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体外转染P27抑癌基因抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的研究 被引量:3
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作者 孙璐 骆玮 李静敏 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第12期1119-1123,共5页
目的探讨阳离子脂质体介导的P27抑癌基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的抑制作用。方法收集斜视患者矫正手术过程中获取的球筋膜囊组织制备成组织块,采用贴壁法在DMEM+质量分数10%胎牛血清培养液中进行培养和传代。采用脂质... 目的探讨阳离子脂质体介导的P27抑癌基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的抑制作用。方法收集斜视患者矫正手术过程中获取的球筋膜囊组织制备成组织块,采用贴壁法在DMEM+质量分数10%胎牛血清培养液中进行培养和传代。采用脂质体介导的方法,将构建的增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-N1P27真核表达质粒转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞为pEGFP-N1P27转染组,同时以重组质粒pEGFP-N1的空质粒转染组为空载体组,另设部分未转染的成纤维细胞为未转染组。Westernblot法检测P27蛋白在人眼球筋膜囊成纤维细胞中的表达,用流式细胞技术进行细胞周期分析,MTT法检测P27基因对培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞活性的影响,检测值以细胞的吸光度(A490)值表示。结果荧光倒置显微镜下见转染成功的成纤维细胞呈绿色荧光。Westernblot检测显示,pEGFP-N1P27转染组中可见宽大的蛋白条带,证实人眼球筋膜囊成纤维细胞在蛋白水平表达P27基因。细胞周期分析结果表明,pEGFP-N1P27转染组73.16%的人眼球筋膜囊成纤维细胞处于G0-G1期,26.84%处于S期,而空载体组的人眼球筋膜囊成纤维细胞在G0-G1期、S期者分别为63.29%和58.16%,未转染组分别为36.71%和41.84%。MTT法检测表明,pEGFP-N1P27转染组人眼球筋膜囊成纤维细胞的A490值为0.079±0.054,明显低于空载体组的0.127±0.106和未转染组的0.180±0.007,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.011)。结论转染的P27基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增生具有抑制作用,并能够抑制成纤维细胞的活性。 展开更多
关键词 抑癌基因P27 人眼球筋膜囊 成纤维细胞 基因转染 脂质体
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