动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证

目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。

我国疫苗生产用动物和动物源性材料安全标准现状的分析

目的分析我国疫苗生产用动物和动物源性材料质量要求与国外相关技术规范的差异,探索进一步提高和完善我国疫苗生产用动物和动物源性材料质量标准的途径。方法概述我国实验动物质量标准和局限性,将《中国药典》与国外相关技术法规对疫苗生产用动物和动物源性材料质量标准进行对比分析。结果与结论我国应研究制订达到或接近国际标准要求的疫苗生产用动物源性材料质量标准,保证疫苗质量和公众用药安全。

动物源性医疗器械原材料取材动物的饲养条件及要求

目前国内传统养殖业区域发展不均衡,大部分养殖场收益不高,养殖热情受到较大影响,为了创新发展,各式各样的特种养殖场不断涌现。动物源性医疗器械在植入类医疗器械中有着不可替代的优势,市场前景广阔,原材料需求量大。为了更好地发展动物源性医疗器械行业,满足持续增长的原材料需求,本文主要讲述可作为动物源性医疗器械取材动物的养殖要求,为广大养殖户提供切实可行的参考依据。

浅谈动物源性医疗器械原材料养殖和屠宰的要求

随着社会和经济的发展,人们对医疗的认知也越来越高,我国居民的医疗消费观念也发生了巨大变化,植入性医疗器械的需求也在逐年增加,其中动物源性医疗器械的市场需求也在逐年增加,随着组织工程及生物类技术的突飞猛进,行业市场发展空间广阔。为了更好地为动物源性医疗器械提供来源可靠、稳定,质量可追溯的原材料来源,满足动物源性医疗器械生产企业对原材料的不断需求,依据国家相关法律法规的要求,简要谈谈动物源性医疗器械原材料养殖和屠宰的要求,为动物源性医疗器械生产企业以及相关养殖公司提供切实可行的参考依据。

动物源Ⅰ型胶原蛋白可引起BALB/c小鼠细胞免疫反应和组织免疫毒性

背景:天然纯胶原被认为具有较低的免疫原性和较好的生物相容性。目的:体外评估动物源Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:将牛跟腱经免疫原性清除后,提取制成Ⅰ型胶原蛋白,HPLC测定胶原蛋白纯度,荧光染色定量胶原蛋白中残留DNA。将50只BALB/c小鼠随机均分为5组,分别皮下注射生理盐水(阴性对照)、小牛来源Ⅰ型胶原蛋白标准品(阳性对照)、33.4,66.8,133.4 mg/kg的动物源Ⅰ型胶原蛋白,1次/d,连续注射12 d后,检测注射胶原蛋白后小鼠淋巴细胞的增殖、细胞分型及NK细胞杀伤功能;连续注射3周后,取脾脏、肝脏及肺组织进行病理组织学检查。结果与结论:相比Ⅰ型胶原蛋白标准品,纯化后的牛源性Ⅰ型胶原蛋白纯度可达到99%以上,而残留DNA低于1 mg/L,远远低于目前常规脱细胞基质中DNA的残留水平50-100μg/g(干质量)。注射12 d后,各组均未发生淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤功能及淋巴细胞亚群的比例的变化。注射3周后,66.8,133.4 mg/kg动物源胶原蛋白组小鼠脾小动脉周围淋巴鞘面积明显增厚变大,有可能引发偶发性的肝损伤和肺损伤,而脾小体生发中心面积未发生明显变化。表明连续皮下注射动物源胶原蛋白可引发BALB/c小鼠发生较低水平的脾淋巴细胞免疫应答,可能引起偶发性肝、肺损伤。

动物源性生物材料中残留α-Gal抗原检测方法

为了定量检测动物源性生物材料中残留α-Gal抗原含量,本实验室建立了M86抗体的ELISA抑制法。用兔血红细胞制备标准曲线,以Galα-1,3-Gal/BSA为固相抗原,利用特异性抗α-Gal单抗M86与待测物反应,再取上清液中剩余的M86抗体与固相抗原反应后检测待测物中α-Gal抗原含量。结果显示其标准曲线的R2=0.999,具有很好的相关性;经α-Gal阳性和阴性材料的验证证实其具有较好的灵敏性和特异性。利用该方法考察了大鼠组织、动物源性脱细胞生物材料、猪真皮处理前后α-Gal抗原的表达特征。该方法有望成为评价动物源性生物材料及其衍生物α-Gal抗原残留的一种有效方法。

动物源性脱细胞基质类材料的免疫原性:风险分析与评价

动物源性脱细胞基质类材料具有与人体组织类似的基质结构,因良好的生物相容性和组织诱导性,被广泛应用于临床患者的组织修复和重建等再生医疗领域。但由于这类材料的特殊来源,需要关注的特殊风险包括潜在外源因子污染、异种细胞及其免疫原残留和脱细胞工艺试剂残留等导致的一系列不期望的热原、免疫原及炎症等材料反应。本文针对动物源性脱细胞基质类材料的风险分析、控制与评价进行综述。重点分析论述目前已初步建立的一些相关风险评价技术、方法和标准,最后展望了亟待完善的系统化质量评价体系。

动物源性生物材料体外淋巴细胞增殖试验方法的建立

目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法。方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞增殖试验方法。采用牛心包组织(原材料)的浸提液和匀浆液,作为抗原特异性的阳性对照组考察样品前处理方式对试验体系的影响,并用流式细胞仪分析增殖后的淋巴细胞亚型百分比,考察样品制备方式对淋巴细胞亚型增殖影响的差异。结果:本试验中小鼠脾淋巴细胞体外增殖试验条件确定为每孔接种6×105个淋巴细胞,阳性对照孔Con A浓度为2.5μg·mL-1,培养时间为3 d。牛心包浸提液和匀浆液的淋巴细胞增殖率均约为细胞对照组的2倍,两者的淋巴细胞亚型百分比变化不同于Con A组,未出现T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比的增加。浸提液组与匀浆液组的活化NK细胞和NKT细胞百分比与对照组相比均明显升高,但浸提液组的升高幅度数倍高于匀浆液组,且仅浸提液组NK细胞百分比与对照相比出现了明显倍增。结论:本研究建立了以动物组织(原材料)为抗原特异性阳性对照的体外淋巴细胞增殖试验方法。动物组织(原材料)浸提和匀浆样品均可以产生淋巴细胞增殖阳性结果,其促进淋巴细胞增殖的机理(亚型分类)不同于Con A等有丝分裂原,提示使用作为动物组织(原材料)阳性对照更能反映试验体系的敏感性。

动物源性生物材料残留DNA的定量检测法

动物源性生物材料的残留DNA定量检测是产品脱细胞处理过程是否彻底,以及免疫原性风险是否得到有效控制的重要产品技术指标之一。目前,国际上还没有针对这类材料的残留DNA检测方法。本研究设计了动物源性生物材料的残留DNA定量检测三步法,即固体生物材料的蛋白酶K消化,DNA纯化和荧光染色法DNA测定。在整个实验过程中增加了回收率实验,经过回收率曲线方程校正后得到最终检测结果。实验过程中的磁珠法DNA纯化步骤的优化设计保证了较好的回收率,同时满足了准确性和精密度。该实验方法经验证,其检测灵敏度达到6.25ng/每份样品,回收率样品DNA含量在3.125～100ng以及25～400ng范围内线性良好,其回收率曲线R2>0.99。此方法保证了生物材料中微量或痕量DNA检测的科学性和可信性。

应用抑制性ELISA法测定动物源性生物材料中α-Gal抗原

动物源性生物材料因其来源丰富且功能完备被广泛用于临床治疗,但由于其大量表达的α-Gal抗原(Galactosylα-(1,3)-galactosylβ-1,4-N-acetylglucosaminyl,α-Gal epitopes)能够与人体内α-Gal抗体特异性结合,导致超急性移植排斥和慢性免疫毒性反应使移植失败。该研究以临床常见的动物源性生物材料作为研究对象,通过α-Gal抗原特异性单抗M86参与的抑制性ELISA方法,定量检测了材料中α-Gal抗原。实验结果表明,每毫克两种成品生物骨的α-Gal抗原含量为(3.9±0.73)×105^(4.7±0.85)×105个,明显少于同等重量的原材料牛骨组织,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。皮肤修复膜中α-Gal抗原含量亦少于其原材料牛皮组织(P<0.05)。同时,该抑制性ELISA方法具有良好的回收效率。由此表明,抑制性ELISA方法能够快速、特异性检测异种移植材料中α-Gal抗原含量,从而为α-Gal抗原相关的异种移植免疫学研究和临床应用提供实验依据。

动物源性生物材料病毒检测技术研究

随着利用动物源性组织、细胞及体液制备的生物制品逐渐增多，使用的人群不断扩大，加之动物源性产品原材料质量控制未引起足够重视，生产工艺又基本没有经过严格的病毒去除/灭活效果验证，使得目前动物源性病毒感染人类的风险性极高，潜在医源性感染问题变的日益突出。其中动物组织来源制品由于动物本身健康检疫状况差，不同动物携带的病毒外源因子复杂多变，可控性因素尚不确定，对人体的潜在危害性较之经过系统鉴定和严格控制的其他制品的风险性更高。

论无规定动物疫病区建设

无规定动物疫病区是指在某特定地域，在规定期限内无特定的动物疫病。无规定动物疫病区建设则是指在获得国家认可的特定地域及其周边一定范围内，对动物和动物产品、动物源性饲料、动物遗传材料、动物病料、兽用生物制品的流通实施有效控制，达到无规定动物疫病区标准。2000年四川泸县被农业部批准为无规定动物疫病区和示范区建设县，通过三年的“泸县无规定动物疫病区示范区建设”后，该项目获得了泸州市人民政府2003～2004年度科学技术进步一等奖。我们通过三年来组织实施“泸县无规定动物疫病区示范建设”项目，就“无规定动物疫病区建设”谈几点体会。

关于宠物食品营养与适口性的评估研究

1影响宠物食品营养及适口性的因素分析1.1原料组成通常来讲,宠物食品主要有两大来源,分别是动物源性、植物源性,具体而言,主要由食品原材料、脂肪、维生素、矿物质、添加剂等构成。由于犬、猫等类型的宠物均属于肉食性动物,在选择宠物食品时需要考虑是否具有较高的蛋白质含量,高蛋白质含量的食品更能够满足肉食性宠物的营养需求。

金川区建立无规定动物疫病区的思路

“无规定动物疫病区”（简称无疫区）是指在规定期限内，没有发生过某种或几种疾病，同时在该区域及其边界和外围一定范围内，对动物和动物产品、动物源性饲料、动物遗传材料、动物病料、兽药（包括生物制品）的流通实施官方有效控制并获得国家认可的特定地域。金川区位于河西走廊中东部，祁连山北麓，北有巴丹吉林沙漠形成的天然屏障，

Gal抗原缺失小鼠的应用示范:动物源性硬脑膜补片的免疫原性反应评价

目的:采用Gal抗原缺失模式小鼠评价动物源性硬脑膜补片残余免疫原风险,考察Gal抗原缺失模式小鼠的应用价值。方法:在经外源性Gal抗原(兔血红细胞)预免的Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入硬脑膜补片(产品)与牛心包(原材料)4周,分析小鼠血清总抗体,特异性抗-Gal抗体,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平,脾脏淋巴细胞亚型及胸腺、局部病理,综合考察各实验组的差异。结果:牛心包植入组与对照组相比,小鼠血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平显著升高(分别为约4倍和约1.7倍);而硬脑膜补片植入组小鼠血清抗-Gal IgG、抗-GalIgM水平与对照组相比均无明显差异。除硬脑膜补片植入组小鼠血清IL-4含量下降之外,其余细胞因子包括IL-1β、IL-10、IL-2、IL-6、IL-12P70与IFN-γ含量,血清总IgG、IgM水平在各组间均无显著差异。脾脏淋巴细胞亚型分析显示,硬脑膜补片植入组和心包植入组与对照组相比均无显著性变化。胸腺病理未见异常;局部病理显示硬脑膜补片植入组炎症:Ⅰ-Ⅱ级,纤维化:Ⅰ-Ⅱ级,较心包植入组(炎症:Ⅱ-Ⅲ级,纤维化:Ⅱ-Ⅲ级)反应减轻。研究结果表明动物源性硬脑膜补片产品的Gal抗原介导的免疫原性反应与原材料相比显著降低。然而,硬脑膜补片植入组的植入物局部仍存在一定程度的炎症反应和纤维化现象。结论:硬脑膜补片残余免疫原风险与原材料相比显著降低,与对照组无显著性差异;Gal抗原缺失模式小鼠血清抗-Gal IgG、抗-Gal IgM能够科学地评价动物源性生物材料Gal抗原相关的免疫原性,可以作为动物源性生物材料脱抗原处理工艺有效性的特异性指标之一;提示Gal抗原缺失模式小鼠对动源性生物材料的异种免疫原性风险评价具有极高的应用价值。

呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。

对非法制售兽用生物制品者要严惩不贷

2004年4月16日，北京市农业局、北京市兽医卫生监督所公开销毁了在满光明非法制售兽用生物制品案中查获的，货值达300余万元的1．5亿余羽份非法生产的兽用生物制品，宣告建国以来最大的一起非法制售兽用生物制品案件处理结束。