人皮脂腺细胞体外培养及其在临床研究的应用进展

皮脂腺是皮肤的重要附属器官,其功能的异常与痤疮及其他皮脂腺相关疾病密切相关.人皮脂腺细胞体外培养模型的建立为研究皮脂腺功能及其相关疾病的研究提供了良好的平台.目前已经建立了永生化人皮脂腺细胞系:SZ95细胞、SEB-1细胞和Seb-E6E7细胞,并已成为研究皮脂腺功能和活性调节以及痤疮和其他皮脂腺相关疾病发病机制和治疗的工具.对人皮脂腺细胞体外培养实验方法的各个阶段、永生化人皮脂腺细胞系的建立及其在临床研究方面的应用进展作一综述.

苯并芘与肽聚糖体外协同刺激人皮脂腺细胞炎症因子表达及其意义

目的:检测苯并芘(Bap)和革兰氏阳性菌细菌壁肽聚糖(PGN)体外对SZ95人皮脂腺细胞炎症因子表达的影响。方法:体外培养SZ95永生化人皮脂腺细胞,分为空白对照组、Bap组、PGN组和(Bap+PGN)组,PGN浓度为20μg/m L,Bap浓度为10^(-5)mol/L。RT-PCR和ELISA检测SZ95永生化人皮脂腺细胞分泌白介素(IL-1α、IL-1β)、TNF-αmRNA和蛋白表达水平。结果:(Bap+PGN)组IL-1α,IL-1β和TNF-αmRNA及蛋白表达水平高于空白对照组、Bap组和PGN组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:苯并芘协同增强PGN诱导的皮脂腺细胞炎症因子IL-1α,IL-1β,TNF-α的表达,这可解释为什么环境污染可加重或诱导痤疮的发生。

基于TRPV1/AMPK通路探讨石榴皮总多酚对亚油酸诱导的人皮脂腺细胞脂质合成的影响

目的 探讨石榴皮总多酚(pomegranate peel polyphenols,PPPs)对亚油酸(linoleic acid,LA)诱导的永生化人皮脂腺SZ95细胞脂质合成的影响及其作用机制。方法 体外培养SZ95细胞,运用LA诱导构建脂质过度合成模型,采用CCK-8法检测不同质量浓度PPPs对SZ95细胞活力的影响;尼罗红染色检测细胞脂质合成情况;qRT-PCR检测瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)mRNA表达;Western blotting检测TRPV1、AMPK、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)蛋白表达。采用siRNA进行细胞转染,观察沉默TRPV1后PPPs对LA诱导的SZ95细胞脂质合成及TRPV1/AMPK通路的影响。结果 1.25、2.5、5μg/mL的PPPs对SZ95细胞活性无明显影响,且均可显著抑制LA诱导的脂质过度合成(P<0.01),其中5μg/mL PPPs的抑制效应最为明显。与对照组比较,模型组细胞脂质合成明显增加(P<0.01),TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);PPPs对无LA诱导的SZ95细胞基础脂质合成无明显影响,TRPV1、AMPK mRNA表达水平升高(P<0.01),但TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平差异无统计学意义。与模型组比较,PPPs明显减少LA诱导下的SZ95细胞脂质合成(P<0.01),明显提高TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。沉默TRPV1显著增加了LA诱导下的SZ95细胞脂质合成(P<0.01),并显著减弱了PPPs对SZ95细胞脂质过度合成的抑制(P<0.01),显著降低其TRPV1、AMPK的mRNA及TRPV1、pAMPK/AMPK蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论 PPPs可有效抑制LA诱导的SZ95细胞脂质合成,其作用机制可能与TRPV1/AMPK通路有关。

白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体表达的影响

目的:研究白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体信使RNA(mRNA)和胞质蛋白表达的影响,探讨中药治疗痤疮的作用机制。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测正常组,低、中、高剂量白地祛脂合剂组作用皮脂腺细胞24h后雄激素受体mRNA的表达情况;采用免疫印迹法(Western Blot)方法检测人皮脂腺细胞胞质蛋白中雄激素受体的表达情况。结果:PCR显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体(AR)mRNA表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.592、0.438、0.223倍(P<0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR mRNA表达降低最为明显;Western Blot显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体胞质蛋白表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.805、0.652、0.550倍(P<0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR蛋白降低最为明显。结论:白地祛脂合剂可能通过抑制人皮脂腺细胞AR的表达而具有拮抗雄激素受体对皮脂腺细胞的活性作用,这将为中医药治疗痤疮提供新的治疗途径,有助于从分子层次了解其作用机制。

异维A酸对肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞相关炎症基因表达的影响

目的观察异维A酸体外对肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞中与痤疮发病可能相关的炎症基因表达的影响,探讨异维A酸治疗痤疮的分子机制。方法将培养的SZ95细胞分成3组,对照组不做处理,另外两组用20mg/L肽聚糖单独(肽聚糖组)或联合10^-5mol/L异维A酸(共刺激组)共同处理。作用3h后,实时荧光定量PCR检测上述各组SZ95细胞中白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及Toll样受体2(TLR2)和其下游基因MyD88 mRNA表达水平;作用24h后酶联免疫吸附试验检测各组细胞培养上清液中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α蛋白表达水平;作用48h后Western印迹检测TLR2和MyD88蛋白表达水平。采用SPSS23软件,3组间指标的比较采用单因素方差分析,并采用Bonferroni校正进行两两比较。结果对照组、肽聚糖组和共刺激组IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-αmRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(均P<0.01);其中,肽聚糖组上述指标均高于对照组及共刺激组,差异均有统计学意义(均P<0.0167)。上述3组间MyD88mRNA表达差异也均有统计学意义(分别为6.707±0.950、10.270±0.477、7.892±0.900,F=10.17,P<0.01),肽聚糖组高于对照组及共刺激组,差异均有统计学意义(t值分别为4.740、3.298,均P<0.0167)。肽聚糖组TLR2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,但与共刺激组比较差异无统计学意义。结论异维A酸抑制肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞中与痤疮发病可能相关的炎症因子的表达,其机制可能是通过抑制天然免疫应答中MyD88的表达而非TLR2本身,这可能是异维A酸治疗痤疮的机制之一。

白藜芦醇对苯并芘诱导的人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响

目的研究白藜芦醇对苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响。方法SZ95人皮脂腺细胞分为对照组、1×10^(-5)mol/L白藜芦醇组、1×10^(-5)mol/L苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组。实时荧光定量PCR检测各组SZ95人皮脂腺细胞中白细胞介素1α(IL-1α)、IL-6、芳香烃受体(AhR)、细胞色素酶P450(CYP)1A1、CYP1B1 mRNA表达;Western印迹检测各组p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平(磷酸化p38水平/p38水平)和AhR蛋白相对水平;酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中IL-1α、IL-6蛋白表达。多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果对照组、白藜芦醇组、苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组SZ95人皮脂腺细胞IL-1α的mRNA(2.045±0.272、2.058±0.154、3.124±0.094、2.185±0.337)和蛋白(9.132±1.181、9.429±0.771、20.361±0.907、9.917±0.897)表达水平差异均有统计学意义(F值分别为14.662、101.705,P值分别<0.01、<0.001),其中白藜芦醇+苯并芘组IL-1αmRNA和蛋白相对水平低于苯并芘组(均P<0.01)。此外,苯并芘组p38磷酸化水平显著高于对照组、白藜芦醇组及白藜芦醇+苯并芘组(F=303.129,均P<0.0001)。白藜芦醇+苯并芘组AhR、CYP1A1和CYP1B1的mRNA表达较苯并芘组显著下调(t值分别为10.640、33.599、18.327,均P<0.001)。苯并芘组细胞AhR蛋白表达低于白藜芦醇+苯并芘组(P<0.001)。结论白藜芦醇可抑制环境污染物苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子IL-1α表达,该作用可能通过AhR和p38MAPK通路所介导。

控油植物活性物组合抑制皮脂分泌的功效研究

将柠檬巴毫叶、白柳树皮、薄荷、银耳、库拉索芦荟提取物进行复配,研究其对人皮脂腺细胞SZ95皮脂分泌的抑制效果,并将其与皮脂异常的常用药物异维A酸进行功效对比,研究该控油活性物组合抑制皮脂分泌的功效。对SZ95细胞模型中性脂质的变化水平及荧光观察结果的分析发现,控油植物活性物组合(BIRC-Rosée控油精粹KY100)具备潜在的抑制皮脂分泌功效。