人白介素15及突变体的分子设计

以人白介素2晶体结构为模板同源模建人白介素15及其两株突变体 (N端缺失4个氨基酸、C端缺失3个氨基酸 )的空间构象。在CVFF力场下 ,经过分子力学优化、常温分子动力学模拟获得稳定立体结构模型。借助空间构象残基的亲疏水性分析 ,利用Delphi程序定性分析蛋白表面静电分布 ,进而从理论上预测人白介素15及两株突变体生物学功能的相似性、差异性。结合分子生物学实验 ,在 pBV220载体中克隆表达获得人白介素15及两株突变体 ,通过刺激CTLL -2细胞增殖、诱导外周血白细胞LAK活性实验探讨三株蛋白的生物学功能 ,与理论预测结果一致。

新型重组毒素hIL15M/TNFαM的构建、表达与活性测定

目的 构建、表达hIL15M TNFαM融合毒素 ,为研制可消除hIL15受体高表达细胞的特异性导向药物奠定基础。方法 人白介素 15突变体 (hIL15M)对靶细胞不具有激动作用 ,将该突变体与TNFα突变体 (TNFαM)编码基因直接融合克隆至pET表达载体 ,并纯化出融合蛋白hIL15M TNFαM ,MTT法测定该蛋白的细胞毒活性。结果 SDS PAGE分析表明 ,重组菌株诱导后可以表达出 3 0× 10 3与预期大小一致的特异蛋白带。纯化的hIL15M TNFαM对PHA激活的T细胞的杀伤作用是静止性T细胞的 13倍。结论 hIL15M TNFαM融合蛋白对高表达hIL15受体的细胞具有较强的杀伤性作用 ,提示其对由活化的异常T细胞增多所致的疾病具有潜在的治疗作用。

新型融合蛋白hIL15M-TNFαM表达质粒的构建

目的 构建hIL15M -TNFαM融合毒素的表达质粒 ,为该融合毒素的功能研究及临床应用前景的分析评价奠定基础。方法 通过PCR删除hIL15 5′端前 8个氨基酸残基的编码序列获得人白介素 15突变体 (hIL15M ) ,将hIL15M基因片段与人工改造的TNFα基因按正确的阅读框架融合 ,定向克隆于表达载体pET16b。结果 经酶切分析 ,所构建的质粒均插入hIL15M -TNFαM融合基因。结论 利用 pET16b表达载体成功构建融合毒素hIL15M