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重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析 被引量:1
1
作者 井申荣 邹全明 +2 位作者 罗萍 洪愉 朱永红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期288-290,共3页
目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELIS... 目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 大肠杆菌 表达 生物学活性 可溶性蛋白 包涵体
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人白细胞介素-10 cDNA的克隆、测序和真核表达载体的构建(英文) 被引量:1
2
作者 代文杰 姜洪池 +1 位作者 潘尚哈 吕晓颖 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2001年第1期4-6,共3页
目的 克隆、测序人白细胞介素 10cDNA开放阅读框架 ,构建其真核表达载体。方法 刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养后用于提取总RNA ,以随机引物行逆转录反应合成hIL 10cDNA第一链 ,并以hIL 10特异性引物行PCR扩增 ,将PCR产物克隆... 目的 克隆、测序人白细胞介素 10cDNA开放阅读框架 ,构建其真核表达载体。方法 刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养后用于提取总RNA ,以随机引物行逆转录反应合成hIL 10cDNA第一链 ,并以hIL 10特异性引物行PCR扩增 ,将PCR产物克隆至pUC18中测序并构建真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。结果 PCR扩出5 5 0bp特异性片段 ,经克隆至pUC18后测序表明序列同源性与GenBank报道完全一致 ,并克隆鉴定了真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。结论 成功克隆了人白细胞介素 10cDNA开放阅读框架 ,序列分析证实与GenBank录入序列同源性达 10 0 % ,并成功构建了真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。 展开更多
关键词 克隆 序列分析 人白细胞介素-10 真核表达载体 CDNA
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人白细胞介素-10质粒转染抑制RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞
3
作者 郭建斌 马守治 +2 位作者 赵欣 陈江 闫福华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第7期640-643,647,共5页
目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin-10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响。方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液;通过TRAP染色及骨吸收实验观... 目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin-10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响。方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液;通过TRAP染色及骨吸收实验观察转染产物对RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞的影响。结果:hIL-10质粒脂质体法瞬时转染293T及RAW264.7细胞获得成功,部分细胞发出绿色荧光,ELISA检测表明目的基因获得表达,RAW264.7细胞在RANKL诱导下可形成破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含hIL-10蛋白的培养液上清,TRAP染色阳性细胞及骨吸收陷窝面积显著减少(P<0.05)。结论:本实验所采用的hIL-10质粒可以成功转染293T及RAW264.7细胞,产生的hIL-10蛋白在体外具有抑制破骨细胞形成和骨吸收的生物学功能。 展开更多
关键词 人白细胞介素-10 转染 破骨细胞 脂质体
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重组人白细胞介素-10诱导瘤细胞凋亡
4
作者 杨红 罗少洪 +1 位作者 罗烈伟 彭立胜 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期259-261,共3页
目的研究重组人白细胞介素-10诱导瘤细胞凋亡的作用。方法利用基因工程技术制备的rhIL-10,分别作用于体外培养的ScaBer、NCIS446、U937瘤细胞,观察瘤细胞的形态改变,MTT法检测rhIL-10对瘤细胞增殖的抑制作用,电泳观察rhIL-10诱导瘤细胞... 目的研究重组人白细胞介素-10诱导瘤细胞凋亡的作用。方法利用基因工程技术制备的rhIL-10,分别作用于体外培养的ScaBer、NCIS446、U937瘤细胞,观察瘤细胞的形态改变,MTT法检测rhIL-10对瘤细胞增殖的抑制作用,电泳观察rhIL-10诱导瘤细胞凋亡的情况,TUNEL法检测瘤细胞凋亡百分率。结果电泳出现典型的DNA“lader”,ScaBer、NCIS446、U937三种瘤细胞的凋亡率为48.5%、45.6%、47.1%,IC50分别为0.043、0.052、0.058mg/mL。结论rhIL-10具有显著抑制瘤细胞生长活性、诱导瘤细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 细胞凋亡 IC50
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人白细胞介素-10cDNA的克隆
5
作者 刘俊杰 陈家存 +2 位作者 胡书群 陆梁 裴冬生 《徐州医学院学报》 CAS 2002年第5期380-382,共3页
目的 克隆人白细胞介素 10 (hIL - 10 )cDNA的全长序列 ,为其分子生物学利用奠定基础。方法 无菌条件抽取正常成人外周血 15ml,分离单核细胞 ,用刀豆素A(ConA)刺激培养 2 4h ;离心得到一定量细胞 ,加入变性液 ,一步法提取细胞总RNA ;... 目的 克隆人白细胞介素 10 (hIL - 10 )cDNA的全长序列 ,为其分子生物学利用奠定基础。方法 无菌条件抽取正常成人外周血 15ml,分离单核细胞 ,用刀豆素A(ConA)刺激培养 2 4h ;离心得到一定量细胞 ,加入变性液 ,一步法提取细胞总RNA ;反转录合成IL - 10的第 1条链 ,用自己设计的特异性上下游引物进行PCR扩增 ,得到期望分子量的PCR产物 ;酶切后插入PcDNA3载体 ,转染感受态细胞进行筛选制备 ,并行酶切鉴定和测序。结果 外周血单核细胞经ConA刺激后IL - 10转录水平增加 ,从提取的RNA反转录产物中容易扩增出期望分子量的PCR产物 ,酶切鉴定证明得到的IL - 10cDNA分子量与基因库报告的相近 ,测序结果表明得到的IL - 10cDNA序列与基因库报告的序列完全一致。结论 人的IL - 10cDNA全长序列被成功克隆。 展开更多
关键词 人白细胞介素-10 CDNA 克隆
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尾静脉液压法导入人白细胞介素-10质粒在大鼠牙周膜的表达
6
作者 郭建斌 闫福华 +1 位作者 马守治 陈江 《转化医学研究(电子版)》 2013年第1期1-12,共12页
目的探讨尾静脉液压法导入质粒后外源基因在大鼠牙周膜的表达情况。方法选用24只SD大鼠,随机分为h1L-10组与Veetor组,尾静脉液压法导入质粒后,肝脏冰冻切片及血清检查外源基因的表达。取上颌第二磨页牙周膜,观察免疫组织化学法h1L-1... 目的探讨尾静脉液压法导入质粒后外源基因在大鼠牙周膜的表达情况。方法选用24只SD大鼠,随机分为h1L-10组与Veetor组,尾静脉液压法导入质粒后,肝脏冰冻切片及血清检查外源基因的表达。取上颌第二磨页牙周膜,观察免疫组织化学法h1L-10的表达情况。结果荧光镜下可见她肝脏冰冻切片显示人丛绿色荧光蛋白的表达;采用尾静脉液压法导入h1L-10质粒24h后肝脏组织巾有较离的h1L-10蛋h表达。导人h1L-10质粒4h后即检测到h1L-10表达,8h时可达高峰。牙周膜区域未显示明显的h1L-10蛋白表达。未能检测到空载体组大鼠h1L-10蛋白的表达,结论尾静脉液压法导入h1L-10质粒后能使外源基因在大鼠体内获得相对稳定的表达,但在大鼠牙刷膜区域未能观察到h1L-10蛋白的表达。 展开更多
关键词 人白细胞介素-10 尾静脉液压法 牙周膜 质粒
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重组人白细胞介素-10对银屑病患者外周血单个核细胞的作用
7
作者 陈英 智强 朱年春 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2000年第4期353-355,共3页
关键词 重组人白细胞介素-10 银屑病 外周血单个核细胞
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重组人白细胞介素-10的表达与纯化
8
作者 方爱平 任莉莉 +2 位作者 齐晖 文锦丽 王英兰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期385-388,共4页
目的表达并纯化重组人白细胞介素-10蛋白,并进行活性检测。方法将重组质粒PCRT7/NT-TOPO-IL-10转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞,IPTG诱导表达。采用Ni柱对表达产物进行亲和纯化,并检测其对外周血单核细胞分泌TNF-α的影响。结果IPT... 目的表达并纯化重组人白细胞介素-10蛋白,并进行活性检测。方法将重组质粒PCRT7/NT-TOPO-IL-10转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞,IPTG诱导表达。采用Ni柱对表达产物进行亲和纯化,并检测其对外周血单核细胞分泌TNF-α的影响。结果IPTG诱导4h,目的蛋白表达量最高,可达45.02%,主要以包涵体形式表达。纯化后,所得目的产物的回收率为66.72%,纯度约为80.42%。纯化的IL-10对外周血单核细胞分泌TNF-α具有抑制作用。结论已成功表达并纯化了重组IL-10蛋白。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 表达 纯化 活性
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重组人白细胞介素-10对缺氧条件下人肺微血管内皮细胞凋亡的影响 被引量:4
9
作者 莫镜 崔其亮 +2 位作者 姚君 张费通 谭小华 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期1107-1110,共4页
目的研究低氧条件下,重组人IL-10(rhIL-10)对人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响。方法常规培养HPMVEC细胞株,分为5组:正常对照组(常规培养);缺氧对照组(50 mL·L-1CO2,950mL·L-1... 目的研究低氧条件下,重组人IL-10(rhIL-10)对人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响。方法常规培养HPMVEC细胞株,分为5组:正常对照组(常规培养);缺氧对照组(50 mL·L-1CO2,950mL·L-1N2);缺氧培养并加入rhIL-10,并按rhIL-10剂量(10×103ng.L-1、50×103ng.L-1、100×103ng.L-1)分为rhIL-10低剂量干预组、rhIL-10中剂量干预组、rhIL-10高剂量干预组。培养4 h、12 h、24 h、48 h离心收集细胞,化学比色法检测细胞核内Caspase-3活性,24 h核荧光染色并在荧光显微镜下观察荧光强度,并进行统计学分析。结果 4 h,凋亡蛋白Caspase-3相对活性各组间无明显差异(P>0.05);12 h,缺氧对照组,rhIL-10低、中剂量干预组与正常对照组比较显著升高(Pa<0.05),rhIL-10高剂量干预组与正常对照组比较无明显差异(P>0.05),rhIL-10各剂量干预组与缺氧对照组比较显著降低(Pa<0.05);24 h,缺氧对照组、rhIL-10各剂量干预组与正常对照组比较显著升高(Pa<0.05),rhIL-10各剂量干预组与缺氧对照组比较明显降低(Pa<0.05);48 h,缺氧对照组和rhIL-10低剂量干预组与正常对照组比较显著升高(Pa<0.05),低、中、高剂量rhIL-10干预组与缺氧对照组比较明显降低(Pa>0.05);缺氧凋亡峰值见于24 h。24 h,各组行凋亡细胞核Hoechst荧光染色,缺氧对照组和rhIL-10低、中、高剂量干预组灰度值与正常对照组比较均显著升高(Pa<0.05);rhIL-10低、中、高剂量rhIL-10干预组与缺氧对照组比较显著降低(Pa<0.05)。结论缺氧可促进HPMVEC凋亡,rhIL-10可一定程度地抑制HPMVEC凋亡,这些变化可能与急性缺氧性各器官疾病密切相关。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 缺氧 凋亡 人肺微血管内皮细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3
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rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响 被引量:1
10
作者 欧阳平 孟素荣 +4 位作者 刘彦波 许顶立 赖文岩 彭立胜 徐安龙 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期50-52,共3页
目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测... 目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G0/G1期。结论rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。 展开更多
关键词 RHIL-10 肿瘤坏死因子-Α 血管外膜 成纤维细胞 重组人白细胞介素-10 细胞增殖
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rhIL-10对银屑病动物模型的治疗作用及免疫功能的影响 被引量:7
11
作者 陈飞虎 陈敏珠 +1 位作者 李俊 智强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期333-336,共4页
目的 研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法 用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋... 目的 研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法 用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋巴细胞增殖、NK细胞活性及细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1、TNF α)水平。结果 rhIL 10 (5 ,2 0 ,80μg·kg-1·d-1,sc)对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用 ,促进小鼠尾鳞片颗粒层的形成。对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及IL 2、IFN γ产生有抑制作用 ;对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生IL 1、TNF α具有抑制作用 ;对NK细胞活性有抑制作用 ;对LPS诱导B淋巴细胞增殖有促进作用。结论 rhIL 10可能是通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化 。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 银屑病 动物模型 免疫 细胞因子
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重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测 被引量:1
12
作者 陈富超 孙万邦 +4 位作者 刘凯山 张磊 温琼娜 冯继红 罗军敏 《中国现代医药杂志》 2011年第9期1-3,共3页
目的检测重组人白细胞介素-10(recombinant human interleukiu-10,rhIL-10)作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分... 目的检测重组人白细胞介素-10(recombinant human interleukiu-10,rhIL-10)作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分为6组:①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素(CsA)低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10+CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组。移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射。术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平。结果①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组(P<0.05)。CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组(P<0.05)。②移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高(P>0.05),与抗体阳性对照比较有显著差异(P<0.05)。结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-10 皮肤移植 抗体
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hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
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作者 王旻东 孙自勇 +3 位作者 陈俊勇 吴盛 智强 刘建宁 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期62-65,共4页
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用I... 构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10. 展开更多
关键词 人白细胞介素-10(hIL-10) 克隆 表达 大肠杆菌 生物学活性 夹心ELISA
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Association of Interleukin-10 Gene Haplotype with Gastric Cancer in a Chinese Population
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作者 Jing-yuan CUI Hong MA +1 位作者 He WANG Feng-bo SUN 《Clinical oncology and cancer researeh》 CAS CSCD 2010年第4期234-239,共6页
OBJECTIVE Interleukin-10 (IL-10) is a multifunctional cytokine with both immunosuppressive and antiangiogenic functions.Previous studies have reported that IL-10 levels are signifi cantly elevated in patients with g... OBJECTIVE Interleukin-10 (IL-10) is a multifunctional cytokine with both immunosuppressive and antiangiogenic functions.Previous studies have reported that IL-10 levels are signifi cantly elevated in patients with gastric cancer (GC). It has also been confirmed that interindividual variations in IL-10 production are genetically attributed to the polymorphisms of IL-10 gene.Therefore, this study was designed to investigate whether the polymorphisms of IL-10 gene were associated with susceptibility to GC in the Chinese population.METHODS The serum levels of IL-10 were measured by radioimmunoassay. The single nucleotide polymorphisms (SNPs) at positions -1082A/G, -819T/C and -592A/C in the IL-10 gene promoter were analyzed using polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).RESULTS 220 patients with gastric cancer and 180 healthy controls were included in this study. The serum levels of IL-10 were signifi cantly higher in GC patients than healthy controls (Z = -19.13, P 〈 0.001). Single SNP analysis showed that the -1082G allele, -1082AG and -819CC genotypes significantly increased in patients with GC (P = 0.029, 0.021, 0.039 respectively). In a logistic regression analysis adjusted for age and sex, the -1082AG genotype was associated with an odds ratio of 1.974 (95% CI,1.14-3.391; P = 0.014), and the -819CC genotype with an odds ratio of 2.496 (95% CI, 1.222-5.102; P = 0.012) for GC. Furthermore,haplotype analysis revealed that at least five haplotypes (ATA,ACC, GCC, ACA and ATC) were existent in this population.Also that the GCC haplotype was associated with a signifi cantly increased risk of GC as compared with the ATA haplotype (OR =1.90; 95% CI, 1.11-3.27; P = 0.02).CONCLUSION The results indicate that the gene haplotype of IL-10 may contribute to the susceptibility to GC in the Chinese population. 展开更多
关键词 INTERLEUKIN-10 POLYMORPHISM single nucleotide haplotypes stomach neoplasms
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大肠埃希菌—双歧杆菌穿梭表达载体的构建及白介素-10基因的表达
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作者 张智翔 施炳龙 +3 位作者 陈文科 王俊萍 陆文玲 邹兵 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期594-597,共4页
目的构建能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因的载体,并用此载体在大肠埃希菌和双歧杆菌中表达人白介素-10基因(hIL-10)的蛋白产物;为hIL-10基因重组双歧杆菌治疗炎症性肠病做前期准备。方法以质粒pDG7为模板扩增pMB1片段,构... 目的构建能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因的载体,并用此载体在大肠埃希菌和双歧杆菌中表达人白介素-10基因(hIL-10)的蛋白产物;为hIL-10基因重组双歧杆菌治疗炎症性肠病做前期准备。方法以质粒pDG7为模板扩增pMB1片段,构建表达质粒pET28B1。用PCR法扩增hIL-10基因,将此目的基因以及pET28B1经酶切后用连接酶连接,形成重组质粒pET28B1-hIL10。pET28B1-IL10转染大肠埃希菌BL21和长双歧杆菌。最后用Western blot检测hIL-10基因在大肠埃希菌和长双歧杆菌中的表达情况。结果pET28B1-hIL10阳性克隆扩增后提取质粒并进行基因测序,结果显示插入片段为hIL-10,序列正确且无突变。hIL-10基因在大肠埃希菌、长双歧杆菌中的诱导表达产物通过Western blot检测验证为IL-10蛋白,显示该hIL-10表达载体在大肠埃希菌阳性克隆中经诱导可高量表达,在长双歧杆菌体中有少量表达。结论成功构建质粒pET28B1,该质粒能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因hIL-10。 展开更多
关键词 人白细胞介素-10 克隆 载体 双歧杆菌
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生物制剂与银屑病治疗
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作者 林大东 唐耀琼 《世界临床药物》 CAS 2003年第8期462-466,共5页
银屑病是一种T淋巴细胞介导的慢性炎症性疾病,致病的记忆-效应T淋巴细胞集聚于病变皮肤并产生Ⅰ型细胞因子是发病机制的中心环节。基于银屑病发病机制中细胞免疫的关键步骤,研究开发了一些具有靶位特异性的生物制剂,这类药物无特定脏器... 银屑病是一种T淋巴细胞介导的慢性炎症性疾病,致病的记忆-效应T淋巴细胞集聚于病变皮肤并产生Ⅰ型细胞因子是发病机制的中心环节。基于银屑病发病机制中细胞免疫的关键步骤,研究开发了一些具有靶位特异性的生物制剂,这类药物无特定脏器毒性,具有安全、易耐受和使用方便的特点,为银屑病的长期治疗提供了安全有效的方案。根据作用靶点,可将药物分为抑制抗原呈递和共刺激、抑制T淋巴细胞活化和白细胞结合、直接杀伤活化T淋巴细胞、抑制炎症介质的活性和调节细胞因子平衡5类。 展开更多
关键词 银屑病 生物制剂 重组人白细胞介素-10 达克珠单抗 地尼白介素-2 依那西普 奥普瑞白介素
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