甲状腺激素受体相互作用物11基因变异所致软骨生成不全IA型家系遗传学分析

软骨生成不全IA型是一种罕见的致死性疾病,以常染色体隐性方式遗传,该疾病的发生与人14号染色体上甲状腺激素受体相互作用物11(TRIP11)基因变异有关。本研究采集了1例超声检查疑似致命性骨骼发育不良胎儿的流产皮肤组织及其父母的静脉血,通过提取基因组DNA,应用全外显子组测序技术对胎儿组织及其父母进行平行测序,对疑似致病变异用Sanger测序进行验证;并对以往报道基因检测结果进行文献复习,结合文献复习探讨该病的临床特点。结果发现了胎儿TRIP11检测到复合杂合变异c.790C>T(p.R264*)/c.589-2A>G,两位点分别来自父亲和母亲,符合常染色体隐性遗传。本研究报道的TRIP11基因复合杂合变异尚未见报道,拓宽了软骨生成不全1A型的基因变异谱,为该家庭的遗传咨询及产前诊断提供了重要的分子基础。

甲状腺激素受体相互作用因子13在泌尿生殖系统恶性肿瘤中的研究进展

来自中胚层的泌尿生殖系统恶性肿瘤非常常见,严重威胁人们的健康和生活质量。泌尿生殖系统肿瘤发病机制复杂多样。研究表明,甲状腺激素受体相互作用因子13(TRIP13)在人类多种恶性肿瘤组织中异常高表达,可通过诱导肿瘤细胞上皮-间充质转化或介导纺锤体装配检查点沉默抑制细胞凋亡,增强细胞增殖能力,以及干预DNA双链断裂非同源末端修复效率,诱导染色体不稳定性。本文对TRIP13在泌尿生殖系统恶性肿瘤中的研究进展及相关机制进行总结,为临床工作中相关肿瘤的诊疗及预后研究提供理论基础及研究方向。

人甲状腺激素受体相互作用蛋白15与甲状腺激素受体的相互作用

目的 确立人甲状腺激素受体相互作用蛋白 15 (hTRIP15 )与甲状腺激素受体 (TR)的相互作用及其作用方式。方法 应用酵母双杂交技术及半乳糖苷酶定性或定量测定。结果 将构建质粒 (BD TRIP15与AD TR)共转化AH10 9酵母细胞后 ,在高严格度选择的培养基 (SD Leu Trp Ade His) 10天克隆长出 ,相比阳性对照质粒 (BD P5 3 +AD Tag)共转后 3天克隆生长。将构建载体及对照载体转化Y187酵母菌株 ,检测LacZ报告基因的表达 (β gal单位 ) ,阳性对照质粒 (BD P5 3 +AD Tag)为 14 9.5 7± 0 .5 1,BD TRIP15 +AD TR为 3 .2 3± 10 .15 ,加入T3 后为 2 .0 2± 0 .0 8,而阴性对照质粒 (BD P5 3 +AD LamC)仅为 0 .0 2± 0 .0 1β gal单位 ,且T3 呈剂量依赖方式抑制两者的相互作用。结论 hTPIR15能与TR共相互作用 ,T3 呈剂量依赖方式抑制两者间的作用 ,仅在超大剂量时才可完全阻断hTRIP15与TRα间的作用。

人甲状腺受体相互作用蛋白15基因全长cDNA的克隆及其特性

通过生物信息学分析及RT PCR技术 ,从人垂体cDNA文库中克隆到甲状腺素受体相互作用蛋白 15(hTRIP15)的全长cDNA ,长度 1963bp ,编码 4 4 3氨基酸 ,同时克隆该基因不同剪接方式所形成的新的异构体 ,长度 1984bp ,编码 4 50氨基酸 .与基因组序列比较显示该基因具有 12个外显子 ,5号外显子 3′端具有 2个剪切的接点 (-ag) .搜寻UniGene数据库作染色体定位于D15S146 D15S117,该基因在生物进化上具有较高的保守性 ,从单细胞藻类到人类均有该基因同源物表达 ,亚细胞定位为核内 .Northern杂交显示 ,该基因具有 3种不同大小的转录本 ,分别约为 2 0、3 5及 4 0kb ,且在人体各组织中均有一定表达 ,其中骨骼肌、心脏及肾脏组织为高表达 .半定量RT PCR显示在一些内分泌组织均有表达 ,以肾上腺较高 .

胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响。结果谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核。通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01)。结论 IGFBP-3通过与TRα1相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据。

基于生物信息学方法分析软组织肉瘤中甲状腺激素受体相互作用蛋白13的表达及临床意义

目的探讨甲状腺激素受体相互作用蛋白13(TRIP13)在软组织肉瘤中的表达及临床意义。方法应用Oncomine、GEPIA、CCLE和Kaplan-Meier Plotter数据库分析TRIP13在软组织肉瘤中的表达及与预后的关系。应用cBioPortal数据库分析软组织肉瘤中TRIP13突变情况及与患者预后的关系。应用String数据库构建蛋白质相互作用网络,应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果TRIP13在大部分肿瘤中表达水平升高。在软组织肉瘤组织和细胞中,TRIP13表达水平均升高。TRIP13高表达与软组织肉瘤患者的预后差有关。21%的软组织肉瘤患者发生TRIP13基因突变,与TRIP13未突变组患者相比,TRIP13突变组患者的中位总生存期(OS)和中位无病生存期(DFS)均明显较短。应用String数据库共获得10个与TRIP13相互作用的蛋白,这些蛋白主要具有激酶结合、腺苷三磷酸(ATP)酶活性、蛋白激酶活性等生物学功能,主要参与细胞周期、人T细胞白血病病毒1感染、黄体酮介导的卵母细胞成熟、卵母细胞减数分裂及病毒致癌过程。结论TRIP13在软组织肉瘤组织和细胞中表达水平均较高,其与软组织肉瘤患者的预后有关,有望成为软组织肉瘤诊断和治疗的生物标志物。

酵母双杂交筛选雄激素受体辅助调节因子267-α(ARA267-α)的相互作用蛋白

目的 :通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子 2 6 7 α(androgenreceptor associatedcoregulator2 6 7 α,ARA2 6 7 α)有相互作用的蛋白质 ,为研究ARA2 6 7 α的生理功能寻找证据和方向。方法 :以能表达ARA2 6 7 α中 4个PHD(planthomeodomain)和 1个SET[Su(var) 3 9,Enhancer of zeste,Trithorax]结构域的pGBKT7 PHD SET重组质粒为“诱饵” ,采用酵母融合 (yeastmating)方法筛选预转化的人脑cDNA文库。挑选阳性酵母菌落进行质粒提取、限制性内切酶分析和DNA测序。将测序结果在GenBank中进行核苷酸序列同源性比对 ,确定它们所对应的基因。通过再次酵母双杂交排除假阳性相互作用。结果 :筛选cDNA文库共获得约 6 0 0个阳性酵母菌落 ,随机挑选其中的6 5个菌落提取混合质粒。经过在氨苄青霉素培养盘中筛选 ,共得到 4 3个文库pACT2 cDNA质粒。选取 35个酶切片段不同的文库pACT2 cDNA质粒进行测序 ,测序结果比对揭示 ,35个cDNA插入片段来源于 16种不同的基因。酵母双杂交证实其中RanBPM是ARA2 6 7 α的假阳性作用蛋白。结论 :通过筛选cDNA文库发现ARA2 6 7 α可以与多个不同的蛋白质相互作用 ,这提示ARA2 6 7 α可能是一个具有多种生理功能的蛋白分子 ,而RanBPM极可能是一个转录因子。

PES1蛋白与雄激素受体的相互作用及定位

目的：研究PES1蛋白与雄激素受体（An）之间的相互作用。方法：利用免疫共沉淀实验检测PES1蛋白与AR之间的相互作用，并进行相互作用定位；利用Western印迹研究PESl对乳腺癌细胞内AR表达水平的影响。结果：免疫共沉淀实验显示PES1蛋白与AR存在相互作用；PES1蛋白的1—110、111-220、221-320和311-588氨基酸残基（aa）区域均能与AR结合，415～588aa不能结合AR；AR的651-918aa区域与PESl结合。PESl不能调节乳腺癌细胞AR的表达水平。结论：PES1多个区域均能与AR相互作用，并且主要结合在AR的转录激活结构域2，为进一步探讨PES1对AR功能的调节奠定了基础。

类胰岛素结合蛋白-6和甲状腺素受体a1相互作用并干扰TR：RXR异二聚体的形成

类胰岛素结合蛋白-6（IGFBP-6）在细胞生长过程中具有IGF依赖性和非依赖性效应。之前的研究已经证明IGFBP-6具有功能序列可以介导其进入细胞核。但是，IGFBP-6在细胞核中的非IGF依赖作用还不清楚。研究目的：探讨IGFBP-6对甲状腺素信号在靶基因转录调控中的影响机制，为IGFBP-6作为药物治疗甲状腺素引起的疾病提供实验依据。具体探讨IGFBP-6能否与甲状腺素受体a1（TRa1）和视黄醇类X受体a（RXRa）相互作用，并检测IGFBP-6能否阻止TR：RXR异二聚体的形成。

CUEDC2与雌激素受体β相互作用并抑制其转录活性

目的:探索未知功能蛋白CUEDC2对雌激素受体(ER)β转录活性的调控,为进一步阐明CUEDC2在乳腺癌发生发展中的作用提供线索。方法:运用双荧光报告系统检测雌激素受体的转录激活活性,运用GST pull-down技术检测CUEDC2与ERβ的相互作用,同时外源过表达CUEDC2及ERβ,通过Western印迹检测CUEDC2对ERβ表达水平的影响。结果与结论:CUEDC2能够与ERβ相互作用并抑制ERβ的转录活性,但其对ERβ的表达水平没有影响。

c-abl通过与雌激素受体β相互作用上调其转录活性

雌激素受体β(ERβ)在心血管疾病发生发展中起着重要的作用,但是其在心血管病中发挥作用的机制还不清楚.因此寻找与ERβ相互作用的共调节因子对阐明ERβ信号通路具有重要价值.应用GST沉淀、免疫共沉淀技术,发现ERβ可以与c-abl相互作用,并可被c-abl磷酸化.通过荧光素酶报告基因方法发现,c-abl可以上调ERβ转录激活的活性,并且上调作用可以被c-abl的抑制剂STI571抑制.上述结果提示c-abl是新的ERβ共刺激因子,为进一步研究ERβ通路在心血管疾病中发挥作用的机制打下基础.

甲状腺激素受体相互作用因子13在B细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨甲状腺激素受体相互作用因子13(TRIP13)在B细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义。方法选取2018年9月至2020年11月在嘉兴市第二医院就诊后进行淋巴结活检,并留取多余的新鲜淋巴结活检组织冻存的B细胞淋巴瘤患者44例为研究对象,参照2016年WHO对B细胞淋巴瘤分型诊断标准,将44例患者分为惰性淋巴瘤组20例和侵袭性淋巴瘤组24例。采用RT-PCR法检测B细胞淋巴瘤组织中TRIP13 mRNA表达水平,比较惰性淋巴瘤组和侵袭性淋巴瘤组TRIP13 mRNA表达水平。采用En Vision免疫组化染色法检测TRIP13蛋白表达情况。根据TRIP13免疫组化表达情况,将B细胞淋巴瘤患者分为TRIP13阴性组(0)和TRIP13阳性组(≥1+),比较两组患者性别、年龄、B细胞淋巴瘤分型情况、增殖指数(Ki-67)、乳酸脱氢酶、β2微球蛋白、白蛋白水平、T辅助细胞比例、活化CD4^(+)细胞比例、活化CD8^(+)细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)等临床特征;再根据TRIP13免疫组化表达强度,将TRIP13阳性患者分为TRIP13弱阳性组(1+)和TRIP13强阳性组(≥2+),比较两组患者上述临床特征。结果惰性淋巴瘤组和侵袭性淋巴瘤组TRIP13 mRNA表达水平分别为0.37(0.17,1.36)和0.69(0.28,1.15),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TRIP13阳性组患者TRIP13 mRNA表达水平、Ki-67水平及活化CD8^(+)细胞比例均高于TRIP13阴性组,T辅助细胞比例、活化CD4^(+)细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)均低于TRIP13阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TRIP13弱阳性组TRIP13 mRNA表达水平、Ki-67水平、活化CD8^(+)细胞比例均低于TRIP13强阳性组,活化CD4^(+)细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)均高于TRIP13强阳性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论B细胞淋巴瘤组织中TRIP13阳性及强阳性与更高的Ki-67水平、活化CD8^(+)细胞比例及更低的活化CD4^(+)细胞比例有关,提示TRIP13阳性可能和肿瘤细胞增殖及免疫调控异常等发病机制有关。

文蛤甲状腺激素受体MmTR互作蛋白筛选及其对Aroclor 1254胁迫的转录响应研究

环境中存在的甲状腺干扰物(thyroid disrupting chemicals,TDCs)可影响生物体内甲状腺激素(thyroid hormone,THs)的合成、分泌、转运、代谢和作用等过程,干扰THs稳态,引起THs水平失衡。甲状腺激素受体(thyroid hormone receptors,TRs)是一种存在于细胞核内的DNA结合转录因子,属于配体依赖型核激素受体超家族。TRs可与甲状腺激素响应元件(thyroid hormone response elements,TREs)结合,调控其转录表达。TDCs可作为生物体内TRs的配基,竞争性地与TRs结合,进而激活甲状腺信号通路,调控机体的整个甲状腺信号通路基因的转录表达。为探究TDCs对海洋无脊椎动物体内甲状腺激素是否具有干扰效应及其机制,本文通过构建文蛤消化盲囊组织酵母双杂交cDNA文库和文蛤甲状腺激素受体TR基因的诱饵载体pGBKT7-MmTR,在文库内进行MmTR的互作蛋白筛选和鉴定。结果表明,文蛤消化盲囊酵母双杂交cDNA文库中,cDNA片段大小在0.5~2 kb之间,库容约>2×10^(6) cfu。重组质粒pGBKT7-MmTR诱饵载体无毒性和自激活活性,可应用于酵母双杂交系统。经文库筛选共得到36个阳性克隆子,测序获得30个阳性克隆片段。随机选取BIRC2_3与MmTR基因进行点对点验证,结果为阳性,推测所有结果真实可靠。经比对分析,MmTR的29个潜在互作蛋白,功能涉及生长与发育过程、蛋白质代谢与免疫调控过程、应激响应过程和转录调控过程。不同浓度Aroclor 1254胁迫下幼体及成体文蛤体内MmTR基因潜在互作蛋白基因的转录响应分析发现,大多数潜在互作蛋白基因会对低浓度(10 ng·L^(-1)和20 ng·L^(-1))的Aroclor 1254短时间(1 d)暴露产生转录上调响应,且在成体阶段相关基因的转录响应更强烈;与成体阶段相比,文蛤幼体阶段暴露于高浓度(2000 ng·L^(-1))的Aroclor 1254中,生长与发育、蛋白质代谢与免疫调控过程相关的MmTR潜在互作蛋白基因RSPH9、N23、ferritin、BHMT、SCC4、PSMB5具有更明显的上调表达趋势;在成体文蛤体内,未知蛋白基因和位置功能蛋白基因的表达更易受到Aroclor 1254胁迫的影响。本研究结果为深入研究TDCs对无脊椎动物甲状腺激素的作用奠定基础,并且对海洋环境的保护有重要意义。

hTRIP15对甲状腺激素受体功能的影响

目的确立人甲状腺激素受体相互作用蛋白15(hTRIP15)对甲状腺激素受体(TR)功能的影响。方法应用融合蛋白、蛋白体外翻译及谷胱苷肽S转移酶“拉下”(GSTpulldown)试验研究蛋白—蛋白的相互作用,凝胶阻滞(gelshift)试验检测蛋白-DNA的结合活性。结果经大肠杆菌表达hTRIP15融合蛋白或体外翻译TRα所显示的分子量与预测大小相吻合。hTRIP15及hTRIP15N末端均可与TRα相互作用;hTRIP15抑制TR与TR反应元件(TRE)结合,且增加hTRIP15剂量时更明显。结论提示hTRIP15作为共抑制因子调节TR对靶基因的转录,hTRIP15N端是TR结合功能域,而C端可能为调节功能域。

甲状腺激素受体相关蛋白15的研究进展

甲状腺激素受体相关蛋白15(TRIP15)是一个核受体家族的选择性转录共抑制子,参与构成COP9信号复合体,调节机体蛋白质的降解。TRIP15与涉及转录调节、细胞周期调控、DNA损伤修复的多种生物大分子相互作用,参与细胞增殖、分化、凋亡等重要生理过程,其表达调控的信号通路与肿瘤、脂质代谢紊乱及内分泌疾病的发生与发展密切相关。TRIP15具有复杂的蛋白质相互作用网络及多样的生物学功能,可能会成为疾病治疗的新靶点。

雌激素受体和细胞增殖周期调控蛋白D1在分化型甲状腺癌中的表达及意义

目的:探讨雌激素受体(ER)和细胞增殖周期调控蛋白(cyclinD1)在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达及意义。方法:用免疫组织化学SP法研究不同甲状腺组织中ER和cyclinD1的表达。DTC43例(乳头状癌39例,滤泡状癌4例),甲状腺良性腺瘤30例,腺瘤旁正常组织16例。结果:DTC组织中ER和cyclinD1蛋白阳性率分别为53.5%(23/43)、65.1%(28/43);甲状腺良性瘤中ER和cyclinD1蛋白阳性率分别为26.7%(8/30)、36.7%(11/30);正常甲状腺组织中ER阳性率为12.5%(2/16),而cyclinD1则不表达。DTC中ER的表达明显高于甲状腺良性腺瘤和正常甲状腺组织(P<0.05);DTC中cyclinD1的表达明显高于甲状腺良性腺瘤(P<0.05);且DTC中cyclinD1和ER表达存在正相关关系(P<0.05)。结论:雌激素在DTC的发生、发展中有促进细胞增殖的作用;DTC可能为雌激素依赖性肿瘤。

G蛋白偶联雌激素受体1、表皮生长因子受体和趋化因子受体1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor1,GPER1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和趋化因子受体1(chemokine receptor1,CXCR1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达及意义。方法甲状腺乳头状癌68例、结节性甲状腺肿42例,采用免疫组织化学S-P法检测GPER1、EGFR和CXCR1的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,以及三者间表达的相关性。结果在PTC组织中,GPER1、EGFR和CXCR1的表达阳性率分别为76.5%、66.2%、64.7%,明显高于结节性甲状腺肿组的21.4%、16.7%和11.9%(P<0.01);GPER1、EGFR和CXCR1在PTC中的表达与颈部淋巴结转移相关(P<0.05),而与其他临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小及TNM分期)无相关性(P>0.05);在PTC及PTC淋巴转移癌组织中,GPER1与EGFR的表达呈显著正相关(r=0.262,P=0.031;r=0.542,P=0.002)、GPER1与CXCR1的表达也呈显著正相关(r=0.276,P=0.025;r=0.483,P=0.006)。结论 GPER1、EGFR和CXCR1的两两共表达与PTC的发生、发展密切相关,三者间可能存在一种相互作用。

肌钙蛋白I2的原核表达及与ERRα1的体外相互作用

孤儿受体雌激素受体相关受体α1(ERRα1)与乳腺癌有密切的关系.酵母双杂交筛选发现乳腺组织中肌钙蛋白I2(TNNI2)与其有明显的相互作用.为进一步研究TNNI2与ERRα1的相互作用,融合表达了GST-TNNI2原核蛋白,并体外翻译了35S标记的ERRα1蛋白,将二者共同温育进行GST捕获实验.放射自显影结果显示,TNNI2能够捕获35S标记的ERRα1,证明TNNI2与ERRα1存在体外直接的相互结合,提示了肌钙蛋白I2在ERRα1参与的生理过程中可能有重要的作用.

Macro Domain家族成员LRP16是多种核受体的相互作用因子

LRP16基因是macro domain家族成员之一,C末端含有唯一的1个保守的功能结构域.既往研究表明,该基因具有雌激素反应性,并可通过与雌激素受体α(ERα)相互作用调控其转录活性.近期我研究组发现,LRP16可与雄激素受体(AR)的共激活因子ART-27相互作用.本研究首先通过GST pull-down方法验证LRP16/ART-27/AR三者之间相互作用关系,并用免疫共沉淀实验明确了LRP16与AR存在直接的相互作用,且这种相互作用并不依赖于ART-27的存在;采用GST pull-down进一步明确LRP16与AR相互作用的结构域.结果发现,LRP16通过C端的macro domain结构域与AR的LBD域相互作用;鉴于核受体家族有较高程度的氨基酸序列保守性与功能结构域的相似性,通过GST pull-down验证了LRP16与核受体超家族成员ERβ、GR、PPARα、PPARγ的相互作用,提示LRP16至少还可与ERα以外的5个核受体家族成员相互作用;进一步采用核受体荧光素酶报告基因转染细胞,通过检测荧光素酶活性证实LRP16可增强AR、GR、ERβ、PPARα、PPARγ的转录激活活性.本研究初步证实,macro domain家族成员LRP16可与多个核受体相互作用,并增强其转录激活活性,是核受体家族的共激活因子,为进一步研究LRP16在核受体转录调控中的生理病理学功能奠定基础.

ERβ相互作用蛋白HPIP的分离及其在ERβ信号途径中的作用

目的以雌激素受体β(ERβ)AF2结构域为诱饵,采用酵母双杂交方法,从人类乳腺cDNA文库筛选的蛋白HPIP,进一步验证其与ERβ相互作用的功能。方法分别用细胞免疫荧光分析和酵母双杂交的方法筛选蛋白的细胞内定位及结合结构域的鉴定,转染293T胚胎肾细胞,利用荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定,检测HPIP对ER转录活性的影响。结果 HPIP的编码基因主要分布于细胞质中,HPIP与ERβAF2结构域相互作用,而不与ERβAF1和DBD相互作用,HPIP能降低ER的转录活性,而且这种抑制作用在激素存在时更显著,但是雌激素受体抑制剂存在时,HPIP反而增强ERβ的转录活性。结论 HPIP可能通过影响ERβ信号途径在乳腺癌发生、发展中起重要作用。