血清抗人磷脂酶A2受体抗体、肾功能指标对特发性膜性肾病的诊断价值

目的探讨血清抗人磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体、肾功能指标对特发性膜性肾病的临床诊断价值。方法将100例特发性膜性肾病患者纳入A组,并选取同期住院的非特发性膜性肾病患者100例纳入B组,同期体检的健康人员100例纳入C组。比较A组不同病理分期患者的血清抗PLA2R抗体阳性率,比较3组受检者肾功能相关指标水平。结果 A组半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、24 h尿蛋白定量(24 h UP)水平与B组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);A组、B组Cys C、BUN、CREA、UA、24 h UP水平高于C组,TP、ALB水平低于C组,差异有统计学意义(P <0.05);特发性膜性肾病患者中,Ⅰ期与Ⅱ期患者各肾功能指标水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);Ⅲ期与Ⅳ期患者各肾功能指标水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);Ⅲ期和Ⅳ期患者Cys C、BUN、CREA、UA、TP、ALB、24 h UP水平与Ⅰ期与Ⅱ期患者比较,差异有统计学意义(P <0.05);特发性膜性肾病患者抗PLA2R抗体检测阳性率为68.0%,且抗PLA2R抗体阳性率与病理分期无相关性(P> 0.05)。结论血清抗PLA2R抗体可作为特发性膜性肾病重要的血清学诊断指标,与肾功能指标联合检测有助于掌握患者病情进展情况。

人源磷脂酶PLA2异源可溶表达纯化及酶学分析

为实现人源磷脂酶A2的原核异源可溶表达,并对其进行纯化和初步的酶学性质分析。通过检索NCBI确定人源PLA2(PLA2G10),并将其构建于载体pET28a+上,并以麦芽糖结合蛋白(MBP)为促溶标签,成功构建载体pET28a-MBP-PLA2,转化E.coli BL21(DE3)后,经PTG低温诱导表达,SDS-PAGE鉴定后,确认其在上清中大量表达。根据蛋白的性质建立了一整套蛋白纯化工艺,包括Q柱洗脱,硫酸铵盐析,Phenyl柱纯化,Amylose柱纯化,分离纯化获得重组酶,SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%。以卵磷脂为底物,酸碱滴定法测定其比活为127.04 U/mg,纯化得率48.8%,纯化倍数为10.3倍。酶学性质研究表明,该酶的分子量为56.5 kDa,最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,是钙离子依赖酶,对PC亲和能力最强,Km值为12.2 mmol/L,V(max)为0.19 mmol/L/min。本试验建立的磷脂酶A2的异源表达、纯化体系,为其进一步的理论和工业研究奠定了基础。