新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)内毒素检查方法比较

目的为新型冠状病毒(简称新冠病毒)灭活疫苗(Vero细胞)的细菌内毒素检查和质量控制提供技术支持和理论基础。方法利用凝胶法、光度测定法[包括动态浊度(TKA)法、微量动态显色(mKCA)法]测定并比较新冠病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液和成品中内毒素浓度。结果3种方法测得的供试品内毒素浓度均符合规定(原液为不超过5 EU/600 SU,成品为每剂≤5 EU),且后2种方法既能用于定性检测也能用于定量检测,特别是mKCA法下鲎试剂用量更少。结论mKCA法是检查该疫苗内毒素浓度的最适宜方法,具有灵敏度高、稳定性强、鲎试剂用量少、数据完整和可追溯、人为操作误差较小的特点。

国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性

目的观察国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性。方法观察组200例和对照组50例暴露后,按照0、3、7、14、28d免疫程序,分别接种国产、进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)。观察组接种疫苗后,观察全身和局部反应情况。采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测观察组和对照组接种后的血清中和抗体水平。结果观察组疫苗接种后,局部红肿、硬结、疼痛、瘙痒发生率分别1.4%、0.8%、17.1%和2.4%;全身反应发热、皮疹、头痛、疲劳乏力和其他反应发生率分别为1.2%、0.4%、2.4%、4.2%和0.3%,且在第7天完全消失。观察组与对照组疫苗首剂接种后7d,抗体阳转率分别为40.3%和37.0%,14d分别为95.5%和97.7%,差异无统计学意义;且首剂接种后45d,抗体阳转率均为100%。观察组和对照组疫苗首剂接种后7、14、45d,血清中和抗体GMT差异无统计学意义,14、45d血清中和抗体GMT均大于0.5IU/ml。结论国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)接种反应轻微,并具有良好的免疫原性。

国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗接种反应及免疫效果

目的观察国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗接种反应及免疫效果。方法对93名观察对象采用0、3、7、14和28 d程序进行暴露后免疫,观察免后30 min的即时反应及72 h内的局部和全身副反应,并于第1针免疫后3、7、14和45 d采血,检测血清抗体水平。结果疫苗接种后均无异常反应,局部及全身一般反应率分别为5.8%和4.5%。免后7 d,血清抗体阳转率达22.58%,14 d达100%;免后7、14和45 d的GMT差异有显著意义;不同性别间免后14和45 d的GMT差异均无显著意义;不同年龄组间GMT14 d差异有显著意义,45 d差异无显著意义。结论国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗安全,免疫效果好。

精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化

通过狂犬病病毒灭活和纯化试验 ,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求。

Vero细胞狂犬病疫苗的免疫原性研究

目的研究Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗的安全性和免疫原性。方法对１１例暴露狂犬病病人进行常规５针注射Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗（ＰＶＲＶ），在注射后的不同时间抽取静脉血，用小鼠中和试验（ＭＮＴ）等方法检测病人体内的中和抗体水平。结果显示３种不同的方法在第０、７天时的体内中和抗体均未达到保护水平（＜０．５ＩＵ／ｍｌ）；１４天时病人的中和抗体全部阳转，ＧＭＴ为７．３２ＩＵ／ｍｌ；２８天时中和抗体达到最高值，ＧＭＴ为１４．５８ＩＵ／ｍｌ；９０天和１８０天的ＧＭＴ分别为８．４３和３．３８ＩＵ／ｍｌ，阳性率仍为１００％，抗体仍保持在较高水平。整个观察过程中无１例发性过敏反应。

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制

目的 应用Ｖｅｒｏ细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Ｖｅｒｏ细胞经转瓶或生物反应器培养制备人用精制江大病疫苗。结果各项质控指标均符合ＷＨＯ和中国生物制品规程标准，经Ｉ期临床观察疫苗是安全的。结论用Ｖｅｒｏ细胞生产的狂犬病疫苗产量大，效价高，不良反应少，且能进行工业化生产。

人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞)临床观察及免疫学效果研究

目的 研究人用狂犬病纯化疫苗的安全性和保护性。方法 采用狂犬病疫苗暴露后免疫程序接种受试人群 ,I期临床接种 2 0人 ,II、III期临床接种 30 4人 ,观察注射后反应 ,采用小鼠脑内中和试验法测定其中 6 2人中和抗体水平。结果 全部受试者有 13.2 7%出现轻度副反应 ,无中强度副反应 ,中和抗体阳转率为 10 0 % ,中和抗体GMT为 11.89IU/ml。

Vero细胞口服狂犬病疫苗的研究

本试验采用ＣＴＮ－１株经Ｖｅｒｏ细胞传１５代，病毒滴度均在７．０～８．０ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ之间。给８只犬分别口服８．１ｌｏｇＬＤ５０的疫苗３０天的中和抗体几何平均效价为１：１１０，中和抗体的平均国际单位为２．５９ＩＵ／ｍｌ，阳转率为１００％；给４只犬分别口服７．４３ｌｏｇＬＤ５０的疫苗，阳转率为５０％，中和抗体的平均国际单位为２．４８ＩＵ／ｍｌ。选用３５－６０日龄的乳犬１６只口服１０个剂量的疫苗，并在口服后５、１０、２０天、３个月各杀３只犬取脑及唾液腺分别在ＢＨＫ２１细胞上盲传２代，同时在昆明种小白鼠乳鼠脑内盲传２代，进行病毒分离，均为阴性，余下犬观察１２个月均正常。总之该口服狂犬病疫苗对犬具有较好的安全性及口服免疫原性。

Vero细胞在人用狂犬病疫苗中的研究和应用进展

Vero细胞是WHO认可的疫苗生产用细胞,已成为全世界疫苗生产推荐的细胞基质。因其易于生长、可在微载体的发酵罐中大规模扩增、可模式化培养且在限定代次内细胞性状比较稳定的特点,受到疫苗研发与生产工作者的青睐。Vero细胞正式用于人用狂犬病疫苗的生产也有40多年的时间,对狂犬病疫苗的推广使用和狂犬病的预防发挥了重要的作用。本文旨对Vero细胞在人用狂犬病疫苗中的研究和应用进行总结回顾。

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)对大鼠的生殖毒性

目的:观察不同剂量冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)对大鼠的胚胎-胎仔发育毒性,为评价冻干狂犬病疫苗的安全性提供依据。方法:雌性SD大鼠60只,随机分为4组:低剂量疫苗组(1剂/次)、高剂量疫苗组(2剂/次)、阴性对照组和辅料对照组,于交配前第0、3、7、14天免疫,21天合笼交配后,妊娠第7和14天再次免疫,分别观察各项生殖毒性指标。结果:各剂量组孕鼠生殖能力及胎仔生长发育各项指标均未见明显差异。结论:高剂量冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)对大鼠无生殖毒性作用。

狂犬病病毒Vero细胞适应株的建立及其应用于疫苗生产的可行性探讨

将狂犬病病毒７ａＧ固定毒适应于Ｖｅｒｏ细胞，建立了稳定的ＶＲＧ适应株。病毒滴度可达７．６９ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ，病毒最适增殖时间５—７天，最适种毒比例１：１０￣３。应用转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞增殖病毒，收获病毒液经β—丙内脂灭活，超离浓缩制备疫苗，效力试验结果（ＮＩＨ法）较原制疫苗成倍增高，且都大于２．５ＩＵ／２ｍｌ，表明ＶＲＧ适应株可应用于制备Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗。

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)稳定剂配方的筛选

目的筛选出适合冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的热稳定性好、无明胶的稳定剂配方。方法以水分、外观、效价、热稳定性效价为指标,尤其是效价和热稳定性效价,对A、B、C、D、E、F、G等6种稳定剂配方进行系统的优化组合筛选,6种稳定剂配方分别含有蔗糖、乳糖、人血白蛋白、甘氨酸、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇、右旋糖苷,其中A为现行疫苗生产配方。运用单因素五元设计法,筛选出最优稳定剂组合。结果方差分析结果显示D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的M-ABT结果 13.95,37℃放置4周M-ABT结果 13.05;NIH效价1.94,37℃放置4周NIH效价1.56。结论 D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)有较好的保护作用。

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的保护性试验

用CTN 1V株生产的精制Vero细胞狂犬病疫苗腹腔免疫小鼠后 ,再用狂犬病毒街毒株SBD0 7脑内和肌肉攻击 ,结果表明稀释 5倍疫苗的保护率分别为 88 9%和 90 % ,且 5倍稀释疫苗的保护效果与原苗相当 ,此研究证明CTN 1V株能用来作为疫苗的生产毒株。

VERO细胞狂犬病疫苗纯化工艺中样品浓度对纯化效果的影响

目的 研究浓缩 Vero细胞狂犬病疫苗蛋白浓度对纯化效果的影响。 方法 用超滤浓缩法对狂犬病疫苗进行不同倍数的超滤浓缩 ,将浓缩后不同倍数的样品分别用凝胶柱层析法进行纯化。 结果 样品浓度在 4 0 mg/ ml下时 ,狂犬病毒收集液中杂蛋白去除率可达 99%以上 ,小牛血清含量在 2 5～ 37.5 ng/ ml之间 ;浓度超过 4 0 mg/ ml时 ,随着样品浓度的增加 ,狂犬病毒收集液中杂蛋白的去除率逐渐下降 ,且有病毒丢失。 结论 采用凝胶柱层析法纯化狂犬病疫苗 ,蛋白浓度应在 4 0 mg/

Vero细胞狂犬病疫苗在凝胶柱层析工艺中样品浓度对纯化效果的影响

为研究浓缩Vero细胞狂犬病疫苗蛋白浓度对纯化效果的影响 ,用超滤浓缩法对狂犬病疫苗进行不同倍数的超滤浓缩 ,将浓缩后不同倍数的样品分别用凝胶柱层析法进行纯化。结果样品浓度在 4 0mg/ml以下时 ,狂犬病毒收集液中杂蛋白去除率可达 99%以上 ,小牛血清含量在 2 5～ 37.5ng/ml之间 ;浓度超过 4 0mg/ml时 ,并随着样品浓度的增加 ,狂犬病毒收集液中杂蛋白去除率逐渐下降 ,且有病毒丢失。因此采用凝胶柱层析法纯化狂犬病疫苗 ,蛋白浓度应低于 4 0mg/ml。

BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性

目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1剂,4针组于0 d、3 d、7 d、14 d各接种1剂;对照组接种市售国产同类疫苗,于0 d注射2剂、7 d及21 d各1剂。初免前(0 d)及初免后7 d、14 d、28 d、35 d、49 d、63 d后肢隐静脉采血,分离血清及外周血淋巴细胞。快速荧光灶抑制实验(Rapid Fluorescent focus Inhibition Test, RFFIT)及酶联免疫斑点检测技术(Enzyme-linked Immunospot Assay, ELISPOT)分别检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体水平和外周血淋巴细胞中细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平。结果 食蟹猴血清中和抗体水平于免疫前均呈阴性(抗体效价<0.5 IU/mL),3针组和对照组在初免后7~28 d呈上升趋势,于28 d达最高,4针组在14 d达最高;在初免后28 d,对照组、3针组中和抗体水平显著高于4针组;初免后35 d,3针组中和抗体水平显著高于4针组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。3针组及4针组外周血淋巴细胞中IL-2及IFN-γ水平在7~14 d呈上升趋势,于14 d达最高,且3针组IFN-γ水平显著高于对照组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义。结论 BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)具有良好的免疫原性,具有优化狂犬病免疫接种程序的应用价值。

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗临床观察研究

目的 观察新生产的人用纯化Vero -细胞狂犬病疫苗的临床免疫及血清学效果。 方法 在山东省、河北省和山西省的三个不同现场选择 15～ 60岁暴露者共 3 18人作为观察对象 ,按地区分为三组。按照国家药品临床管理规定和中国生物制品规程 ( 2 0 0 0年版 )狂犬病疫苗免疫检测标准观察免疫接种后全身、局部反应和抗体水平。 结果 三组中和抗体阳转率均为 10 0 % ,GMT为 68 18× 10 3nmol·(s·L) - 1 ( 4 .0 9U ml) ,免疫接种后无异常反应 ,轻度全身反应为 1 6% ,轻度局部反应为 1 2 %。 结论 本所研制的人用Vero细胞狂犬疫苗使用安全、无异常反应 ,副反应率低 ,仅发生轻微一般反应 ,免疫保护效果好。