基因工程人白介素-6中试工艺研究

本研究对基因工程人白介素－6成熟肽在大肠杆菌中的表达、纯化及检定做了一系列的研究，建立了一套罐培养诱导表达，乙酸裂解包涵体，复性及纯化的中试工艺，并制备3批半成品，经检定各项指标已接近国家基因工程产品质控标准。

人白介素-6表达质粒的构建及在酿酒酵母中的表达

将带有哺乳动物细胞信号肽的人白细胞介素-6(hIL-6)基因片段构建到大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2中,获得表达质粒pYES2-hIL-6.另外,将表达质粒pYES2-hIL-6转化到酿酒酵母细胞DBY747中,并将获得的转化子在含2％乳糖的YP培养基中培养到OD_(600)=1.0左右,后用2％的半乳糖进行了诱导表达.结果发现,在培养上清中发现人白介素-6的分泌.

吴茱萸碱对结直肠癌小鼠IL-6R/STAT3通路的影响

目的探讨吴茱萸碱对结直肠癌小鼠的抑瘤作用及对白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)/信号转导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路的影响。方法将59只BALA/C小鼠随机留取9只作为对照组,其余皮下接种CT-26结直肠癌细胞株建立结直肠癌小鼠模型,将建模成功的40只小鼠随机分为模型组、顺铂组、吴茱萸碱组和顺铂+吴茱萸碱组,每组10只。顺铂组用15 mg·kg^(-1)·d^(-1)顺铂灌胃,顺铂+吴茱萸碱组用15 mg·kg^(-1)·d^(-1)顺铂+15 mg·kg^(-1)·d^(-1)吴茱萸碱灌胃,对照组、模型组用等量生理盐水灌胃。各组均每日灌胃1次,连续19周。末次灌胃24 h后,处死小鼠,称肿瘤质量并计算肿瘤体积、肿瘤抑制率;用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠肿瘤组织的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;用HE染色观察小鼠肿瘤组织的病理学变化;用免疫组织化学法检测肿瘤组织的微血管密度(microvesse density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平;用Western blot检测肿瘤组织中IL-6R/STAT3通路相关蛋白的表达水平。结果从模型组到吴茱萸碱组、顺铂组、顺铂+吴茱萸碱组,小鼠肿瘤的质量依次减轻、肿瘤体积依次减小,IL-6、IL-1β、TNF-α水平依次降低(P<0.05)。模型组小鼠肿瘤组织中可见大片灶性坏死,细胞核增大、深染,大小不一,排列紊乱,有异形表现,呈典型恶性肿瘤细胞形态特征,肿瘤细胞密集;吴茱萸碱组、顺铂组和顺铂+吴茱萸碱组的肿瘤细胞核固缩、变小,肿瘤细胞形态破坏,密度依次降低,肿瘤组织内坏死区依次增大,MVD依次减小(P<0.05),VEGF阳性表达依次减弱(P<0.05)。从模型组到吴茱萸碱组、顺铂组、顺铂+吴茱萸碱组,小鼠肿瘤组织中IL-6R、p-STAT3、G 1/S-特异性周期蛋白-D1(G 1/S specific cyclin D1,Cyclin D1)、生存素(survivin)的蛋白水平依次下降(P<0.05)。结论吴茱萸碱可能通过抑制IL-6R/STAT3通路,发挥抗血管生成效应,从而抑制肿瘤的生长。

通心络对2型糖尿病合并冠心病患者血清抵抗素的影响

目的研究通心络对2型糖尿病合并冠心病(DM-CHD)患者抵抗素的影响。方法将120例DM-CHD患者随机分为常规治疗组(对照组)和常规治疗加通心络组(通心络组),每组60例,另设60例健康人作为正常组。DM-CHD患者在治疗2个月后,收集空腹后的血清,测定人抵抗素(RSTN)、人超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、人白介素-6(IL-6)、内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果对照组和通心络组RSTN、hs-CRP、IL-6、HOMA-IR、ET-1显著高于正常组(P<0.05),NO低于正常组(P<0.05)。与同组治疗前比较,通心络组治疗后RSTN、hs-CRP、IL-6、HOMA-IR、ET-1显著下降(P<0.04),NO上升(P<0.05)。结论通心络能够抑制DM-CHD患者抵抗素升高,进而抑制炎性因子hs-CRP、IL-6表达,从而改善DM-CHD患者胰岛素抵抗和血管内皮功能。

卡巴胆碱对重症患者的治疗价值

目的:探讨卡巴胆碱在重症患者治疗中的临床价值。方法:选取2008年1月-2010年12月唐山市3家三级医院ICU重症患者300例。随机分为卡巴胆碱组(182例)和正常治疗组(118例)。正常治疗组包括液体复苏、氧疗、禁食、止痛、胃肠减压、器官功能维护等;卡巴胆碱组在常规治疗的基础上给予卡巴胆碱肌肉注射,每次0.2mg·kg-1,每日2次。于治疗前(0h),治疗后24,48,72,96h或患者死亡前观察2组患者胃肠功能评分和血清CRP及IL-6的变化。结果:卡巴胆碱可以减低胃肠功能评分、改善肠道功能;抑制炎症因子释放,降低炎症反应。结论:卡巴胆碱在重症患者治疗中具有一定的临床价值。