复方中草药四味穿心莲益生菌发酵产物对鸡大肠杆菌作用

为探究复方中草药四味穿心莲益生菌发酵产物(FPSCS)对鸡大肠杆菌的作用,采用微孔-平板法测定其对O_(2)型鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),以O_(2)型鸡大肠杆菌半数致死量(LD_(50))感染SPF雏鸡制备病理模型,随机分为FPSCS高、中、低剂量组,硫酸新霉素组,四味穿心莲散组,益生菌组及对照组,统计总有效率、治愈率;ELISA试剂盒检测各组动物外周血液中炎症因子的含量。结果显示:FPSCS体外对O_(2)型鸡大肠杆菌的MIC和MBC均为31.25 mg/mL,口服FPSCS剂量为0.1~0.5 g/(次·只)的总有效率为73.33%~83.33%、治愈率为70%~80%,均显著高于四味穿心莲散组和益生菌组(P<0.05),且治疗初期可显著降低促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量(P<0.05),显著升高IFN-γ的含量(P<0.05)。由此表明,FPSCS可通过抑杀O_(2)型鸡大肠杆菌和降低鸡外周血促炎因子的含量而发挥较好的抗菌活性。

中药联合益生菌对大肠杆菌致小鼠腹泻保护机制研究

【目的】前期研究表明中药联合益生菌对致病性大肠杆菌所致小鼠腹泻具有明显的保护作用,本研究旨在进一步探讨中药联合益生菌对致病性大肠杆菌致小鼠腹泻的保护机制。【方法】选取小鼠60只,随机分为5组,空白组、模型组、中药组、益生菌组及中药联合益生菌组,每组12只。除空白组外,其余各组小鼠通过腹腔注射1×10^(7) CFU/kg大肠杆菌分离株菌悬液建立小鼠腹泻模型,空白组腹腔注射等量生理盐水。中药组灌胃给予中药液(2.5 g/kg蒲公英提取物、0.5 g/kg黄芪总黄酮及0.5 g/kg黄芪多糖),益生菌组灌胃给予枯草芽孢杆菌悬液(2×10^(8) CFU/kg),中药联合益生菌组灌胃给予中药液(2.5 g/kg蒲公英提取物、0.5 g/kg黄芪总黄酮及0.5 g/kg黄芪多糖)与枯草芽孢杆菌悬液(5×10^(7) CFU/kg)的混合液,1次/d,连续给药7 d。HE染色观察小肠组织病理学变化,扫描电镜观察小肠组织超微结构变化,ELISA法检测小鼠小肠匀浆和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量,RT-PCR法检测小肠组织及血液中TNF-α和IL-6 mRNA表达,免疫组织化学染色检测小肠组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达。【结果】中药联合益生菌能改善小肠病理组织学病变、修复小肠绒毛高度脱水萎缩和微绒毛脱落明显的损伤。同时,中药联合益生菌可明显降低小肠组织及血清中TNF-α和IL-6的含量(P<0.05;P<0.01),显著抑制小肠组织及血液中TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P<0.05;P<0.01)。中药联合益生菌可明显降低小肠组织NF-κB p65蛋白的表达。【结论】中药联合益生菌可通过调控NF-κB信号通路,抑制小肠组织及血液TNF-α和IL-6 mRNA的过度表达,降低小肠组织及血清TNF-α和IL-6含量,改善肠腺变性和黏膜炎性细胞浸润以及小肠绒毛和微绒毛损伤,从而对大肠杆菌所致小鼠腹泻起到保护作用。

益生菌大肠杆菌Nissle 1917抗逆性能、猪肠上皮细胞黏附率及抑菌效果研究

本试验旨在研究益生菌大肠杆菌Nissle 1917(Ec N)抗逆性能、猪肠上皮细胞黏附率及抑菌效果。采用体外法对Ec N进行生长曲线绘制和耐酸、耐胆盐、耐热性能的测定;以猪肠上皮细胞IPEC-J2细胞为体外细胞模型,考察了Ec N对该细胞的黏附率以及对致病菌大肠杆菌K88的黏附抑制率;同时通过蛋白质印迹法检测了Ec N对IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4的水平的影响。结果表明:1)Ec N对高酸、高胆盐和高温环境具有一定耐受能力。2)Ec N对IPEC-J2细胞的黏附作用以对数期最佳,黏附率达33.96%,显著高于迟缓期、稳定期和衰亡期(P<0.05)。3)Ec N对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制效果,黏附抑制率达87.84%。4)Ec N还能上调IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4水平。结果提示,益生菌Ec N具有较好的抗逆性能,能够良好地黏附猪肠上皮细胞,对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制作用。

饲用益生菌抑制黄羽肉鸡大肠杆菌的探究

通过体外、体内两个途径研究饲用粪肠球菌、枯草芽胞杆菌对禽大肠杆菌的抑制作用进行研究。体外采用共培养检测其对禽大肠杆菌的抑制作用,并用牛津杯法检测其抑菌效果;体内将粪肠球菌、枯草芽胞杆菌制成复合菌剂饲喂黄羽肉鸡,检测肉鸡血清抗氧化力、盲肠乳酸菌、总芽孢杆菌和大肠杆菌活菌数量来确定其对大肠杆菌的抵制作用。结果表明,体外在共培养12 h后,粪肠球菌显著地降低了大肠杆菌的数量,大肠杆菌数量由1×10^(9) CFU/ml降低至2×10^(5) CFU/ml,至36 h后,培养液中未检测出大肠杆菌。枯草芽孢杆菌具有抑制大肠杆菌能力,在培养24 h后,大肠杆菌数量由1×10^(9) CFU/ml降低至1×10^(5) CFU/ml,至36 h后,培养液中的大肠杆菌数量降低到2×10^(3) CFU/ml,至48 h后,培养液中检测不出大肠杆菌数。牛津杯法检测抑菌效果表明,在伊红美兰琼脂培养基中,粪肠球菌、枯草芽胞杆菌发酵滤液可抑制禽大肠杆菌生长,出现抑菌圈,直径分别为20.12 mm和15.54 mm。养殖试验结果表明,黄羽肉鸡按2×10^(6) CFU/g的添加量饲喂复合菌后,机体抗氧化能力显著增强,盲肠菌群中乳酸菌数量和总芽孢杆菌数量显著提高,大肠杆菌数量显著下降。粪肠球菌、枯草芽胞杆菌能显著抑制禽源大肠杆菌,可作为饲料添加剂用于肉鸡养殖。

5种益生菌对大鼠肠道感染产肠毒素大肠杆菌的预防效果

本试验旨在研究5种益生菌对大鼠肠道感染产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的预防效果,以筛选出对ETEC产生的不良影响具有较好预防效果的益生菌株。将80只3周龄无特定病原体(SPF)级SD雌性健康大鼠随机分成8组,每组10个重复,每个重复1只大鼠。空白对照组(CK组)和阴性对照组(NC组)正常饮水,阳性对照组(AC组)在饮水中添加硫酸黏菌素(20 mg/L),试验1组(EG-1组)、试验2组(EG-2组)、试验3组(EG-3组)、试验4组(EG-4组)和试验5组(EG-5组)分别在饮水中添加唾液乳杆菌E33、贝莱斯芽孢杆菌F5001、戊糖片球菌9601、乳酸片球菌11403和植物乳杆菌B6401新鲜菌液(1×10^(7) CFU/mL);试验最后5 d,除CK组外,其他各组每只大鼠每天灌胃1 mL的ETEC菌液(1×10^(10) CFU/mL)进行攻毒,建立腹泻模型。预试期7 d,正试期20 d。结果表明:1)CK、AC及EG-4组大鼠存活率均为100%。2)EG-3和EG-1组平均日增重明显高于CK组,EG-3和EG-1组料重比明显低于CK组。3)NC组肝脏指数显著低于EG-4和EG-5组(P<0.05)。4)CK组血液白细胞和淋巴细胞数量极显著高于其他各组(P<0.01)。5)EG-4组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著高于NC组(P<0.05),血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著低于NC组(P<0.05)。6)EG-1组血清白细胞介素-4(IL-4)含量显著低于CK、NC、EG-2及EG-5组(P<0.05)。7)EG-1、EG-2、EG-3、EG-4和EG-5肝脏谷丙转氨酶(ALT)活性极显著高于CK组(P<0.01),EG-4组大鼠肝脏ALT活性显著高于AC组(P<0.05)。由此可见,唾液乳杆菌E33、贝莱斯芽孢杆菌F5001、戊糖片球菌9601、乳酸片球菌11403和植物乳杆菌B6401的添加对ETEC感染对大鼠造成的不良影响均具有一定的预防效果,其中乳酸片球菌11403的预防效果最好。

14种中草药对肠源性益生菌及出血性大肠杆菌的抑菌作用

采用水煎法从石菖蒲等14种中药中提取有效成分,琼脂板扩散法观察有效成分对4株肠源性益生菌及1株出血性大肠杆菌抑菌效果。结果表明:川芎、黄芩、板蓝根、大黄、甘草对4株肠源性益生菌抑制作用较强,抑菌圈直径最高可达22mm,葛根、陈皮、穿心莲、苍术对4株肠源性益生菌表现的抑制作用相对较弱,抑菌圈直径最高为11mm,其他中药对4株益生菌无抑制作用;黄芩、黄芪、石菖蒲、陈皮、甘草、苍术对出血性大肠杆菌表现出抑菌作用,抑菌直径为10～24mm,其中黄芩抑菌作用最明显,且黄芪提取物对出血性大肠杆菌的MIC为0.625g/mL,均小于4种益生菌,川芎、葛根、丹皮、板蓝根、知母、穿心莲、大黄、茯苓则未表现出抑菌性。

产肠毒素性大肠杆菌K88的致病特性及其益生菌的筛选

在获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的菌株K88-GFP并证明其与K88具有遗传同质性的基础上,以K88-GFP为致病菌,腹腔注射侵染小鼠,在不同时间进行眼球采血,测定血液生理生化指标,并采取不同器官或组织,培养后利用紫外光激发K88-GFP的绿色荧光,观察计数这种产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)在小鼠体内的分布。同时通过体外抑制和活体饲喂试验,进行了益生菌的筛选。结果证实,ETEC致病菌具有较强的侵袭性,它可以侵袭小鼠肝、肾、心、肺及脑、肌肉等器官和组织,尤其可对肝、肾造成严重的损伤;筛选得到益生菌株PB JK-2,在体内外均对K88具有较好的抑制作用。

动物饲用益生菌LPF-2对大肠杆菌抑制作用的培养条件优化

【研究目的】对畜禽大肠杆菌具有抑制作用的动物饲用益生菌短短芽孢杆菌LPF-2的培养条件进行优化。【方法】以抑菌圈为指标,从时间、温度、摇床转速和培养基pH值研究短短芽孢杆菌LPF-2的最适培养条件,以获得短短芽孢杆菌LPF-2最佳的抑菌效果。【结果】短短芽孢杆菌LPF-2培养24～84h的抑菌圈为10.00～13.00mm,在24～39℃下培养的抑菌圈为9.00～14.00mm,转速在90～210r/min下培养的抑菌圈为13.75～15.00mm,pH6.0～8.0下培养的抑菌圈为10.50～14.50mm。【结论】动物益生菌短短芽孢杆菌LPF-2的最适培养条件为培养基pH7.5、培养温度30℃、培养时间48h,摇床转速在90～210r/min范围内均可。

大肠杆菌和益生菌对抗生素和化学药物的敏感性试验

用试管二倍稀释法、试管稀释涂布法检测大肠杆菌、嗜酸乳杆菌对常用饲料药物添加剂和治疗用抗生素的敏感性 ,结果表明饲料药物添加剂和治疗药物对大肠杆菌和沙门氏杆菌无效或产生明显的抗药性 ,却对外源的益生素乳杆菌很敏感 ;痢菌净、庆大霉素等抗生素对大肠杆菌较敏感 ,但在MIC浓度庆大霉素培养基连续传代2 4 0h ,大肠杆菌对庆大霉素MIC大幅度提高。这提示使用乳杆菌时 ,不可同时使用敏感药物 ;治疗时要选择敏感药物 ,控制抗药性。

复合益生菌与金霉素配合抑制大肠杆菌生长的研究

[目的]为益生菌和抗生素的配伍使用提供理论依据。[方法]选用乳酪杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和布拉迪酵母4种益生菌与金霉素配比,通过正交试验研究其对致病菌性大肠杆菌的抑制作用,探讨金霉素与微生态制剂的最佳配伍比例。[结果]复合益生菌抑制大肠杆菌的最佳组合为：枯草芽孢杆菌∶酵母菌∶乳酪杆菌∶粪肠球菌=2∶1∶3∶4。单独复合益生菌对大肠杆菌的抑制作用与75-150 mg/kg的金霉素相当。随着金霉素浓度的提高,无论是单一的金霉素还是与益生菌复合,其抑菌作用均逐渐增强（P〈0.05）。当150 mg/kg的金霉素与益生菌配合时,其抑菌效果与单独使用300-400 mg/kg金霉素相当。[结论]低浓度金霉素与复合益生菌配合后,可以达到高浓度金霉素的抑菌效果。

中药、益生菌制剂防治高寒牧区绵羊大肠杆菌病的经济效益分析

为了研究中药、益生菌制剂对高寒牧区绵羊大肠杆菌病的防治效果,提高养羊业的综合经济效益,解决大肠杆菌病对养羊业造成的损失及防治成本过高的问题,将高寒牧区的早春羔羊作为试验对象,分为试验组和空白对照组,试验组以自拟中药方剂和益生菌进行防治,空白对照组仅对发病羊只采用抗菌素治疗。结果显示:试验组防治效果明显优于对照组。以1 000只羔羊1个生产周期(4个月)为基数进行经济效益分析,2012年全县羔羊预计可增收近2 039.8万元,综合效益良好。

基于大肠杆菌感染模型探讨益生菌对断奶仔猪生长性能影响的研究进展

文章综述了采用典型的产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染试验模型,研究益生菌对断奶仔猪生长性能、肠道菌群、肠道形态及炎症因子的作用。鉴于当前我国及全球实际养猪生产卫生条件的差异,ETEC感染仔猪试验模型更能反映禁抗后益生菌等功能性添加剂在养殖卫生较差情况下的使用效果。因此,文章收集了益生菌在ETEC感染仔猪试验模型下的部分研究成果,重点总结5方面的内容,包括:①ETEC感染断奶仔猪试验模型的建立;②ETEC感染对断奶仔猪生长性能的影响及益生菌的作用效果;③ETEC感染对断奶仔猪肠道菌群的影响及益生菌的作用效果;④ETEC感染对断奶仔猪肠道形态的影响及益生菌的作用效果;⑤ETEC感染对断奶仔猪炎症细胞因子的影响及益生菌的作用效果。分析显示:ETEC感染处理显著降低断奶仔猪生长性能、破坏肠道菌群平衡、损伤肠道组织形态、引发炎症反应;益生菌处理通过平衡肠道菌群、维持肠道形态、缓解炎症反应等,一定程度上改善了ETEC感染仔猪的生长性能。

中药益生菌制剂对羔羊肠道大肠杆菌的抑制效果试验

本试验旨在研究中药益生菌制剂对羔羊肠道大肠杆菌的抑制效果。将健康羔羊100只,随机分为5组,每组20只,A组为空白对照组,仅饲喂基础日粮;B组在饲喂基础日粮的基础上添加0.25%硫酸新霉素;C、D、E组在基础日粮中分别添加0.05%、0.15%、0.25%中药益生菌复合制剂。饲养方式为放牧+舍饲,试验期为90d。统计比较了各试验组对羔羊肠道大肠杆菌数的影响。结果表明:各试验组对羔羊肠道大肠杆菌均有一定的抑制作用,且在羔羊肠道大肠杆菌病高发的30d-60d,E组与对照组比较差异极显著(P<0.01)。

益生菌发酵对大黄抑制大肠杆菌的影响

试验研究大黄发酵后对大肠杆菌的抑菌活性,为发酵中草药饲料添加剂的研制提供参考。试验对益生菌发酵大黄的盐浓度、pH值、接种量、温度和时间等发酵条件进行优化。最终确定大黄的发酵条件为MgSO4添加量为6g、pH值7、接种量2%、温度37℃、时间24h,此条件下,发酵大黄对大肠杆菌的抑菌作用最为明显。

中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用

【目的】研究中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用。【方法】通过正交试验筛选中药联合益生菌最佳因素配比。取60只小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射生理盐水(0.2 mL/只),模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组均先腹腔注射分离菌悬液1×10^(7)CFU/kg,然后中药组按10 mL/kg灌胃中药液(其中蒲公英提取物浓度为0.25 g/mL,黄芪总黄酮和黄芪多糖浓度均为0.05 g/mL),益生菌组按4 mL/kg灌胃枯草杆菌悬液(菌含量5×10^(7)CFU/mL),中药联合益生菌组按上述量灌胃中药液和枯草杆菌混合液,每天定时灌胃给药1次,连续3 d。每日记录小鼠腹泻、体重、采食量等情况。末次给药12 h后分离心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏,称重并计算脏器系数;血液分析法检测血液学指标;取粪便及小肠内容物检测粪便隐血情况并进行细菌计数;ELISA法检测小鼠血清和小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】中药联合益生菌最佳因素配比为ABCD。与空白组相比,模型组小鼠腹泻率100%且无自愈现象,症状和剖检病变明显,腹泻指数极显著上升(P<0.01),体重、采食量均极显著下降(P<0.01),肝脏、脾脏器官指数均显著升高(P<0.05),淋巴细胞比率(LYM)、中间细胞比率(MID)均显著下降(P<0.05),粒细胞比率(GRAN)极显著上升(P<0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组腹泻指数极显著下降(P<0.01),体重、采食量显著上升(P<0.05),中药组肝脏、脾脏器官指数显著下降(P<0.05),中药联合益生菌组脏器系数极显著下降(P<0.01),中药组、益生菌组及中药联合益生菌组LYM显著上升(P<0.05)、GRAN显著下降(P<0.05)。粪便隐血检测结果显示,模型组检测呈强阳性;中药组、益生菌组呈弱阳性,中药联合益生菌组呈阴性。与空白组相比,模型组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均极显著上升(P<0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均显著下降(P<0.05)。【结论】中药联合益生菌可降低腹泻指数、肝脏和脾脏器官指数,增加体重、饮食量,使粪便隐血转阴并降低肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性,从而对大肠杆菌性小鼠腹泻产生协同保护作用。

鸡用抗大肠杆菌感染的混合益生菌制剂的制备与评价

本研究旨在探索益生菌对雏鸡抵抗大肠杆菌感染的影响,为微生态制剂的开发提供依据。通过牛津杯试验和细菌黏附抑制试验,初步得到体外抑制大肠杆菌效果良好的3种益生菌及它们的等比例混合菌液,分别为植物乳杆菌ZN-3、鼠李糖乳杆菌QC、丁酸梭菌HYCB和混合菌制剂X。连续30 d向7日龄SPF雏鸡分别灌服各益生菌及它们的混合制剂,并在灌服的第26~30天每天感染1次大肠杆菌XT-13,记录雏鸡存活率和体重变化。利用相同的灌服与感染方案,分析混合益生菌组雏鸡感染XT-13后的心脏、肝脏以及大肠的剖检与病理变化,并通过免疫组织化学法检测肝脏和肠道的大肠杆菌载菌量。另外,为了分析灌服混合益生菌制剂对大肠杆菌感染后雏鸡细胞因子的影响,采用非致死剂量的XT-13感染雏鸡,分别在感染后第4、8和14天检测血清中白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)和肝脏中禽防御素-β1(AvBD1)的水平,并测试感染后14 d血清的杀菌能力。最后,评估混合益生菌制剂对O78血清型大肠杆菌AV006感染雏鸡的广谱保护力。结果表明,各益生菌发酵液上清的抑菌效果明显,益生菌混合后可降低XT-13对DF-1细胞的黏附率(P<0.05);灌服混合益生菌制剂对雏鸡的增重效果优于单一益生菌,且对雏鸡感染XT-13后具有较好的保护效果,存活率达到87.50%;混合益生菌制剂可显著降低雏鸡肝脏和大肠的XT-13载菌量,减轻病理损伤,调节机体血清IL-10和IL-17以及肝脏中AvBD1的水平,并提高血清的杀菌能力;大肠杆菌AV006的保护性试验结果表明,混合益生菌制剂还可降低雏鸡感染O78型大肠杆菌的死亡率。综上,植物乳杆菌ZN-3、鼠李糖乳杆菌QC和丁酸梭菌HYCB的混合制剂可促进雏鸡增重、减少载菌量、降低组织病变程度并调节宿主的免疫反应,对禽大肠杆菌病有良好的防治作用,具有开发成为抗禽大肠杆菌病益生菌制剂的巨大潜力。

比较益生菌和中药组合对鸡源大肠杆菌抑菌效果分析

试验比较多种益生菌和中药组合对鸡源大肠杆菌的抑菌效果,并对其抑菌机理进行分析。结果表明:益生菌中,枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌对鸡源大肠杆菌具有明显的抑菌活性,但地衣芽孢杆菌没有效果。中药组合中,黄连和茯苓、赤芍、金银花、鱼腥草、桂枝分别配伍时抑菌效果明显,但中药组合的抑菌效果明显低于益生菌。进一步研究益生菌中的抑菌成分,对植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵液进行粗提取、分离和纯化,发现地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌可以产生肠杆菌肽,肠杆菌肽是抗菌肽的一种,其对鸡源大肠杆菌有抑制作用。

益生菌对致病性大肠杆菌在雏鸡消化道内的作用效果

1日龄雏鸡120只,随机分为6组,用不同的方法处理后,对各组雏鸡7个部位(嗉囔、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠)消化道黏膜黏附的O78进行分离计数,研究禽致病性大肠杆菌在雏鸡消化道的分布,比较益生菌对禽致病性大肠杆菌O78在不同雏鸡动物模型中的抑制作用。结果表明:禽致病性大肠杆菌O78主要定植在雏鸡的嗉囔、盲肠和直肠;抗生素处理组和非处理组在灌服益生菌后24、48、72、96h与对照组相比,各消化道部位定植的O78均有不同程度的降低,说明益生菌对禽致病性大肠杆菌O78具有较强的抑制能力;未处理组的雏鸡消化道内黏附的O78菌数低于抗生素处理组,说明益生菌在抑制病原菌同时可促进消化道有益菌群的生长,从而防止致病菌的感染。

益生菌拮抗大肠杆菌O157∶H7感染研究进展

由于使用抗生素治疗大肠杆菌O157∶H7感染出现一些争论,运用其他方法如益生菌来拮抗这种细菌就越来越引起人们的重视。不同的益生菌具有不同的生物学性质,抑制大肠杆菌O157∶H7存在多种机制,如竞争性排斥、增强免疫应答、抑制细菌内化及中和志贺毒素等。