苯磺酰胺类化合物的合成与碳酸酐酶抑制活性的评价

目的设计合成含苯并咪唑结构的苯磺酰胺类化合物,并评价化合物对人碳酸酐酶(hCA)Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ的抑制活性,分析构效关系,获得具有潜在靶点选择性的先导化合物。方法分别以4-氟-3-硝基苯甲酸、3-氟-4-硝基苯甲酸为起始原料,经缩合、取代、硝基还原、环合反应生成目标化合物;采用人碳酸酐酶催化4-硝基邻苯二甲酸转化为4-硝基邻苯二甲酸根原理,利用酶标仪测定并计算化合物对酶的抑制活性。结果与结论共合成了30个目标化合物,其结构经质谱及核磁共振谱确证。体外抑制活性表明,与hCAⅨ相比,该类化合物具有较好的hCAⅠ/Ⅱ双靶点选择性,与阳性对照乙酰唑胺相比,化合物A6b、A6d、B6i的双靶点抑制作用佳,值得进一步进行体内药效、毒性研究。

弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与宿主巨噬细胞蛋白的相互作用

目的鉴定与弓形虫GRA7致密颗粒蛋白相互作用的宿主巨噬细胞蛋白组分,并研究蛋白相互作用与感染过程的相关性。方法建立基于人源THP-1单核巨噬细胞系的弓形虫-巨噬细胞感染模型。以含GST标签的GRA7全长重组蛋白为诱饵,采用GST沉降体外蛋白相互作用方法 ,捕获与诱饵相互作用的人THP-1单核巨噬细胞系成分,采用液相色谱-两级质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定宿主靶蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)方法验证其体内的相互作用。采用人碳酸酐酶1(h CA1)抗血清为一抗的蛋白质印迹(Western blotting)验证捕获蛋白为宿主h CA1蛋白组分。采用pc DNA3.1(+)真核质粒过表达宿主靶蛋白的方法研究蛋白相互作用与弓形虫感染巨噬细胞的相关性。结果 GST沉降实验捕获的THP-1细胞蛋白组分主要为相对分子质量为Mr29 000的蛋白,质谱鉴定为h CA1。Co-IP实验证明弓形虫GRA7蛋白与宿主h CA1蛋白在感染过程中具有显著体内相互作用。THP-1巨噬细胞内过表达h CA1基因可显著增强弓形虫的繁殖速度和纳虫泡形成速度,但不影响最终繁殖数量。结论弓形虫GRA7致密颗粒蛋白与THP-1巨噬细胞的h CA1蛋白具有显著蛋白相互作用,且该相互作用与弓形虫在THP-1巨噬细胞内的繁殖速度呈正相关。