HSP70小干扰RNA对人瘢痕成纤维细胞胶原表达的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)小干扰RNA(HSP70 siRNA)对人瘢痕成纤维细胞胶原表达的影响。方法取56例人瘢痕组织分离人瘢痕成纤维细胞并体外培养。将其分为观察组、阴性对照组和空白对照组。观察组、阴性对照组用脂质体转染法转染HSP70 siRNA和无关序列24 h,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR法检测各组HSP70、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA,Western blotting法检测HSP70、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白,胶原检测试剂盒检测细胞培养液中总胶原水平。结果与阴性对照组和空白对照组相比,观察组HSP70、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白相对表达量以及细胞培养液中总胶原水平均降低(P均<0.05),阴性对照组和空白对照组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论转染HSP70 siRNA可抑制人瘢痕成纤维细胞胶原表达。

冬凌草甲素对人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞生物学行为的影响及作用机制

目的探讨冬凌草甲素(ORI)对人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞(HKF)的影响及作用机制。方法CCK-8法检测ORI对HKF的增殖活性的影响,实验分为对照组和实验组,细胞划痕和transwell实验检测HKF的迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ORI对HKF的细胞外基质形成相关mRNA和纤维连接蛋白1(FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、COLⅢ表达的影响。实验分为对照组、模型组和转化生长因子(TGF)-β1+ORI组,用RT-qPCR和Western blot检测ORI对HKF内TGF-β1诱导的相关mRNA和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2蛋白(p-Smad2)、p-Smad3表达的影响。结果CCK-8显示随着ORI浓度增加,HKF细胞抑制率逐渐增加;与对照组比较,实验组细胞24 h迁移面积、侵袭细胞数显著下降,FN1、α-SMA、COL I、COLⅢ表达水平显著下降(P<0.05);与对照组相比,模型组NLRP3、ASC、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,TGF-β1+ORI组NLRP3、ASC、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3表达显著下降(P<0.05)。结论ORI通过阻断TGF-β1/Smad信号通路和NLRP3介导的炎症反应,抑制HKF的增殖、迁移和侵袭能力以及细胞外基质的形成和沉积。

α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人瘢痕成纤维细胞的条件优化

目的优化α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸(ASODN)转染人增生性瘢痕成纤维细胞的条件。方法ASODN经FITC标记,以阳离子脂质体Oligofectamine为载体转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,转染后24h激光共聚焦显微镜下记录荧光素的细胞内分布;流式细胞术计数荧光细胞百分率、作细胞凋亡分析,以荧光细胞百分率最高者为最佳转染效率,依次筛选细胞接种数量、ASODN浓度和脂质体量。结果(1)脂质体转染ASODN,所用各转染条件未引起成纤维细胞凋亡;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。(2)接种细胞数量为14.25×104个/孔的荧光细胞百分率为74.0%,接种数量为30.00×104个/孔的为73.3%,接种数量为32.25×104个/孔的为94.3%,接种数量为39.00×104个/孔的为64.2%。(3)转染液中ASODN浓度100nmol/L,荧光细胞百分率为38.1%;150nmol/L时,为62.6%;200nmol/L时49.5%;250nmol/L时35.8%。(4)转染所用的脂质体量2μl时,荧光细胞百分率为77.01%,3μl时85.05%,4μl为71.64%。结论α1(I)型前胶原基因ASODN脂质体转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件为接种细胞数量32.25×104个/孔,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体3μl/孔。通过优化转染条件可提高转染效率,为下一步设计药物开发研究提供基础。

miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响及其机制。方法:组织块法培养原代人瘢痕成纤维细胞6、12、24和48 h;miR-203模拟物(miR-203 mimics)转染人瘢痕成纤维细胞并培养24 h;采用CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-203与p53基因家族成员截短型p63(ΔNp63)的靶标关系;qRT-PCR检测miR-203和ΔNp63 mRNA的表达水平;Western blotting检测ΔNp63和P53的蛋白表达水平。结果:miR-203在瘢痕成纤维细胞中表达明显降低(P<0.01),且呈时间依赖性;转染miR-203 mimics后作用24 h,miR-203表达水平显著增加(P<0.01);miR-203过表达使细胞存活率降低至42%(P<0.01),细胞凋亡率增高至45%(P<0.01);miR-203与ΔNp63存在直接靶标关系;miR-203过表达可显著抑制ΔNp63的mRNA和蛋白表达水平,同时显著上调P53的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-203过表达可抑制人瘢痕成纤维细胞增殖,其机制可能是通过靶向抑制ΔNp63的表达进而上调P53的蛋白表达。

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达和胶原合成的影响

目的:研究结缔组织生长因(子Connective tissue growth factor,CTGF)siRNA表达载体对瘢痕疙瘩成纤维细(胞Human keloi d fibroblasts,HKFs)中CTGF表达、胶原蛋白分泌的影响。方法:根据RNA干扰(RNA interference,RNAi)设计原则,设计并构建特异性CTGF siRNA表达载体,转染体外培养HKFs。用荧光实时定量PCR分析细胞中CTGF mRNA表达水平,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原蛋白分泌水平。结果:与质粒组和对照组比较,CTGF siRNA表达载体组的CTGF mRNA表达降低约59.9%(P<0.05),胶原蛋白分泌明显下降(P<0.05)。结论:CTGF siRNA表达载体能明显抑制HKFs中CTGF表达及胶原蛋白分泌水平,有可能成为临床上治疗瘢痕疙瘩的新方法。

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1刺激后胶原合成的影响

目的体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA表达载体,转染导入后研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFs)胶原蛋白分泌的影响。方法体外构建CTGF序列特异性小干扰RNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察加入10 ng/mL剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激前后胶原蛋白水平的变化。结果转染小干扰RNA质粒后,胶原蛋白分泌水平降为正常表达的51.6%;经TGF-β1刺激后,蛋白表达仍无明显变化。结论小干扰RNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原蛋白分泌,为临床上瘢痕疙瘩的基因治疗提供理论依据。

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的:观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:与空白对照组相比,三七总甙含量在0.5,1.0和1.5g/L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.01),但在1.5g/L时对细胞具有毒性作用。结论:三七总甙具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。

黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长作用研究

目的:探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用。方法:以正常皮肤为对照,用免疫组化检测瘢痕疙瘩组织标本中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及其转导因子(SMAD family member,Smad)的表达情况;不同浓度黄芪总苷液干预HFF-1人皮肤成纤维细胞后,MTT法检测其最适浓度;Real time-PCR测定成纤维细胞TGF-β的转导因子Smad2(SMAD family member 2),Smad3(SMAD family member 3),Smad4(SMAD family member 4),Smad7(SMAD family member 7)mRNA的表达;Western blot检测成纤维细胞TGF-βRⅡ,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7的蛋白水平表达。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织Smad蛋白表达水平明显提高(P<0.05),TGF-βRⅡ蛋白的表达水平在两组中没有明显差异(P>0.05)。MTT检测最适给药浓度为0.5μg·ml-1。两组细胞TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达量比较,给药组Smad2的表达水平明显提高,Smad3的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:黄芪总苷液可能通过过表达Smad2以及抑制Smad3的表达来影响TGF-β/Smad通路过程从而抑制成纤维细胞的形成。

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β_1刺激结缔组织生长因子表达的影响

目的体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达基因和蛋白的影响。方法体外构建CTGF序列特异性siRNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,用10ng/ml剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激细胞,采用RQ-PCR和Western blot观察CTGF mRNA和蛋白水平的变化。结果经TGF-β1刺激后,重组质粒组CTGF mRNA仅为正常表达的56.6%(P<0.05),CTGF蛋白仅为正常表达的基线水平(P<0.05)。结论siRNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF基因表达和蛋白分泌,即使在TGF-β1刺激条件下,其分泌功能仍明显受抑。

下调lncRNA-H19表达促进人瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡和自噬

目的探讨下调长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)表达对人瘢痕疙瘩成纤维细胞系凋亡和自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法取人类瘢痕成纤维细胞系(KFs)及健康人皮肤成纤维细胞系(HDFs),将KF细胞感染lncRNA-H19F低表达腺病毒(si-lncRNA-H19)及不含si-lncRNA-H19的空病毒载体(si-eGFP)。分为HDFs组、KF组、si-lncRNA-H19+KFs组、si-eGFP+KFs组;KFs细胞共感染si-lncRNA与mTOR过表达腺病毒(Ad-mTOR)及空载体(Ad-eGFP-m),分为KFs组、si-lncRNA-H19+Ad-mTOR组、si-eGFP+Ad-mTOR组、si-lncRNA-H19+Ad-eGFP组、si-eGFP+Ad-eGFP组。RT-qPCR检测lncRNA-H19表达;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;透射电镜及吖啶橙(Ao)荧光染色观察自噬形成情况;免疫组化法检测自噬通路-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阳性表达;Western blot检测凋亡及自噬相关蛋白表达。结果与HDFs组比较,KFs组细胞lncRNA-H19表达及mTOR活性升高,自噬泡数目、凋亡与自噬相关蛋白表达降低(P<0.05);下调KFs细胞中的lncRNA-H19后,KFs细胞mTOR活性降低,凋亡及自噬活性升高(P<0.05)。下调lncRNA-H19的同时,上调mTOR,KFs细胞的自噬及凋亡活性较单独下调lncRNA-H19时升高(P<0.05)。结论下调lncRNA-H19表达,可能通过抑制mTOR途径活化,促进KFs细胞自噬及凋亡。

miR-582-5p靶向DNMT1对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的靶向作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)miR-582-5p、DNMT1 mRNA、DNMT1蛋白表达。starBase网站与双荧光素酶报告实验分析miR-582-5p与DNMT1的靶向关系。瘢痕疙瘩成纤维细胞中转染miR-582-5p或si-DNMT1,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测DNMT1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。miR-582-5p和pcDNA-DNMT1共转染,观察DNMT1过表达对miR-582-5p过表达诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响。结果与NFB组比较,KFB中miR-582-5p表达量明显减少(P<0.05),DNMT1 mRNA和DNMT1蛋白表达量显著增加(P<0.05)。miR-582-5p靶向调控DNMT1的表达。miR-582-5p过表达或抑制DNMT1表达明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、CyclinD1蛋白、Bcl-2蛋白表达(P<0.05),显著促进细胞凋亡、p21蛋白、Bax蛋白表达(P<0.05)。DNMT1过表达逆转miR-582-5p过表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、CyclinD1蛋白、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡、p21蛋白、Bax蛋白表达的促进作用。结论miR-582-5p通过靶向调控DNMT1的表达抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。

miR-200c对TGF-β_1刺激后人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的:观察转染mi R-200c mi mi cs对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFs)胶原蛋白分泌的影响。方法:将mi R-200c mi mi cs用ol i gof ect ami脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,3H-脯氨酸掺入法测加入50μg/L剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激前后胶原蛋白水平的变化。结果:转染mi R-200c mi mi cs后,胶原蛋白分泌水平降为正常皮肤成纤维细胞表达水平;经TGF-β1刺激后,其蛋白水平仍无明显变化。结论:mi R-200c可明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原蛋白分泌,推测其机制是通过抑制TGF-β1生物学作用。

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。

miR-200c抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的研究

目的：探讨miR-200c对人瘢痕疙瘩成纤维细胞human keloid fibroblasts，HKFs）增殖和胶原合成的影响及阐明其机制。方法：将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经转化生长因子（TGF）-β1诱导的HKFs，CCK-8法测细胞增殖变化；3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。Western blot检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）及磷酸化ERK1／2蛋白表达变化。结果：在有或无TGF-β1刺激下，miR一200c均能明显抑制HKFs的增殖能力及胶原合成，并且能明显减低磷酸化ERK1／2蛋白表达水平，但对非磷酸化ERK表达无影响。结论：miR-200c能抑制HKFs增殖和胶原合成．并起拮抗TGF-B1的作用。其机制可能是通过降低ERK通路活性介导实现的。

A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路表达的影响

目的:探讨A型肉毒毒素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Human keloid fibroblasts,HKF)生物学行为和TGF-β/Smad信号通路和ERK信号通路表达的影响。方法:在HKF培养过程中加入A型肉毒毒素进行干扰,观察A型肉毒毒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad通路和ERK通路相关分子的变化及细胞增殖、侵袭、凋亡情况。结果:A型肉毒毒素可以抑制HKF增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,并且明显抑制Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、α-SMA和CTGF基因的表达水平,上调IFN-γ、TGF-β3基因的表达水平。上调Smad7基因和蛋白的表达,下调VEGF基因表达,明显抑制p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平,并且抑制P-ERK1/2蛋白表达。以上生物学变化均且呈药物浓度依赖性。结论:A型肉毒毒素可抑制HKF的增殖、侵袭、血管生成和胶原积累,这些效应与TGF-β/Smad和ERK1/2信号通路有关。

LINC02532调控miR-194-3p/HMGB1分子轴对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究LINC02532调控miR-194-3p/高迁移率族蛋白1(HMGB1)轴对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖和凋亡的影响。方法:RT-qPCR法分析瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织中LINC02532和miR-194-3p表达量。将HKF细胞分为si-NC组、si-LINC02532组、miR-NC组、miR-194-3p组、si-LINC02532+anti-miR-NC组和si-LINC02532+anti-miR-194-3p组。CCK-8法、集落形成实验、流式细胞术和Western blotting分别用于分析HKF活力、集落形成数、凋亡率以及HMGB1蛋白表达。荧光素酶试验、RT-qPCR和Western blotting检测LINC02532与miR-194-3p、miR-194-3p与HMGB1之间的相互作用。结果:与正常皮肤组织比较,瘢痕疙瘩组织中LINC02532表达量明显升高,而miR-194-3p表达量明显降低(均P<0.05)。与si-NC组比较,siLINC02532组细胞活力、集落形成数、HMGB1蛋白表达降低,凋亡率、miR-194-3p表达升高(均P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-194-3p组HKF细胞活力、集落形成数、HMGB1蛋白表达降低,凋亡率升高(均P<0.05)。miR-194-3p与LINC02532、HMGB1互补结合。与si-LINC02532+anti-miR-NC组比较,si-LINC02532+anti-miR-194-3p组HKF细胞活力、集落形成数、HMGB1蛋白表达升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:人瘢痕疙瘩组织中LINC02532呈高表达,干扰LINC02532可能通过上调miR-194-3p/HMGB1分子轴抑制HKF增殖,诱导细胞凋亡。

miR-16-5p通过靶向SPARC促进人瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的研究

目的 探究miR-16-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)凋亡的作用及机制。方法 利用实时PCR技术检测人正常皮肤成纤维细胞(NFB)和KFB中miR-16-5p水平;利用细胞转染分别将miR-16-5p的对照序列(对照组)、miR-16-5p的模拟物序列(模拟物组)、miR-16-5p的互补序列(抑制物组)转染入KFB后,利用荧光显像技术和实时PCR技术检测转染效果;利用流式细胞仪和形态学手段评估各组KFB凋亡情况;利用Western blotting技术检测各组KFB凋亡相关蛋白含量;利用荧光素酶报告基因技术和Western blotting技术验证miR-16-5p的下游靶基因。结果 与NFB相比,KFB中miR-16-5p低表达;与对照组相比,模拟物组KFB内miR-16-5p含量增加(P<0.05),抑制物组KFB内miR-16-5p含量降低(P<0.01);与对照组相比,模拟物组KFB凋亡增加,抑制物组KFB凋亡减少(均P<0.05);与对照组相比,模拟物组KFB中Caspase-3和Bax表达增加,而Bcl-2表达减少;抑制物组KFB中Caspase-3和Bax表达减少,而Bcl-2表达增加(均P<0.05);与对照组相比,模拟物组抑制富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因(SPARC)3′UTR质粒的荧光素酶活性(P<0.05);与对照组相比,模拟物组KFB中SPARC蛋白低表达,而抑制物组KFB中SPARC蛋白高表达(P<0.05)。结论 miR-16-5p在KFB中低表达,miR-16-5p可通过靶向SPARC促进KFB的凋亡。

单壁碳纳米管对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响

目的探讨体外不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)和正常皮肤成纤维细胞(HSF)增殖、凋亡相关基因表达和凋亡率的影响。方法设置7个剂量组(0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL),将SWCNTs颗粒悬液分别加入HKF和HSF孵育。对照组经24h孵育后,利用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测SWCNTs对HKF和HSF细胞增殖的影响,利用流式细胞仪观察细胞凋亡并用Western Blot法测定P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果不同浓度SWCNTs对HKF和HSF细胞增殖均具有抑制作用。与HKF对照组相比,HKF各加药组在3.2μg/mL WCNTs处理时P53蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.01),Bax在1.6μg/mL SWCNTs处理时蛋白表达显著升高(P<0.01);与HSF对照组相比,HSF各加药组P53、Bax和Bcl-2在1.6μg/mL SWCNTs处理时蛋白表达显著升高(P<0.01);HKF对照组凋亡率为4.13%,3.2μg/mL的SWCNTs处理时凋亡率升高到12.16%,12.5μg/mL的SWCNTs处理时凋亡率为16.3%,凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01);HSF对照组凋亡率为8.04%,3.2μg/mL SWCNTs处理时凋亡率升高到12.84%,12.5μg/mL SWCNTs处理时凋亡率为16.15%,凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01)。结论一定剂量的SWCNTs颗粒悬液对体外培养的HKF和HSF均可产生抑制增殖和促进细胞凋亡的作用。

微小RNA-214-5p靶向鼠双微体2调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-214-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)(购自上海信裕生物技术有限公司)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法检测62例正常皮肤组织和62例皮肤瘢痕疙瘩患者miR-214-5p表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-214-5p(miR-214-5p组)、si-NC(si-NC组)、si-鼠双微体2基因(MDM2)(si-MDM2组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-214-5p(anti-miR-214-5p组)、miR-214-5p+pcDNA3.1(miR-214-5p+pcDNA3.1组)和miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2(miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组)转染至KF细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。采用t检验或单因素方差分析比较两组或多组间均数差异。结果与miR-NC组比较,miR-214-5p组KF细胞细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、吸光度(A450)值和B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)显著降低(分别为0.23±0.02比0.80±0.08、0.52±0.05比0.97±0.09、0.16±0.02比0.68±0.06,t=20.737、13.695、24.661,P<0.05),miR-214-5p、p21、bcl-2相关X蛋白(bax)和凋亡率显著升高[分别为0.51±0.05比0.14±0.01、0.95±0.09比0.27±0.02、0.79±0.08比0.14±0.04、(23.57±2.23)%比(8.16±0.85)%,t=21.769、22.127、21.802、19.371,P<0.05]。与si-NC组比较,si-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450和bcl-2显著降低(分别为0.33±0.03比0.84±0.07、0.37±0.03比0.82±0.07、0.64±0.06比0.97±0.08、0.26±0.03比0.66±0.05,t=14.621、12.328、7.926、6.112,P<0.05),p21、bax和凋亡率显著升高[分别为0.73±0.07比0.26±0.03、0.61±0.06比0.13±0.05、(18.27±1.53)%比(8.23±0.95)%,t=15.477、10.386、11.149,P<0.05]。与miR-214-5p+pcDNA3.1组比较,miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450值和bcl-2显著升高(分别为0.57±0.06比0.23±0.02、0.50±0.05比0.22±0.03、0.73±0.07比0.51±0.05、0.48±0.05比0.17±0.02,t=18.324、15.122、10.784、16.131,P<0.05),p21、bax和凋亡率显著降低[分别为0.62±0.06比0.97±0.09、0.43±0.04比0.76±0.08、(12.37±1.24)%比(23.42±2.20)%,t=9.123、13.244、18.024,P<0.05]。结论miR-214-5p可抑制KF细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与靶向调控MDM2有关。