床资料、病理组织学特点、免疫表型及预后,并进行该疾病相关文献复习。结果 1例为男性,2例为女性,年龄38~59岁。1例伴有生长激素水平增高及肢端肥大症,1例伴催乳素水平升高但无其他临床症状,另1例无激素水平改变但伴有反复低钠。3例病理组织学均为混合性生长激素细胞腺瘤与神经节细胞瘤,其中2例为稀疏颗粒型。垂体腺瘤垂体特异性转录因子(Pit-1)及GH(+),神经节细胞区域除了Neu N和Calretinin(CR)(+),部分还Pit-1及CK18(+)。3例随访7~90个月,均无复发。结论神经节细胞瘤常与稀疏颗粒型生长激素腺瘤并发,常有肢端肥大症或无临床症状。更多实验结果支持生长激素腺瘤发生神经元转化是其发生机制,有待进一步研究;其预后与单纯垂体腺瘤相同。

ER、PCNA在老年泌乳素型垂体腺瘤中的表达及临床意义

目的分析老年泌乳素型垂体腺瘤中雌激素受体(ER)和增殖细胞核抗原(PCNA)与肿瘤侵袭性生长的关系。方法手术切除的泌乳素型垂体腺瘤标本46例,分为老年组和非老年组,采用免疫组化方法分别测定ER和PCNA蛋白表达;从组织中提取RNA,经RT-PCR方法扩增ER-mRNA;从细胞中提取蛋白,行W estern免疫印迹检测。结果ER、PCNA蛋白及ER-mRNA表达在老年组和非老年组存在明显差异,且免疫组化和W estern免疫印迹两种方法检测的ER蛋白表达水平相一致。结论ER和PCNA与肿瘤的侵袭性密切相关,可以作为临床判定肿瘤侵袭生长的分子标志,为老年泌乳素型垂体腺瘤的综合治疗提供依据。

人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化

背景与目的:较纯的人垂体腺瘤细胞对垂体腺瘤的生物学特性、病因、发病机制等的研究非常重要,本文探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法。方法:采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valine)替代左旋颉氨酸(L-valine)的 DMEM D-valine培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果:3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆肜,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第 20天其平均纯度分别为40%、46%、96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01); 腺瘤细胞分别呈GH、PRL阳性表达,成纤维细胞表达Ⅰ型胶原。结论:反复贴壁法结合DMEM D-valine培养液培养法可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。