CAHB诱导成人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡机制的研究

目的 探讨二乙酰己二胺(diacetyl hexamethylene diamine,CAHB)诱导成人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的机制,为CAHB应用于临床提供理论依据。方法 采用流式细胞仪分析CAHB处理后Jurkat细胞AnnexinⅤ^(+)/PI^(-)细胞率,观察应用胱天蛋白酶(caspase)-9抑制剂Z-LEHD-FMK处理后AnnexinⅤ^(+)/PI^(-)细胞率的变化;蛋白质印迹法观察凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达变化。结果 CAHB诱导后Jurkat细胞体积缩小、胞膜皱缩、染色质浓染、核固缩或碎裂等,可见典型凋亡小体。CAHB通过激活caspase-9、caspase-3诱导Jurkat细胞发生凋亡,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性,caspase-9抑制剂可在一定程度上抑制CAHB的凋亡诱导作用。结论 CAHB诱导Jurkat细胞凋亡与激活caspase-9及caspase-3有关。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

盐霉素增强长春新碱诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡研究

目的:本文旨在研究长春新碱(vincristine,VCR)与盐霉素(salinomycin,Sal)联合作用对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平。结果:VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著(P<0.05),具有协同作用。联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高(P<0.05)。结论:长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用。

苦参碱对白血病细胞株Jurkat侵袭转移的影响

目的研究不同浓度苦参碱对人急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat侵袭转移的抑制作用。方法Jurkat细胞体外培养,经0g/L、0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L苦参碱分别处理细胞,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞迁移实验检测细胞运动能力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)mRNA的表达,并采用直线相关分析Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达与细胞侵袭力之间的线性相关程度。计量资料的多组比较采用方差分析。结果与对照组比较,0.15g/L、0.2g/L苦参碱能有效抑制Jurkat细胞与纤维粘连蛋白(FN)的黏附能力(P<0.05),0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L苦参碱能显著降低Jurkat细胞的运动能力和侵袭能力(P<0.01)。MMP-2在Jurkat细胞中无明显表达,MMP-9在Jurkat细胞中高表达,0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L苦参碱能明显下调Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达(P<0.01),Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达与细胞侵袭力呈正相关(r=0.940,P<0.01)。结论苦参碱能全面抑制Jurkat细胞的黏附能力、运动能力和侵袭能力,其作用机制可能与下调MMP-9mRNA的表达有关,是一种较好的抗白血病细胞侵袭转移的药物。

丙戊酸钠对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖及凋亡的影响

本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对Jurkat细胞增殖的抑制作用及对凋亡的影响。选择不同浓度的VPA处理Jurkat细胞,采用CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测抑凋亡基因BCL-2及促凋亡基因Bak1的变化。结果表明,VPA对Jurkat细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,与对照组相比,随药物浓度增高,细胞凋亡率增加;VPA能够使抑凋亡基因BCL-2表达减低,但对促凋亡基因Bak1的表达无明显影响。结论:VPA可促进Jurkat细胞凋亡,可能与其抑制BCL-2表达有关。

雷帕霉素靶蛋白抑制剂PP242对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖的影响

目的 探讨雷帕霉素靶蛋白抑制剂PP242对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖的影响及可能机制.方法 用含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养液培养Jurkat细胞,调整细胞浓度为1×105/ml,接种于96孔培养板,每孔 180μ1细胞悬液.观察组加入不同浓度PP242,每孔20μ1,使其终浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L.对照组每孔加入含有0.01％二甲基亚砜的RPMI 1640培养基20μl.采用四甲基偶氮唑盐法检测经不同浓度PP242处理的Jurkat细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测不同浓度PP242作用48 h后Jurkat细胞的细胞周期改变和细胞凋亡情况.结果 培养24、48、72 h后,对照组吸光度值分别为0.569±0.023、0.901±0.022、1.199±0.041;1μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.513±0.014、0.764±0.019、0.955 ±0.016;5 μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.438±0.019、0.661 ±0.025、0.840±0.034;10 μmol/L观察组细胞吸光度值分别为0.407 ±0.011、0.613±0.026、0.791±0.012;浓度为1.0、5.0、10.0μmol/L的PP242能明显抑制Jurkat细胞的增殖.与对照组比较,1.0、5.0、10.0 μmol/L的PP242作用48 h后G0/G1期的Jurkat细胞百分比增高[（63.2±0.7）％、（65.8±0.4）％、（68.2±0.7）％比（56.9±0.6）％],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.浓度为1.0、5.0、10.0 μmol/L的PP242作用48 h后,Jurkat细胞凋亡率分别为（1.7±0.6）％、（1.8±0.7）％、（2.4±0.8）％,对照组Jurkat细胞凋亡率为（1.6±0.6）％,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PP242能明显抑制体外培养的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖,其机制可能是使Jurkat细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期.

人T细胞白血病细胞株Jurkat的TCR基因重排

背景与目的:近年的一些体外实验研究发现,重组激活基因(recombi-nationactivatinggene)编码的RAG1与RAG2(recombinationactivatinggenes,RAGs)蛋白能够介导DNA链的转位(transposition)作用,因而,可能与淋巴系统肿瘤性疾病的发生有关,但迄今尚未有明确定论。我们在实验中发现,代表T细胞发育成熟阶段的人白血病细胞株Jurkat同时表达重组激活基因RAG1和RAG2,并且经适当诱导后有RAGs表达的变化。本研究旨在确证Jurkat细胞是否发生RAGs介导的T细胞受体(T-cellreceptor,TCR)基因重排。方法:采用巢式和半巢式PCR检测T细胞受体D!-J!之间的信号结合T细胞受体删除DNA环(signaljointT-cellreceptorexcisionDNAcircles,sjTRECs);连接介导的PCR(LM-PCR)法检测TCRβ链位点重排中间物-重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)断点;RT-PCR法检测V(D)J重排第二阶段非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)途径中的核心蛋白Ku70/Ku80及末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)。结果:在Jurkat细胞DNA中检测到结合区具有多样性特征的TCRDβ2-Jβ2sjTRECs和RSS5′端和3′端断裂点,并检测到TdT、Ku70/Ku80的表达。结论:Jurkat细胞有TCR基因重排的发生。Jurkat细胞可能成为研究RAGs和TCR基因重排与T细胞淋巴瘤的一个潜在的细胞模型。

雷帕霉素协同去甲氧柔红霉素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用

目的:探讨去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞株的效应及机制。方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P70S6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达。结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50)值。Isobologram法示两药联合指数小于1。免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活。IDA联用Rapa后能使mTOR信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平。结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应。其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关。

异藤黄酚对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨异藤黄酚(ISO)对急性淋巴细胞白血病(ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法人ALL Jurkat细胞和人正常肝细胞HL-7702分别培养至对数生长期,0[二甲基亚砜(DMSO)]、10、15、20及25μmol/L ISO处理2种细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞处理后24、48及72 h的光密度(OD)并计算细胞存活率;取对数生长期Jurkat细胞,分别用0(DMSO)、10、15及20μmol/L ISO处理,采用流式细胞术检测各浓度ISO组Jurkat细胞24、48 h的凋亡率,采用Hoechst 33258染色法验证各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的凋亡率,采用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的MMP,采用RNA高通量测序(RNA-seq)分析ISO组Jurkat细胞24 h的细胞内基因转录水平,采用Western blot检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h时凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、剪切的Caspase3(Cleaved-caspase3)、剪切的Caspase9(Cleaved-caspase9)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞色素C(Cytc)、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、重组人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)、截断的Bid(t-Bid)、磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、剪切的PARP(Cleaved-PARP)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)蛋白的表达。结果MTT检测结果显示,与DMSO组相比,10、15、20及25μmol/L ISO组Jurkat细胞活力下降(P<0.05),且具有时间依赖性;流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞凋亡率升高(P<0.05),且具有时间依赖性;Western blot结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9、Cleaved-PARP、t-Bid、Apaf-1及Cytc的表达上调(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3及c-Myc的表达下调(P<0.05);RNAseq分析结果,与DMSO组相比,15μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,299个基因上调、57个基因下调,且主要影响了Jurkat细胞中MAPK及PI3K/Akt等信号途径,进一步细胞实验结果表明,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞中p-p38的表达上调(P<0.05),p-PI3K、p-Akt的表达下调(P<0.05)。结论ISO可抑制Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/c-Myc、PI3K/Akt信号通路及激活p38 MAPK信号通路有关。

HSP90抑制剂17-DMAG对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响。方法:收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果:不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性(r=0.9530,P<0.01);17-DMAG处理Jurkat细胞48 h的IC50为3.17μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖(r=0.9903,P<0.01),促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9876,P<0.01)。结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡。

以RNAi慢病毒为载体下调CD59对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响

目的:分析以RNAi慢病毒为载体下调CD59基因表达对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响。方法:通过RNAi慢病毒作为载体,诱导急性T系白血病Jurkat细胞株中的CD59表达降低;采用激光共聚焦技术分析RNAi慢病毒转染情况和CD59分子的定位情况;应用实时荧光定量PCR法检测空白对照组、阴性对照组和RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA的相对表达量;用酶联免疫吸附试验法测定3组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-β(TNF-β)和白介素-3(IL-3)的表达,用免疫印迹法(Western blot)测定3组细胞中凋亡相关分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(Survivin)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)及BCL-2相关X蛋白(BAX)蛋白表达水平。结果:Jurkat细胞转染效率高于90%,CD59主要定位于细胞膜中。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA表达明显下调(P<0.05)。RNAi慢病毒转染组中CD59蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低(P<0.05)。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中TNF-β表达水平明显升高,IL-3表达水平明显降低(P<0.05)。RNAi慢病毒转染组Survivin和BCL-2表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低,Caspase-3和BAX蛋白表达较空白对照组和阴性对照组明显升高(P<0.05)。结论:通过转染RNAi慢病毒载体促使CD59基因表达下调可降低急性T系白血病Jurkat细胞株中促增殖分化相关分子IL-3的表达,提高肿瘤坏死相关因子TNF-β的表达,同时可提高细胞中促凋亡相关蛋白Caspase-3和BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Survivin和BCL-2的表达。

PP242对急性T细胞白血病Jurkat细胞株mTOR信号通路的影响

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of ra-pamycin，mTOR）信号通路异常与多种肿瘤的形成、细胞的恶性转化相关。乳腺癌、胃肠道间质的肿瘤、肝癌、肺癌等均发现mTOR通路的异常激活，从而降低了肿瘤对化疗、放疗的敏感性…。急性淋巴细胞白血病也存在Akt／mTOR信号通路的过度激活。

γ-射线诱导人白血病T细胞株Jurkat细胞凋亡及其机制

目的 观察γ 射线诱导p5 3基因突变的白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的时间和剂量效应 ,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡通路的分子机制。方法 分别以 5、10、2 0Gyγ 射线照射Jurkat细胞 ,于照射后继续培养 6、12、2 4、3 6、48h ,分别收获细胞。流式细胞术 (FCM )定量观察细胞凋亡的变化。采用WesternBlot法检测Jurkat细胞株p5 3基因蛋白的表达。结果 细胞受照射后 ,在一定的时间范围内 ,凋亡细胞的比例随作用时间和照射剂量的增加而增加 ,显示出较好的量效和时效关系。本实验所用的Jurkat细胞株是p5 3基因突变的细胞株 ,p5 3基因蛋白不表达。 结论 确立了γ 射线诱导Jurkat细胞凋亡时间和剂量效应关系 ,而导致凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因 p5 3 ,这为探讨新的凋亡通路机制奠定了基础。

泌淋清胶囊对不同白血病细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨泌淋清胶囊(MLQ)对不同白血病细胞株增殖及凋亡的影响。方法取适量MLQ,采用醇提旋蒸冻干方法配制成100 g/L MLQ母液备用;取对数生长期人红白血病细胞株HEL分为125、250及500 mg/L MLQ组及对照组,取对数生长期人慢性髓系白血病细胞K562分为62.5、125.0、250.0及500.0 mg/L MLQ组及对照组,取对数生长期的人急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat分为62.5、125.0及250.0 mg/L MLQ组及对照组,3种细胞均培养不同时间及多个时间点、采用噻唑蓝比色法(MTT)测定各组细胞的存活率;取对数生长期Jurkat细胞,设置150、300及600 mg/L及对照组(600 mg/L浓度等量的溶剂),分别培养24和48 h,采用流式细胞仪检测Jurkat细胞24和48 h的细胞凋亡率。结果各浓度MLQ组于48 h时,细胞株HEL、K562的存活率均随MLQ浓度的增加而降低(P<0.0001),各浓度MLQ组Jurkat细胞的存活率随MLQ浓度的增加而降低、细胞活力随时间的延长而下降(P<0.005或P<0.001或P<0.0001);各浓度MLQ组Jurkat细胞的凋亡率随着MLQ浓度的增加而增高(P<0.0001)。结论MLQ可抑制不同类型白血病细胞(HEL、K562及Jurkat)增殖,促进Jurkat细胞凋亡。

哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制的初步探讨

目的哇巴因是强心甾体类药物的一种,可诱导众多肿瘤细胞凋亡。观察哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡、hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的影响,探讨哇巴因抗肿瘤的作用机制。方法采用不同浓度和时间的哇巴因处理Jurkat细胞株,以加入等体积的1×PBS组作为对照组,分组为:对照组、哇巴因50nmol/L 24h组、100nmol/L 24h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组,以流式细胞术检测凋亡率;RT-PCR法检测hTERT、c-myc mRNA水平;Western blot检测hTERT、c-myc蛋白的表达。结果药物作用于Jurkat细胞株24、48 h后,对照组、50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的细胞凋亡率分别为(4.23±1.01)%、(5.67±3.71)%、(9.63±4.83)%、(19.67±4.55)%、(37.60±11.89)%,哇巴因50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的凋亡率与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Jurkat细胞的hTERT、c-myc的mRNA水平较对照组显著下降了200%,其hTERT蛋白表达也较对照组下降了224%,c-myc蛋白表达较对照组下降400%(P﹤0.05),且hTERT与c-myc mRNA及蛋白表达的降低呈正相关(P﹤0.05)。结论哇巴因可诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡。哇巴因也可引起hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的下调,这可能是哇巴因可诱导Jurkat细胞株凋亡的机理之一。

Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用机制研究

目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中的作用及其可能机制。方法:细胞实验(人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞)分为空白对照组(Control组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和白藜芦醇处理组(Res组),动物实验分为正常对照组(Control组)、T-ALL模型组(T-ALL组)和白藜芦醇处理组(Res组)。采用CCK-8法检测白藜芦醇对Molt-4和Jurkat细胞增殖能力的影响,选取适合的给药浓度进行后续实验;尾静脉注射ICN1-GFP^(+)T-ALL细胞建立T-ALL小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠外周血中ICN1-GFP^(+)T-ALL细胞百分比,监测T-ALL小鼠造模后的一般情况;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别检测细胞和小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA的表达水平;应用蛋白免疫印迹法(Western Blot法)分别检测细胞和小鼠脾脏组织中β-catenin、TCF-1、LEF-1、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果:白藜芦醇明显抑制Molt-4和Jurkat细胞增殖能力(P<0.01),抑制作用随白藜芦醇浓度增加逐渐增强(P<0.01);经白藜芦醇处理后,Molt-4和Jurkat细胞中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),β-catenin、TCF-1、LEF-1及其靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平均显著降低(P<0.05);T-ALL小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平显著增高(P<0.01),β-catenin、TCF-1、LEF-1及靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平显著升高(P<0.01);经白藜芦醇处理后,小鼠外周血中GFP^(+)白血病细胞比例明显下降(P<0.01),c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),各蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论:在T-ALL细胞株和动物模型中,白藜芦醇可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF-1和LEF-1的表达进而抑制靶蛋白c-Myc和Cyclin D1水平,发挥抗急性T淋巴细胞白血病作用。

补骨脂素加长波紫外线对人白血病细胞株NB4、HL-60、K562作用的研究

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法对人白血病细胞株NB4、HL-60、K562的作用。方法以NB4、HL-60、K562细胞株为研究对象,以细胞抑制率、凋亡率及在电镜下细胞超微结构改变为检测指标,观察PSO加波长360nm的UVA对人白血病细胞株的影响,并分析各因素间的交互作用。结果当PSO浓度均为80μg/ml,UVA照射时间分别为10min、15min和15min时,NB4、HL-60、和K562细胞的抑制率分别达峰值;当PSO浓度分别为40μg/ml、80μg/ml和80μg/ml,UVA照射时间为10min、15min和15min时,NB4、HL-60和K562细胞的凋亡率达峰值。不同PSO浓度、不同UVA照射时间对不同白血病细胞株的抑制率、凋亡率的差异有统计学意义,且各因素之间有交互作用。电镜下观察经PSO和UVA处理后的NB4、HL-60及K562细胞超微结构,均可见明显的凋亡形态学改变。结论PSO加UVA(PUVA)可抑制白血病细胞株NB4、HL-60、K562的生长,并可诱导其凋亡。浓度为40～80μg/mlPSO与波长为360nm的UVA照射10～15min是PUVA抗NB4、HL-60、K562白血病细胞的最佳作用点。

44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱,其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱,其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

Wnt5a基因在血液病及白血病细胞株中的表达

本研究观察Wnt5a在部分血液病及白血病细胞株中的表达情况,为进一步研究Wnt5a在血液肿瘤中的作用及其机制打下基础。用人淋巴细胞分离液分离外周血和骨髓单个核细胞,以RT-PCR检测31例病例标本及3种白血病细胞株中Wnt5a的表达。结果表明:5例AML中4例均为阴性或弱阳性,仅1例完全缓解的病例表达呈强阳性。K562、HL-60细胞的Wnt5a表达也为阴性,Jurkat细胞的Wnt5a表达阳性。6例CML的Wnt5a表达均为阴性。4例ALL中3例为表达阳性或弱阳性,1例表达为阴性;2例CLL为阴性表达;2例MM中Wnt5a表达1例为弱阳性,1例为阴性;3例淋巴瘤中有1例为弱阳性,2例为阴性;2例AA、2例IDA、3例ITP、1例ET及PVWnt5a表达均为阳性或弱阳性。结论:在31例血液病标本及髓系白血病细胞株中,除ALL外,有明显的Wnt5a表达缺失或降低,而非恶性血液病例中Wnt5a表达普遍呈阳性,提示Wnt5a的表达下调可能与髓系白血病的发生有关。

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的 :研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理。方法 :采用MTT法测定IC50 值及生长曲线 ,流式细胞仪 (FCM )AnnexinⅤFITC/PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测细胞周期 ,同时用流式细胞汁FCM及Western blot检测Bcl 2蛋白表达。结果 :浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长 ,且呈剂量依赖关系 ,并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,4 8h时作用最强 ,此时Bcl 2蛋白表达下降 ,随后此作用减弱 ,低浓度作用下细胞逐渐恢复生长。结论 :浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,且呈剂量依赖关系 ,此作用与Bcl