miR-375靶向调控人矮小同源盒基因2基因在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的 miR-375在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)中低表达,但其调控的下游靶基因仍不明确。文中初步探讨miR-375在调控人食管鳞癌细胞中人矮小同源盒基因2(short stature homobox 2,SHOX2)的表达中的作用。方法运用生物信息学预测软件Target Scan、miRanda、Pic Tar、miRTarget2和PITA预测miR-375在SHOX2基因可能的作用位点。构建野生型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-WT)及突变型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-mut),测序鉴定。分7组转染:pmiR组、p SHOX2-375-WT组、p SHOX2-375-WT+miR-375组、p SHOX2-375-WT+miR-NC组、p SHOX2-375-mut组、p SHOX2-375-mut+miR-375组、p SHOX2-375-mut+miR-NC组,分别检测荧光素酶活性。转染miR-375的mimics于食管鳞癌细胞中,SHOX2 mRNA及蛋白表达分析。另检测食管鳞癌组织术后标本miR-375及SHOX2表达。结果 Target Scan、miRanda、Pic Tar、Mir Target2和PITA软件预测结果显示miR-375在SHOX2 3'UTR 1156-1170bp区域有且仅有1个保守作用位点。p SHOX2-375-WT+miR-375组荧光素酶活性(0.261±0.036)显著低于[pmiR(1.818±0.061)、p SHOX2-375-WT组(1.820±0.086)、p SHOX2-375-WT+miR-NC组(1.851±0.094)、p SHOX2-375-mut组(1.861±0.059)、p SHOX2-375-mut+miR-375组(1.896±0.048)、p SHOX2-375-mut+miR-NC组(1.760±0.062)],差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-375后EC9706细胞SHOX2 mRNA及蛋白较对照组相比表达受到抑制。食管鳞癌组织中的miR-375较癌旁组织表达降低,而SHOX2表达较癌旁组织表达增强。结论 miR-375在食管鳞癌细胞EC9706中靶向调控SHOX2基因的表达。

祛瘀通络解毒方联合中药外治方对糖尿病足溃疡面局部组织活化素Ⅰ型受体和人矮小同源盒基因2表达的影响

目的观察祛瘀通络解毒方联合中药外治方治疗糖尿病足溃疡的疗效以及对活化素Ⅰ型受体(Acvr1)和人矮小同源盒基因2(Shox2)表达的影响。方法将116例糖尿病足溃疡患者按照随机数字表法分为2组,对照组58例予中药外治方熏洗治疗,联合组58例在对照组治疗基础上加祛瘀通络解毒方治疗,2组均治疗4周。比较2组治疗前及治疗第7、14天溃疡面组织Acvr1、Shox2表达(免疫组化法),治疗前和治疗第7、14、28天血清Acvr1、Shox2水平(酶联免疫吸附法)及蛋白表达(Western blot法)、中医证候积分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、溃疡面面积变化,统计比较2组肉芽组织形成时间、创面愈合时间、住院时间及临床疗效,采用Pearson检验分析血清Acvr1、Shox2水平与其他临床指标相关性。结果联合组总有效率96.55%(56/58),对照组总有效率77.59%(45/58),联合组临床疗效优于对照组(P<0.05)。随着治疗时间的延长,2组溃疡面组织Acvr1、Shox2表达及血清Acvr1、Shox 2水平和蛋白表达逐渐升高,中医证候积分及疼痛VAS逐渐降低,溃疡面面积逐渐缩小,各时间点两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后各时间点联合组与对照组同期比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。联合组肉芽组织形成时间、创面愈合时间及住院时间均少于对照组(P<0.05)。血清Acvr1及Shox2水平与糖尿病病程、糖尿病足病程、中医证候积分、疼痛VAS、溃疡面面积、肉芽组织形成时间、溃疡创面愈合时间及住院时间呈显著负相关(P<0.05),Acvr1与Shox2呈显著正相关(P<0.05)。结论祛瘀通络解毒方联合中药外治方可有效提高糖尿病足溃疡的临床疗效,缩短创面愈合时间,提高Acvr1和Shox2表达,且二者有望成为糖尿病足新的治疗靶点。

支气管肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在临床肺癌诊断中的应用

目的探讨支气管肺泡灌洗液中人矮小同源盒基因2(SHOX2)、RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化检测在肺癌诊断中的应用效果。方法 202例呼吸科住院患者,其中33例经组织病理诊断肺癌患者, 169例肺部良性结节疾病患者,收集所有患者支气管肺泡灌洗液,然后修饰纯化脱氧核糖核酸(DNA),进行SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测,观察其肺泡灌洗液SHOX2、RASSF1A基因甲基化诊断肺癌敏感性、特异性及诊断准确率,并比较SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测与细胞学诊断肺癌敏感性,比较SHOX2联合RASSF1A基因甲基化与细胞学诊断肺癌病理学四期敏感性。结果肺泡灌洗液SHOX2基因甲基化诊断敏感性为87.88%,特异性为89.35%,诊断准确率为89.11%。肺泡灌洗液RASSF1A基因甲基化诊断敏感性为81.82%,特异性为93.49%,诊断准确率为91.58%。SHOX2、RASSF1A基因甲基化诊断肺癌敏感性分别为87.88%(29/33)、81.82%(27/33),均高于细胞学的54.55%(18/33),差异具有统计学意义(P<0.05)。SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肺癌的敏感性分别为75.00%(6/8)、94.12%(16/17)、83.33%(5/6)、100.00%(2/2),细胞学诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肺癌的敏感性分别为37.50%(3/8)、52.94%(9/17)、66.67%(4/6)、100.00%(2/2), SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肺癌的敏感性均高于细胞学诊断。其中SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅱ期肺癌的敏感性高于细胞学诊断,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论支气管肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测有助于肺癌的早期诊断,可以作为新型的肿瘤分子标志物。