人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能

目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋白在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点。结果HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9-EGFP在CHO细胞和S4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位。结论HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节。

人睾丸组织蛋白质表达谱的构建

睾丸是重要的男性生殖腺，其主要作用是产生精子和雄性激素。在整体水平上对人睾丸的蛋白质表达谱进行分析，将为阐明精子发生以及男性生殖调控的分子机理提供重要信息。基于这一目的，本研究利用蛋白质组学的技术手段研究了正常人睾丸的蛋白组成并建立了人睾丸蛋白质的参考数据库。我们利用双向凝胶电泳对正常人睾丸蛋白进行了分离，在硝酸银染色后将所有可见的蛋白点切取下来，经胰蛋白酶消化以后用MALDI-TOF质谱仪进行鉴定。

非梗阻性无精子症患者睾丸组织CREM表达及意义

目的:探讨非梗阻性无精子症(NOA)患者睾丸组织中CREM表达及意义。方法:选取NOA患者28例和生精正常的梗阻性无精子症(OA)患者19例,收集睾丸活检组织,采用RT-PCR、免疫组化法及Western blot法检测睾丸组织中CREM mRNA及CREM蛋白表达。结果:CREM蛋白主要表达于睾丸组织生精小管的精母细胞、精原细胞和早期精子细胞的细胞核。OA睾丸组织中CREM mRNA含量高于NOA睾丸组织[(0.028±0.022)vs(0.014±0.024)],OA睾丸组织中CREM蛋白表达高于NOA睾丸组织[(2.263±0.371)vs(1.145±0.535)],差异均有统计学意义(P<0.001)。结论:睾丸组织中CREM mRNA及蛋白表达下调可能是NOA发病的原因之一。