类风湿关节炎患者外周血单核细胞Toll样受体4的表达及其与血清白介素-18水平变化的相关性

目的探讨Toll样受体4(toll-like receptor-4,TLR4)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞表面的表达及其与血清白介素(interleukin,IL)-18变化的相关性。方法用流式细胞术分别检测34例RA患者、39例健康体检者和7例骨性关节炎(osteoarthritis,OA)患者外周血单核细胞表面TLR4的阳性率和平均荧光强度(meam fluorescence intensity,MFI),同时用酶联免疫吸附试验测定血清中IL-18的水平变化,分别统计TLR4阳性率与IL-18相关性及与疾病活动评分(disease activity score28,DAS28)的相关性。结果 TLR4在RA高度活动组、中低度活动组的CD14+单核细胞表面的阳性率分别为(24.58±10.13)%、(32.47±12.40)%,高于对照组(13.14±5.22)%和OA组(10.23±3.40)%,4组间差异有显著统计学意义(P<0.01);而MFI在RA高度活动组(47.34±19.85)道、中低度活动组(42.56±17.41)道低于对照组(59.38±28.05)道和OA组(67.90±31.40)道,4组间差异有显著统计学意义(P<0.05)。RA高度活动组的血清IL-18水平为(236.71±39.42)pgml,显著高于中低度活动组(195.32±20.69)pg/ml和正常对照组(185.49±42.96)pg/ml(均P<0.01),且3组间差异亦有统计学意义(P<0.01)。TLR4阳性率与IL-18水平呈正相关(r=0.261,P<0.05),而与DAS28呈负相关(r=-0.722,P<0.05)。结论 TLR4在RA患者外周血CD14+单核细胞表面表达上调且与血清IL-18的水平呈正相关,而与DAS28呈负相关。提示TLR4可能间接参与RA的发病过程,为RA的发病机制奠定了分子基础。

人白细胞介素-18 cDNA的克隆及序列分析

从人肝组织中提取mRNA并利用反转录PCR(RT-PCR)获得人白介素—18(hIL-18)cDNA。然后克隆到T vector easy载体中,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析。结果表明中国人的IL-18 cDNA序列与西方人不存在差异。本结果为在体外表达hIL-18和进一步研究其生物活性奠定了重要基础。

hIL-18基因转导人肺癌细胞及其肿瘤原性的研究

目的建立人白细胞介素-18(h IL-18)基因转导的肺癌细胞株,并研究其肿瘤原性。方法将携带h IL-18的质粒pcDNA 3.1-h IL-18转导入人肺癌细胞系PG细胞中,G-418进行筛选,采用RT-PCR和EL ISA法检测转导的PG细胞h IL-18的表达水平;将转导的PG细胞接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果h IL-18基因成功转入PG细胞中并顺利表达;h IL-18基因在mRNA水平有表达;106个转导细胞在24 h内分泌h IL-18的水平为(186.3±15.7)pg;空载体转染细胞未检测到h IL-18;裸鼠接种h IL-18基因转导的肿瘤细胞后无肿瘤长出。结论h IL-18基因转导的PG细胞肿瘤原性下降,可作为治疗肺癌的肿瘤疫苗。