微生物来源的人白细胞弹性蛋白酶抑制剂N01 WA-735E

应用白细胞弹性蛋白酶抑制剂高通量的筛选模型对3 835株放线菌进行筛选,发现了阳性菌株N01WA-735.采用有机溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和结晶等方法对该菌株的发酵产物进行了分离纯化,得到了活性单体化合物N01WA-735E,它对人白细胞弹性蛋白酶具有较强的抑制活性,其IC50为11.5μmol/L.通过对N01WA-735E的理化性质和波谱数据进行分析,确定其结构与文献报道的化合物BE-52440A相同,该化合物对白细胞弹性蛋白酶的抑制活性尚未见报道.

微生物来源的人白细胞弹性蛋白酶抑制剂F01-221A的研究

应用白细胞弹性蛋白酶抑制剂高通量的筛选模型对数千株真菌进行筛选,发现了阳性菌株F01-221。对该菌株的发酵产物进行有机溶剂提取、硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱和ODSHPLC制备等分离纯化,得到单体活性化合物F01-221A,它对人白细胞弹性蛋白酶有较强的抑制活性,其IC50为22.1μmol/L。通过对F01-221A的紫外、质谱、核磁等理化数据分析,确定其与化合物equisetin同质。

人白细胞弹性蛋白酶抑制剂体外筛选模型的建立及优化

目的探讨人白细胞弹性蛋白酶(HLE)与其底物反应的最适条件,建立一种高通量的HLE抑制剂体外筛选模型。方法通过测定反应产物———对硝基苯胺(p-NA)的光密度值,研究电解质浓度、反应温度、反应体系pH值、酶和底物作用浓度、反应时间及检测波长等对酶促反应的影响程度,确定酶与底物反应的最佳条件。结果确定的最优反应条件为:HLE(0.2 U/ml)30μl,底物(50 mmol/L)100μl,含1.0 mol/L NaCl的Tris缓冲液(pH 7.5),反应温度37℃,反应时间24 h,检测波长为545 nm。结论建立了一种稳定的HLE抑制剂体外筛选模型,该模型灵敏度高、准确性和重复性强,可用作筛选HLE抑制剂的平台。

人白细胞弹性蛋白酶抑制剂PC-5的合成

参考文献方法，设计以琥珀酸甲酯甲酰氯为原料，经１０步反应合成了Ｓ（１苯基５四唑）Ｎ［（甲氧琥珀酰基）Ｌ丙氨酰Ｌ（Ｎ苄氧羰基赖氨酸）Ｌ脯氯酰甲基］Ｎ异丙基硫代氨基甲酸酯（ＰＣ５），对部分合成方法与反应条件进行了优化与改进。缩短了两步反应，ＰＣ５总收率由２２％提高到７１％。

白细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选模型的建立及抑制剂F02ZA-2554A的研究

利用人源的白细胞弹性蛋白酶建立了一种快速、微量、灵敏的高通量体外筛选方法。利用该模型从微生物菌种库菌株的次生代谢产物中筛选得到一阳性真菌F02ZA-2554。该菌株发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱层析、及HPLC ODS反相柱层析等活性跟踪下的分离纯化,得到活性化合物F02ZA-2554 A,该化合物对白细胞弹性蛋白酶有中等强度的抑制活性,其IC50为32.4μmol/L。通过对该化合物的紫外、质谱、核磁等理化分析,确定该化合物为蒽醌类化合物中的大黄素甲醚(physcion),该化合物的抗炎活性属首次报道。

膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1，3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量与补肾通络方的干预

背景:研究表明,软骨破坏是膝骨关节炎的主要病理特征,而关节软骨细胞外基质的均衡是维持关节软骨活性和功能的重要条件。目的:观察补肾通络方干预前后膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β的含量变化。设计、时间及地点:分子生物学水平的随机对照观察,于2006-03/06在新疆医科大学附属中医医院完成。对象:收集于新疆医科大学附属中医医院行关节镜诊治的膝骨关节炎患者40例(40膝),按信封随机法分为补肾通络方组和对照组,每组20例。方法:补肾通络方组在关节镜检查清理术后第2日开始服用补肾通络方,每天1剂,早晚分服,15d为1个疗程,连续观察2个疗程。补肾通络方由熟地12g,山萸肉9g,杜仲12g,怀牛膝9g,寄生9g,防风10g,秦艽9g,独活9g,细辛3g,当归12g,地龙6g,甘草6g组成,同时根据患者中医证候类型在本方基础上进行加减。对照组仅行关节镜检查清理术。主要观察指标:分别于治疗前后采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定两组患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量。结果:与治疗前相比,2个疗程后补肾通络方组患者的血清及关节液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和白细胞介素1β含量均明显下降(P<0.05);对照组仅关节液中白细胞介素1β含量下降(P<0.05)。结论:与单纯关节镜治疗相比,补肾通络方加关节镜治疗对膝骨关节炎患者软骨细胞外基质以及基质金属蛋白酶的调节作用更加广泛;补肾通络方对膝骨关节炎的防治作用可能是通过调控关节软骨细胞外基质的降解完成的。

白细胞介素-1α对猪小梁细胞基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶抑制剂表达的影响

背景房水外流通路的阻塞或小梁网细胞外基质（ECM）的异常堆积导致房水流畅系数降低是引起眼压升高的原因之一，基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的平衡对ECM的代谢至关重要，白细胞介素-1α（IL-1α）可以通过调节MMPs的表达而调节房水的外流。目的研究猪重组IL-1α对体外培养的猪眼小梁细胞MMP-2、MMP-3及TIMP-1表达的影响。方法从猪眼取出带有小梁组织的巩膜，用组织块培养法培养小梁细胞并进行传代，第3代的猪小梁细胞应用纤维连接蛋白（FN）和层黏连蛋白（LM）进行鉴定。第3代小梁细胞血清饥饿培养24h后分为2组，对照组加入无血清培养基，IL组加入10m／L IL-1α，分别培养30min。采用细胞免疫化学法分析IL组MMP-2、MMP-3及TIMP-1蛋白在培养小梁细胞中的表达；采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测小梁细胞中MMP-2mRNA、MMP-3mRNA及TIMP-1 mRNA的表达，并与对照组的检测结果进行比较。结果传3代的细胞对FN和LM呈现阳性反应。与对照组比较，IL组小梁细胞中MMP-3和TIMP-1蛋白的表达量（A值）明显升高，差异均有统计学意义（t=-7．694、t=-5．199，P〈0．05），但2组间小梁细胞中MMP-2表达的差异无统计学意义（t=-2．365，P〉0．05）。IL组小梁细胞中MMP-3mRNA和TIMP-1mRNA的表达量（A值）明显高于对照组，差异均有统计学意义（t=-3．025、t=-1．921，P〈0．05），而2组间小梁细胞中MMP-2mRNA的表达差异无统计学意义（t=-1．173，P〉0．05）。结论外源性IL-1α能增加猪眼小梁细胞中MMP-3、TIMP-1的表达，引起MMP-3／TIMP-1平衡改变，促进小梁网ECM的分解，增加房水外流，而对MMP-2的表达无影响。

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对急性肺损伤大鼠趋化因子fractalkine表达的影响

目的:探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对急性肺损伤新生大鼠肺组织中趋化因子fractalkine表达的影响。方法:利用内毒素(LPS)气管内滴入制备新生大鼠急性肺损伤的模型;设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前预先滴入400μg SLPI。分别在6,12,24 h后取肺组织匀浆,用ELISA法分别测定各组趋化因子fractalkine蛋白水平。RT-PCR测定fractalkine的mRNA水平。结果:在各时间点,SLPI治疗组肺组织中Fractalkine蛋白水平及mRNA水平均显著低于LPS组。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine蛋白为(3 124.9±155.6)pg/ml,显著低于LPS组的(4 231.4±177.9)pg/ml和NS对照组的(4 412.4±201.5)pg/ml,F=42.8,P<0.05,差异有统计学意义。24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine的mRNA相对水平为47.0±5.1,显著低于LPS组的87.3±8.2和NS对照组的81.1±9.9,F=33.2,P<0.05,差异有统计学意义。结论:SLPI能有效抑制新生大鼠急性肺损伤时肺组织中趋化因子fractalkine的表达。

COPD患者急性加重期呼吸道分泌性白细胞蛋白酶抑制剂含量调节机制研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期呼吸道内分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)含量增加,急性加重期反而下降,这种现象以蛋白酶的反向调节、TGF-β1/Smads信号通路的下调、病原体多种机制参与SLPI含量的调控等假说为主,但确切机制尚未完全阐明。

分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)在前列腺癌组织中表达下调及意义

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制剂在不同前列腺组织中表达情况。方法运用半定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测来源于正常前列腺(5例)、良性前列腺增生(BPH)及BPH细胞株(13例)、前列腺癌及前列腺癌细胞株(8例)的上皮细胞中SLPI mRNA表达水平;运用蛋白印迹方法(western blot)检测不同前列腺组织的上皮细胞中SLPI蛋白表达水平;免疫组化分析正常前列腺(20例)、良性前列腺增生(50例)、前列腺癌(103例)组织中SLPI表达水平。根据染色强度及阳性率,分为四个等级,进行分析。结果SLPI mRNA水平在肿瘤上皮中下调表达,在正常组织和良性前列腺增生组织中未发现表达差异。Western blot结果提示SLPI在前列腺肿瘤上皮中表达下调。免疫组化证实SLPI在前列腺肿瘤中表达低于良性前列腺组织,SLPI表达水平在正常前列腺组织和良性增生前列腺组织中差异无显著性。结论SLPI在前列腺肿瘤组织中表达下调,提示SLPI在前列癌的发生和进展中可能扮演一定角色。

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对内毒素致新生大鼠急性肺损伤的抗感染作用

目的探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对内毒素(LPS)致新生大鼠急性肺损伤(ALI)的抗感染作用。方法利用LPS气管内滴入制备新生大鼠ALI模型,设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前30 min预先滴入400μg SLPI。4 h后取各组大鼠肺组织匀浆,用琼脂扩散法、ELISA法分别测定中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性和TNFα-水平。结果LPS组肺组织NE活性、TNFα-及总蛋白水平均显著高于SLPI治疗组和对照组,3组比较差异有显著性(F=1475.28,35.8,21.6 P均<0.01);SLPI治疗组肺组织NE活性、TNF-α及总蛋白水平均显著低于LPS组,差异有显著性(q=66.14,7.02,5.60 P均<0.01);但高于对照组,亦有显著性差异(q=22.18,5.07,3.77 P<0.01,0.05)。结论SLPI对LPS致新生大鼠急性肺损伤有抗感染作用。

不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂与核因子-κB水平变化及临床意义

目的探讨不同程度肺炎患儿分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)与核因子-κB(NF-κB)水平变化及其临床意义。方法选择66例支气管肺炎患儿,分为普通肺炎组和重症肺炎组,分别在入院24h内(治疗前)和治疗5d后(治疗后)检测SLPI水平和NF-κB表达水平,同时选择20例健康儿童作为健康对照组。结果治疗前,重症肺炎组和普通肺炎组患儿SLPI水平明显低于健康对照组,NF-κB水平明显高于健康对照组(P<0.05)。治疗后,重症肺炎组和普通肺炎组SLPI水平较治疗前显著升高,NF-κB水平显著降低(P<0.05),但重症肺炎组的SLPI水平仍低于健康对照组,NF-κB水平仍高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),普通肺炎组的SLPI水平和NF-κB水平与健康对照组差异无统计学意义(P<0.05)。结论对肺炎患儿早期检测SLPI及NF-κB水平,有助于重症肺炎的早期诊断、治疗和预后。

白细胞介素-6对人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶抑制剂-1的影响

目的探讨炎症因子白细胞介素-6(IL-6)对人冠状动脉(冠脉)平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法(1)应用10μg/L浓度的IL-6刺激人冠脉平滑肌细胞,分别在共同培养0、2、4,8、24、36小时后收集细胞。(2)应用不同浓度的IL-6(0、5、10、50μg/L)刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6小时后收集细胞。(3)应用实时荧光定量PCR方法检测MMP-3、TIMP-1基因的表达量。结果同剂量IL-6刺激下,MMP-3的表达量在2小时时就开始发生上调,8小时达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-6刺激下,MMP-3的表达量在实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大呈上升趋势。而TIMP-1表达量在2小时时就开始发生下调,4小时达最低,而后开始上升;在不同剂量IL-6刺激下,TIMP-1的表达量在实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大呈下降趋势。结论炎症因子IL-6对人冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物MMP-3、TIMP-1表达的影响,可能是炎症在急性冠脉综合征(ACS)发生发展中起作用。

体外循环心脏手术中蛋白酶抑制剂对围术期IL-8、SIRS评分及白细胞的影响

目的探讨体外循环心脏手术中蛋白酶抑制剂对围术期白细胞介素-8(IL-8)、全身炎症反应综合征(SIRS)评分及白细胞计数和分类的影响。方法 300例择期体外循环冠脉旁路移植术或瓣膜置换术患者,随机分为2组各150例。试验组于麻醉诱导后、肝素化后以及鱼精蛋白中和后,分别给予乌司他丁各100万单位,对照组则给予等量生理盐水。2组分别于手术开始前(T1)、手术结束即刻(T2)、术后8 h(T3)、术后16 h(T4)、术后24 h(T5)、术后48 h(T6)和术后72 h(T7)使用ELISA方法检验血浆IL-8浓度、评估患者SIRS评分并检验白细胞计数和中性粒细胞百分比。结果 IL-8浓度自T2即开始显著升高。在2组中的达峰时间分别为T4和T5。至术后72 h,试验组IL-8浓度降至术前水平,对照组IL-8浓度仍显著高于术前水平。自T3至T7试验组IL-8浓度均显著低于对照组。SIRS评分自T2开始升高,至T3达到峰值后逐渐下降。至T7,SIRS评分仍显著高于术前水平。自T3至T6,试验组SIRS评分始终显著低于对照组。白细胞计数自T2即显著升高,至T3达到峰值,随后逐渐下降。中性粒细胞比例自T2即显著升高,且持续至T7未有显著下降。自T3至T6,试验组白细胞计数显著低于对照组,自T3至T7,试验组中性粒细胞百分比显著低于对照组。结论乌司他丁可显著降低体外循环心脏手术围术期IL-8浓度、SIRS评分及白细胞计数和中性粒细胞比例。

弹性蛋白酶抑制剂对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨弹性蛋白酶抑制剂对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法利用野百合碱建立大鼠肺高压模型。21d后,治疗组予ZD-0892管饲,剂量按240mg/(kg·d)分2次给予,模型组按同样剂量管饲ZD-0892的溶媒;而正常对照组管饲同样剂量的生理盐水。于实验28d,采用荧光分光光度计检测肺动脉弹性蛋白酶活性,采用免疫组化方法检测肺小动脉内韧粘素(tenascin,TN)的表达和细胞增殖的情况,并采用原位缺口末端标记法检测肺小动脉内细胞凋亡的情况。结果模型组大鼠肺动脉弹性蛋白酶的活性明显增高,肺组织内TN的表达较正常组明显增强,增生指数显著上升而凋亡指数显著下降;治疗组大鼠肺动脉弹性蛋白酶活性明显减低,肺组织内TN表达较模型组明显减弱,增生指数显著下降而凋亡指数显著上升。结论ZD-0892能抑制血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的增生,诱导VSMC的凋亡,最终使野百合碱诱导的严重肺高压完全逆转。

中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂对慢性炎症气道高分泌的干预作用

目的 了解慢性炎症气道黏液高分泌发生的分子机制。方法 利用大鼠慢支炎模型 ,对其进行中性粒细胞弹性蛋白酶 (NE)抑制剂 - Sivelestat干预后 ,采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)及原位杂交方法分别检测支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中黏蛋白 (MUC)含量以及肺组织粘蛋白基因 MUC5 AC转录水平的表达。结果 Sivelestat明显降低慢性气道炎症大鼠气道黏蛋白含量 ,并从转录水平降低 MUC的分泌。结论 NE是炎症气道黏液高分泌发生的重要始动因素 。

中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂在疾病中的作用

中性粒细胞衍生的弹性蛋白酶破坏组织、增加血管的通透性、促进中性粒细胞移行。中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂可以通过抑制中性粒细胞弹性蛋白酶活性减少组织损伤,此外,它还具有抗炎、调节免疫功能。近年来研究发现,它可以保护器官损伤,尤其是中性粒细胞介导的组织损害。现就中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂在些疾病中的作用做一综述。

人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂的研究

综述人中性粒细胞弹性蛋白酶的生理和病理作用、结构特征及其体外表达研究,探讨高通量筛选抑制剂的行之有效的方法和途径,介绍若干内源性和外源性人中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的特性和开发状况。人中性粒细胞弹性蛋白酶在各种炎症疾病中起重要作用,其内源性抑制剂的缺乏会导致体内人中性粒细胞弹性蛋白酶的平衡失调,进而产生病理反应。

基质金属蛋白酶-2及其抑制剂和白细胞介素-6在中耳胆脂瘤的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及其抑制剂(tissue inhibitor of met-alloproteinase,TIMP-2)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)在中耳胆脂瘤中的表达,探讨其表达在胆脂瘤溶骨机制中的作用。方法应用免疫组化技术检测32例患者中耳胆脂瘤组织和10例正常人外耳道皮肤组织中MMP-2、TIMP-2和IL-6的表达。结果MMP-2在胆脂瘤上皮各层细胞中均有表达,基底层表达最强,棘层次之,颗粒层及角质层细胞表达较弱;TIMP-2在基底细胞层和棘细胞层有少量表达;IL-6的表达分布于胆脂瘤上皮全层,但在基底层细胞表达最弱,棘细胞层、颗粒层和角质层依次递增,染色最强的部位是颗粒层和角质层,而正常外耳道皮肤未见MMP-2、TIMP-2、IL-6的表达。结论在胆脂瘤组织中存在MMP-2与TIMP-2的表达失衡,导致胆脂瘤的骨质破坏。同时胆脂瘤上皮高表达IL-6可能是MMPs过表达的原因。

AECOPD患者呼出气冷凝液中分泌性白细胞蛋白酶抑制剂的检测及其临床意义

目的分析慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者治疗前后呼出气冷凝液(EBC)中分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)浓度的变化,及其与AECOPD各临床指标的相关性。方法随机选择AECOPD患者30例,正常健康者18例,采用ELISA方法检测AECOPD组治疗前后及健康对照组EBC中SLPI浓度,应用Pearson直线相关分析AECOPD组治疗前EBC中SLPI浓度与COPD临床特征、肺功能(PEF、FEV1%预计值)、血气分析、血WBC计数等指标的相关性。结果经抗感染、氧疗、解痉、激素等常规治疗7天后,AECOPD组EBC中SLPI浓度明显高于治疗前(P<0.05);AECOPD组治疗前EBC中SLPI浓度与患者FEV1%预计值、痰量、呼吸困难症状密切相关(P<0.05),与患者PEF、血白细胞(WBC)计数、动脉血pH值、PaO2/FiO2、PaCO2无相关性(P均>0.05)。结论 AECOPD患者EBC中SLPI浓度可作为反映病情的严重程度和临床转归的指标。