人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性鉴定

采用课题组已构建的携带人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白(rhIL-2-HSA)基因的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115进行rhIL-2-HSA的分离纯化研究。发酵上清液经超滤浓缩、Blue Sepharose亲和层析、Octyl Sepharose疏水层析和DEAE Sepharose离子交换层析纯化获得较高纯度的目的产物,SDS-PAGE检测为单一条带。Western Blot分析结果显示,目的产物同时具有HSA和IL-2的抗原性,为HSA和IL-2的融合分子。经CTLL-2/MTT细胞增殖法测定,纯化的融合蛋白的生物学活性为1.147×107 IU/mg。

重组人白介素2对小鼠弓形虫垂直传播的影响

目的 研究rhuIL - 2对弓形虫垂直传播的影响。方法 用不同剂量rhuIL - 2处理感染弓形虫孕鼠 ,于妊娠第12天取孕鼠子宫 ,观察记录平均活胎率的变化 ,并将胚胎及胎盘固定 ,做免疫组化染色 ,观察胎盘胎鼠感染情况 ,计算孕鼠的垂直传播率。结果 高剂量组与感染组相比活胎率明显升高 (P <0 0 5 ) ;两处理组的垂直传播率均较感染组明显下降 (P<0 0 5 ) ;免疫组化结果显示 ,胎盘滋养层细胞、绒毛间隙、蜕膜细胞均有大量弓形虫抗原表达 ;部分孕鼠的胎盘有弓形虫抗原表达 ,但其胚胎组织弓形虫抗原的表达却呈阴性。结论 rhuIL - 2一定程度上可以降低弓形虫的垂直传播率 ,对感染孕鼠及胚胎起到一定保护作用。胎盘作为局部免疫屏障具有重要的研究价值。

Ser^(125)突变型重组人白介素2的纯化研究

对E．Coli表达的Ser125突变型白细胞介素2的纯化方式进行了研究。依次经包含体提取、SephacrylS200凝胶柱层析、复性、RP－HPLC、SephacrylS100凝胶柱层析，实验最终获得电泳纯度为一条带的、比活约为2.0×107IU／mg的rIL－2。结果表明采用建立的提地方法可稳定地获得较高纯度及比活性的突变型rIL－2。

胸腔注入重组人白介素2治疗恶性胸腔积液38例诊治体会

目的观察胸腔注入重组人白介素2治疗恶性胸腔积液的临床疗效。方法对已确诊为恶性胸腔积液的38例患者,采用胸腔注入重组人白介素2治疗。结果经胸腔注入重组人白介素2治疗后,有效的控制胸水,改善临床症状,提高患者生活质量。结论胸腔注入重组人白介素2治疗恶性胸腔积液的临床疗效显著,延缓疾病发展,改善预后。

胸腺肽联合重组人白介素2治疗复发性生殖器疱疹的临床疗效

目的:探讨胸腺肽联合重组人白介素2治疗复发性生殖器疱疹(RGH)的临床疗效。方法:选择收治的RGH患者104例,将其平均分为研究组与对照组。对照组应用阿昔洛韦片治疗,研究组在此基础上应用胸腺肽胶囊加重组人白介素2治疗。结果:1研究组治疗2 d时,药物起效率为71.15%,4 d时间药物起效率高达100%,明显优于对照组的28.85%、76.92%,差异有统计学意义(P<0.05)。2研究组治疗3 d时,皮疹消退率为44.23%,5 d时为94.23%,明显优于对照组的23.08%、76.93%,差异有统计学意义(P<0.05)。3研究组12例复发,复发率为23.08%;对照组35例复发,复发率为67.31%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胸腺肽联合重组人白介素2治疗RGH疗效显著,起效快速,可以有效消除皮疹症状,降低疾病复发率。

注射用重组人白介素-2联合化学治疗对三阴性乳腺癌临床疗效及安全性研究

目的观察注射用重组人白介素-2(rh IL-2)联合化学治疗对三阴性乳腺癌的临床效果及用药安全性。方法选取2021年1月至2022年5月期间商丘市第一人民医院收治的123例三阴性乳腺癌患者为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组(61例)和干预组(62例),两组患者统一接受化学治疗,干预组在对照组治疗基础上联合应用rh IL-2治疗。对所有患者开展为期8个月随访,比较两组患者的近期疗效和远期生存质量。结果治疗后,干预组的T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于对照组(P<0.05);干预组的疾病客观缓解率(ORR)高于对照组、疾病控制率(DCR)高于对照组(P<0.05);随访期间,干预组的无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)高于对照组(P<0.05);干预组的恶性积液发生率低于对照组(P<0.05)。结论采用rh IL-2配合化学治疗可有效改善三阴性乳腺癌患者的免疫功能,对增加患者临床获益、延长生存周期并降低恶性积液发生风险均有积极意义。

小剂量重组人白细胞介素-2维持治疗对肿瘤患儿免疫细胞亚群的影响

目的:探讨小剂量重组人白介素-2(r IL-2)维持治疗对恶性实体肿瘤患儿免疫细胞亚群的影响及相关副反应。方法:选取2012年12月-2017年11月在本科治疗的22例肿瘤患儿,男女各11例,开始IL-2治疗的中位年龄9(3-16)岁,给予小剂量r IL-2免疫治疗前均完成全部手术及放化疗,其中完全缓解17例,部分缓解5例。化疗结束1个月后开始使用rIL-2小剂量维持治疗:4×10^(5)IU/(m^(2)·d),隔日皮下注射,每周3次,共1年。每3个月行免疫细胞亚群检测至治疗终止,同时随访患儿病情转归及治疗相关副反应。结果:22例患儿经r IL-2治疗后外周血T淋巴细胞(CD3^(+))、自然杀伤细胞(CD3-CD56^(+))、辅助性T细胞(CD3^(+)CD4^(+))、杀伤性T细胞(CD3^(+)CD8^(+))的绝对值及辅助T细胞/抑制T细胞比例均显著升高(均P<0.05),而调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(-))治疗前后的绝对值及比例无显著性差异(P>0.05)。在治疗前获得完全缓解的17例患儿中,14例在治疗后继续保持完全缓解,3例复发,其中2例放弃治疗后死亡;治疗前获得部分缓解的5例患儿经治疗后行PET/CT扫描后评估为完全缓解。在小剂量r IL-2免疫治疗初期,出现注射部位皮疹1例,注射后低至中度一过性发热2例,均给予对症处理后消失,未见治疗相关器官功能损害。结论:小剂量r IL-2维持治疗耐受性良好,可显著改善肿瘤患儿外周血部分抗肿瘤免疫细胞亚群的分布,且不会导致调节性T细胞绝对值及比例的升高。

重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达

构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白(HSA)的编码基因连接为融合蛋白HSA-IL2m的编码基因。克隆到表达质粒pPIC9K中,电击转化P.pastorisGS115感受态细胞,获得重组P.pastorisGS115/pPHIm基因工程菌。摇瓶发酵获得分泌表达产物。结果:Western blot鉴定结果显示该融合蛋白与IL-2、HSA的抗体都能发生免疫反应。经脱盐、冻干制备的粗蛋白的IL-2生物学活性为1.51×106IU/mg。结论:在P.pastorisGS115中成功表达了具有人白介素-2生物学活性的HSA-IL2m融合蛋白。

人白介素-2／人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH。用EcoRI和NotI双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U/mL的生物学活性。结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道。

重组人白介素2注射液对烟熏所致慢性支气管炎的预防作用

为研究重组人白介素-2注射液对大鼠实验性慢性支气管炎的预防作用,使用烟熏法建立大鼠慢性支气管炎模型,选取3种阳性药物做对照。重组人白介素-2注射液预防给药对慢性支气管炎的发生、发展有一定的预防作用。

光动力联合重组人白介素-2治疗尖锐湿疣疗效观察

目的评价传统物理治疗和光动力联合注射重组人白介素-2治疗尖锐湿疣的治愈率和复发控制率。方法将84例患者随机分为2组,传统物理组患者仅做物理治疗,光动力加重组人白介素-2组在光动力治疗的同时联合应用肌肉注射重组人白介素-2治疗。结果传统物理组治愈率59.5%,复发控制率28.5%;光动力联合注射重组人白介素-2治疗组治愈率为88.0%,复发控制率47.6%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论光动力联合注射重组人白介素-2治疗尖锐湿疣效果显著,治愈率高于传统物理治疗组,复发控制率高于传统物理治疗组。光动力联合注射重组人白介素-2是治疗尖锐湿疣的较好方法之一。

鸦胆子油乳注射液联合重组人白介素-2治疗恶性胸腔积液的临床分析

目的:研究鸦胆子油乳注射液联合重组人白介素-2(IL-2)治疗恶性胸腔积液的临床疗效,以期为临床提供一定的参考。方法:选取2013年1月-2015年6月间入院诊治的肺癌恶性胸腔积液患者168例,随机分成治疗组(42例)和对照1组(42例)、对照2组(42例)、对照3组(42例)。对照1组胸腔内灌注重组人白介素-2联合顺铂治疗,对照组2组单纯应用顺铂治疗,对照3组胸腔内灌注重组人白介素-2联合顺铂与鸦胆子油乳治疗,治疗组胸腔内灌注重组人白介素-2联合静脉滴注鸦胆子油乳。观察四组患者的治疗效果、不良反应、生活质量等指标。结果:治疗组CR 8例,PR 26例,总有效率为80.95%;对照1组CR 8例,PR27例,总有效率为83.33%;对照2组CR 5例,PR 20例,总有效率为59.52%;对照3组CR 7例,PR 27例,总有效率为80.95%,对照2组与治疗组、对照1组及对照3组差异显著(P<0.05)。治疗组不良反应发生率为28.57%,对照1组为42.86%,对照2组为47.62%,对照3组为33.33%,治疗组与对照3组的不良反应发生率显著较低(P<0.05)。经治疗后,治疗组与对照3组在总体健康、疼痛与不适等生活质量的比较中显著优于对照1组与对照2组(P<0.05)。结论:鸦胆子油乳注射液联合重组人白介素-2治疗恶性胸腔积液可显著提高治疗效果,降低不良反应,同时提高患者的生活质量。

阿维A联合重组人白介素-2对尖锐湿疣患者T淋巴细胞亚群及复发的影响

目的观察阿维A联合重组人白介素-2对尖锐湿疣(CA)患者外周血T淋巴细胞亚群的影响及预防复发的效果。方法入选患者随机分为两组,A组30例用微波彻底清除疣体后应用重组人白介素-2注射液20万U肌注,隔日1次,连用7次;B组34例采用微波彻底清除疣体后联合阿维A及重组人白介素-2治疗。所有患者均随访6个月。治疗前及治疗后8周抽取外周血检测T淋巴细胞亚群,并与25例健康对照组进行比较。结果治疗前CA患者与健康对照组比较,CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值降低,差异有统计学意义(P<0.05),CD8+细胞百分比升高,差异亦有统计学意义(P<0.05),CD3+细胞百分比无明显变化;治疗后A,B组CD4+细胞百分比及CD4+/CD8+比值明显升高,CD8+细胞百分比降低,与治疗前相比差异均有统计学意义(P均<0.05),CD3+细胞无明显变化;治疗后A组,B组比较,A组CD4+细胞百分比、CD8+细胞百分比、CD4+/CD8+比值变化明显小于B组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后A组CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值仍低于对照健康组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后B组与健康对照组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。A组复发率33.33%,明显高于B组的11.76%(P<0.05)。结论 CA患者存在细胞免疫功能异常,阿维A与重组人白介素-2可调节CA患者外周血T淋巴细胞亚群,从而调节患者细胞免疫功能;两者联合应用治疗CA可获得较好疗效,并能降低其复发率。

鸦胆子油乳注射液联合重组人白介素-2治疗肺癌恶性胸腔积液临床观察

目的探讨鸦胆子油乳联合重组人白介素-2(IL-2)治疗恶性胸腔积液的临床疗效。方法将72例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为治疗组和对照组各36例,两组患者均未采取全身放化疗、手术治疗。均采取综合治疗措施,包括抗感染、营养支持对症等治疗,在此基础上治疗组给予胸腔内灌注重组人IL-2,同时静脉滴注鸦胆子油乳,对照组仅胸腔内灌注重组人IL-2。分析比较两组患者的治疗效果。结果治疗组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组人IL-2联合鸦胆子油乳治疗肺癌恶性胸腔积液能显著提高疗效。

射频深部热疗联合胸腔注射重组人白介素-2治疗肺癌癌性胸水34例临床观察

目的观察射频深部热疗联合胸腔注射重组人白介素-2治疗肺癌癌性胸水的疗效。方法 68例肺癌合并癌性胸水患者随机分为观察组(n=34)和对照组(n=34)。观察组患者经中心静脉导管行胸腔闭式引流术放尽胸水后,胸腔内注入重组人白介素-2后进行热疗;对照组患者经中心静脉导管行胸腔闭式引流术放尽胸水后,单纯胸腔注射重组人白介素-2治疗。观察两组的胸水消退情况、KPS评分(Karnofsky功能状态评分标准)变化及不良反应。结果对照组胸水改善总有效率为64.7%(22/34),观察组为88.2%(30/34),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后KPS评分变化,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前后均未出现血液系统反应及肝、肾功能损害,治疗期间,两组患者仅有少部分出现低热、皮下脂肪硬结不良反应,两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论射频深部热疗联合胸腔注射重组人白介素-2治疗肺癌癌性胸水疗效较好,且未出现明显不良反应。

高效液相色谱法测定重组人白介素-2吸入粉雾剂中重组人白介素-2的含量

目的:建立重组人白介素-2(rhIL-2)吸入粉雾剂的含量测定方法,测定该制剂中 rhIL-2的含量。方法:建立高效液相色谱法测定 rhIL-2吸入粉雾剂中 rhIL-2的含量,并且将由含量换算出的效价值,和 CTLL-2依赖细胞株的 MTT 比色法的测定结果进行比较。结果:该法专属性强,可用于 rhIL-2原料和吸人粉雾制剂的测定。测定的含量值换算成效价值后,与MTT 比色法相比,测定结果有较好的相关性。结论:基于方法的简便性,精密性,确定在制剂研究中,选择以 HPLC 法进行初筛,对较优处方结合 MTT 比色法进行复筛。

人白介素-2重组基因的T载体和pET28a表达载体的构建

从人单核细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人白介素-2基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定.鉴定正确后用另一组带有酶切位点的引物和pfu酶进行PCR,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR回收片段及pET28a表达载体,二者经过连接、转化、质粒酶切、测序等手段重新鉴定序列是否正确.结果表明,插入到T载体和pET28a载体中的序列为402 bp的不带信号肽的基因片段,此序列和GenBank中公布的IL-2序列相一致.故从人单核细胞中提取mRNA后,利用RT-PCR构建的人IL-2基因序列完全正确,为下一步的工作提供了基础.