中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

SARS-CoV-2刺突糖蛋白对神经细胞的损伤效应及机制

目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;EdU试剂盒检测细胞增殖;荧光素酶发光法检测细胞内ATP含量;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位(MMP);Seahorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平。结果与细胞对照组相比,S蛋白25,50,75和100 mg·L^(-1)组细胞活力显著降低(P<0.01),半数抑制浓度(IC_(50))为65.05 mg·L^(-1);LDH释放率显著增加(P<0.01);EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.01);S蛋白75和100 mg·L^(-1)组细胞内ATP含量显著降低(P<0.01);S蛋白50和75 mg·L^(-1)组细胞内MMP显著降低(P<0.05,P<0.01);S蛋白50 mg·L^(-1)组基础糖酵解水平和糖酵解能力的最大值显著升高(P<0.05,P<0.01),S蛋白25和50 mg·L^(-1)组呼吸能力最大值显著升高(P<0.05,P<0.01)。SH-SY5Y细胞活力与细胞内ATP含量和MMP均呈正相关(r^(2)=0.9209,P=0.001;r^(2)=0.6170,P=0.0025);与反映细胞糖酵解水平的细胞基础糖酵解水平和糖酵解能力最大值呈负相关(r^(2)=0.5194,P=0.0285;r^(2)=0.6664,P=0.0073),与反映线粒体氧化磷酸化水平的ATP生成能力呈负相关(r^(2)=0.8204,P=0.0008)。结论S蛋白使SH-SY5Y细胞活力下降,抑制细胞增殖,其机制可能与干扰神经细胞内能量代谢密切相关。

缺氧诱导因子1α、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3在儿童创伤性脑损伤中的表达及意义

目的动态观察缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19kDa-interacting protein 3,BNIP3)在儿童创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的变化,并评估其预测儿童TBI病情轻重及预后的临床价值。方法前瞻性纳入2021年1月—2023年7月47例中重度TBI患儿为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分分为中度亚组(9~12分)和重度亚组(3~8分);以同期因腹股沟斜疝诊治且无基础疾病的30例患儿为对照组。比较各组HIF-1α、BNIP3、自噬相关蛋白Beclin-1及S100B水平的差异,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B对TBI病情轻重及预后的预测价值。结果TBI组患儿血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于对照组(P<0.05);TBI患儿中,重度亚组HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于中度亚组(P<0.05)。相关性分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平与格拉斯哥昏迷评分呈负相关(P<0.05)。治疗7 d后,非手术TBI和手术TBI患儿的血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B水平均较治疗前下降(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平预测重度TBI的曲线下面积分别为0.782、0.835、0.872、0.880(P<0.05),预测TBI预后不良的曲线下面积分别为0.749、0.775、0.814、0.751(P<0.05)。结论TBI患儿血清HIF-1α、BNIP3及Beclin-1水平显著升高,检测其水平有助于临床判断TBI患儿的病情轻重及预后。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

香豆素通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤

目的 探讨香豆素通过调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap)1/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤。方法 大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑缺血-再灌注损伤模型(CIRI)组,低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)香豆素组,Keap1/Nrf2/ARE信号通路抑制剂组(ML385)组及ML385+高剂量香豆素组,脑缺血2 h、再灌注24 h后采用Longa5分制法评估大鼠神经行为评分;2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量大鼠脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑皮质组织病理学变化;Western印迹检测大鼠脑皮质组织中Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关因子[Keap1、Nrf2、血红素氧合酶(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)1]蛋白水平。结果 与Sham组比较,CIRI组神经行为评分、脑梗死体积,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,Keap1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞可见明显病理学改变。与CIRI组比较,低、中、高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积及脑皮质组织中Keap1蛋白减少,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度显著减轻;ML385组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度加重。与高剂量香豆素组比较,ML385+高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度有所加重。结论 香豆素可减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤,可能通过激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路而实现。

神经损伤诱导蛋白1的生理功能及其在相关疾病中的作用

神经损伤诱导蛋白1 (nerve injury-induced protein 1,NINJ1)是一种位于细胞表面的黏附分子,包含1个胞外黏附结构域和2个跨膜结构域。NINJ1因最初在受损神经末梢中被发现而得名,其在多种组织和细胞中均有表达,在上皮细胞和髓系细胞中高表达。NINJ1能够促进受损神经纤维中施万细胞前体和多能性周细胞向施万细胞定向分化,从而调节神经修复和髓鞘再生。在糖尿病引发的周围神经及血管损伤中,NINJ1不仅能够促进神经损伤恢复,还能通过血管生成素1(angiopoietin 1,ANG1)/酪氨酸激酶受体tie-2 (tyrosine-protein kinase receptor tie-2,TIE2)信号通路调控海绵体血管新生。NINJ1还参与调控玻璃体血管网成熟,这与周细胞ANG1以及血管生成素2 (angiopoietin 2,ANG2)比例变化相关。NINJ1主要通过胞外黏附结构域介导髓系细胞跨内皮迁移,从而加重中枢神经系统炎症;但其经基质金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase 9,MMP9)剪切后的片段能够抑制巨噬细胞炎性活化,其模拟肽有望用于治疗动脉粥样硬化。除调控细胞炎性表型外,NINJ1主动介导质膜破裂,调控炎症细胞程序性死亡,进而参与宿主抵御外源性感染过程。此外,NINJ1在多种肿瘤组织中表达上调,其与抑癌蛋白P53形成相互调控的闭环,介导肿瘤的生长及转移。该文总结了NINJ1的生理功能及其在多种病理过程中发挥的关键调控作用,并探讨了其在免疫调节和组织再生中的潜在价值,以期为损伤、炎症、肿瘤相关疾病的防治提供新思路。

推拿对坐骨神经慢性压迫性损伤模型鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响

目的通过观察推拿对坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的影响,探讨推拿治疗神经病理性疼痛的镇痛机制。方法建立CCI模型,将大鼠分为假手术组、模型组、推拿组,每组12只,采用按摩推拿手法模拟仪定性、定量模拟点法、拨法、揉法,对推拿组大鼠右侧的殷门、承山、阳陵泉穴进行干预,通过机械缩足反射阈值和累计疼痛评分评价大鼠机械痛敏反应和疼痛强度变化;通过透射电镜对大鼠脊髓背角突触超微结构进行观察;采用免疫荧光双重标记法观察脊髓背角GFAP、NR2B的共定位表达。结果推拿可以提高CCI模型鼠机械缩足反射阈值、降低累计疼痛评分(P<0.01);同时也能改变大鼠脊髓背角突触的形态结构:与模型组相比,推拿组脊髓背角突触形态结构恢复,膜较完整、线粒体肿胀程度轻、突触后致密区变长。干预20天后,与模型组比较,推拿组大鼠脊髓背角GFAP、NR2B平均荧光强度显著降低(P<0.05)。结论推拿可以改善大鼠的行为学和形态学结果,改变脊髓背角突触可塑性来抑制痛觉敏化;还可以通过抑制星型胶质细胞活化,降低脊髓背角GFAP和NR2B的表达来镇痛。

白藜芦醇对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))诱导的原代培养大鼠皮层神经元损伤的作用研究

目的研究白藜芦醇(Res)对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))诱导的原代培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用及可能的作用机制。方法用原代培养SD大鼠皮层神经元,分为实验组(a,b,c,d),治疗组(e,f,g,h)和空白对照组,实验组分别暴露浓度为5,10,20,40μmol/LAβ_(25～35);治疗组为神经元首先被给于5,10,20,40μmol/LRes作用24h,后再给于20μmol/LAβ_(25～35),孵育24h,倒置显微镜下观察神经元形态学的变化,用四唑盐(MTT)比色试验检测神经元存活和生长情况,应用比色法测定吸光值检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果Aβ_(25～35)在终浓度为20μmol/L时神经元形态有明显的变化,细胞立体感减弱,胞体内空泡形成,细胞突起内可见黑色颗粒状物;细胞的存活能力明显下降,与对照组相比较有显著性差异(P<0.05);Res在终浓度40μmol/L时,能明显提高细胞的存活能力。Aβ_(25～35)可以明显升高细胞培养上清液中MDA含量,降低GSH的含量;Res可使细胞培养上清液中MDA含量下降,GSH含量增加。结论Aβ_(25～35)诱导了原代培养皮层神经元变性、死亡,增加了神经元的脂质过氧化,Res可通过抑制脂质过氧化对皮层神经元起到保护作用。

神经诱导损伤蛋白1在心血管疾病演进中的研究进展

神经诱导损伤蛋白1(Ninj1)是神经诱导损伤蛋白家族中的重要成员之一,参与了人体多种生物学功能的调控。近年来研究发现,Ninj1通过调控多种信号传导通路在心血管疾病演进过程中发挥着重要的生物学作用。本文总结了Ninj1的生物学特性,以动脉粥样硬化、心房颤动、心力衰竭等为切入点,论述Ninj1在心血管相关疾病中的研究进展,以期为临床心血管相关疾病的诊疗和药物研发提供新思路。

神经诱导损伤蛋白1联合CK-MB检测在急性心肌梗死中的诊断价值

目的观察神经诱导损伤蛋白1(Ninj1)在急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达水平,并分析Ninj1与AMI病情的相关性,评估其在AMI中的临床诊断效能。方法选取2022年7月至2023年3月于新疆军区总医院就诊的29例AMI患者作为AMI组,根据冠状动脉造影结果将AMI组患者按照Gensini评分中位数分为轻度狭窄组(15例)和中重度狭窄组(14例);29例非AMI患者作为对照组。所有研究对象均于入院后抽取肘静脉血4 mL,采用酶联免疫吸附试验检测血清Ninj1水平,分析Ninj1水平与AMI病情的相关性,并比较两组肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,分析血清Ninj1、CK-MB对MAI的诊断效能。结果AMI组Ninj1表达水平[91.92(31.89,224.84)pg/mL]明显高于对照组[46.10(30.86,87.96)pg/mL],差异有统计学意义(P<0.05);中重度狭窄组Ninj1表达水平明显高于轻度狭窄组,差异有统计学意义(P<0.05);Ninj1水平与Gensini评分呈正相关(r=0.587,P<0.05);Ninj1单独检测诊断AMI的曲线下面积(AUC)为0.657,灵敏度为62.10%,特异度为72.40%;Ninj1与CK-MB联合检测诊断AMI的AUC为0.989,灵敏度为93.10%,特异度为96.60%。Ninj1在AMI发病6 h内诊断AMI的AUC为0.812,灵敏度为84.60%,特异度为75.90%;此时段与CK-MB联合检测诊断AMI的AUC为0.989,灵敏度为92.30%,特异度为96.60%。结论Ninj1在一定程度上可用于AMI的临床诊断,并且可反映AMI病情的严重程度;血清Ninj1与CK-MB联合检测,可提高对AMI的诊断效能,Ninj1有可能是新型的AMI诊断生物标志物。

TPF诱导化疗卡瑞利珠单抗治疗与二者联合治疗鼻咽癌的疗效比较及对患者神经膜蛋白2及表皮生长因子的影响

目的探究TPF诱导化疗方案(多西他赛+顺铂+5-氟尿嘧啶)、卡瑞利珠单抗(PD1)治疗二者联合治疗鼻咽癌的疗效比较及对患者神经膜蛋白2、表皮生长因子的影响。方法选取2020年2月至2023年2月,于上海瑞金医院舟山分院院进行鼻咽癌化疗治疗的患者163例,按治疗方式分组将其分为PD1单抗(PD1组)52例、TPF诱导化疗方案(TPF组)54例、联合组57例。PD1组给予PD1单抗治疗;TPF组给予TPF诱导化疗方案治疗;联合组给予TPF诱导化疗方案联合PD1单抗治疗。检测酶联免疫吸附试验检测癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)、糖类抗原125(CA125)、巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、表皮生长因子(EGF)水平;流式细胞仪检测CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平;RT-PCR法测定神经膜蛋白2(NRSN2)相对表达量。对比3组治疗效果,记录其不良毒副反应。结果治疗后,与PD1组、TPF组对比,联合组CEA、SCCAg、CA125、MIP-3α、LN、HA、PCⅢ、CD8^(+)、NRSN2、EGF水平均降低(P<0.05);CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平升高(P<0.05);与PD1组、TPF组相比[23%(12/52)和24%(13/54)],联合组总治疗有效率最高[49%(28/57),P<0.05];联合组疾病控制率最高[86%(49/57),61%(33/54),60%(31/52),P<0.05];与PD1组、TPF组相比,联合组恶心呕吐、白细胞降低、口腔黏膜炎及血小板减少情况均升高(P>0.05),白细胞降低最高(P<0.05)。结论采用TPF诱导化疗方案、PD1单抗以及二者联合,对鼻咽癌患者进行治疗,能降低肿瘤标志物和血清纤维化指标水平,提高免疫功能、下调NRSN2相对表达量,改善EGF水平,临床效果显著。

丙戊酸通过CREB上调脑红蛋白并保护N2a细胞免受双氧水诱导的神经损伤

目的研究丙戊酸对脑红蛋白表达的影响和机制,及其对双氧水诱导的神经损伤的保护作用。方法 Western blot、RT-PCR和荧光素酶活性实验检测丙戊酸对小鼠和人脑红蛋白表达的影响;荧光素酶活性实验分析CREB在丙戊酸诱导脑红蛋白启动子活性过程中的作用;MTT实验分析丙戊酸对双氧水诱导的神经损伤的保护能力。结果发现丙戊酸上调小鼠和人脑红蛋白的蛋白和mRNA水平,并能上调脑红蛋白基因的启动子活性;CREB特异性抑制剂KG-501和CREB显性负突变体KCREB均抑制丙戊酸诱导脑红蛋白基因的启动子活性;丙戊酸可保护N2a神经瘤母细胞免受双氧水诱导的损伤。结论 CREB介导了丙戊酸诱导的脑红蛋白表达上调;脑红蛋白可能在丙戊酸保护N2a细胞免受氧化应激诱导的神经损伤过程中扮演重要作用。

CRMP2与Ubc9在电针缓解慢性压迫性损伤模型大鼠神经病理性疼痛中的作用

目的:探讨电针对慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及相关机制。方法:选取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组与电针+激活剂组,每组10只。构建慢性压迫性损伤(CCI)大鼠模型,并按组别进行相应干预。测定大鼠痛觉敏感性,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中IL-1β、IL-6和IL-8表达水平,RT-qPCR检测大鼠脊髓中CRMP2、Ubc9 mRNA及Western bolting检测大鼠脊髓中坍塌反应调节蛋白2(CRMP2)、泛素结合酶9(Ubc9)蛋白水平。结果:CCI大鼠模型建成后,各组大鼠PWLD均显著升高且>4 s,差异具有统计学意义(P<0.05);在给予大鼠相应干预后,与假手术组比较,模型组大鼠患健侧PWLD显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠患健侧PWLD更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05);电针+激活剂组各指标均优于电针组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针可有效缓解CCI模型大鼠神经病理性疼痛,其作用机制可能是电针刺激穴位后引起机体CRMP2、Ubc9表达水平增加,抑制炎症反应,诱导镇痛。

神经损伤诱导蛋白2在胶质瘤中的表达及其意义

目的:探讨细胞黏附分子神经损伤诱导蛋白2(Ninjurin2)在胶质瘤中的表达及其意义。方法:采用免疫组化染色法检测88例胶质瘤组织和30例正常脑组织中Ninjurin2的表达,用COX多因素分析和Kaplan-Meier曲线分析胶质瘤患者的生存预后,蛋白印迹法检测人胶质瘤细胞系U251、U87、U373和正常胶质细胞系SVG中Ninjurin2的表达。取U251细胞,用Lipofectamine®2000试剂分别转染Ninjurin2 siRNA序列(Ninjurin2-siRNA组)、阴性对照序列(NC-siRNA组),细胞增殖实验评估两组细胞的增殖能力,肿瘤小室实验检测两组肿瘤细胞的侵袭能力。结果:胶质瘤组织中Ninjurin2蛋白高表达率为65.91%(58/88),高于正常脑组织的20.00%(6/30)(P<0.05)。COX多因素分析结果显示,术前卡氏评分(OR=2.312)、WHO分级(OR=2.008)、化疗(OR=1.600)和Ninjurin2(OR=2.816)是胶质瘤患者总生存期的独立影响因素(均P<0.05)。Ninjurin2高表达组中位生存时间为11个月,明显低于低表达组的19个月(P=0.004)。与SVG细胞比较,U251、U87和U373细胞中Ninjurin2蛋白相对表达量较高(均P<0.05)。与NC-siRNA组比较,Ninjurin2-siRNA组U251细胞增殖和侵袭能力明显下降(均P<0.05)。结论:Ninjurin2可能参与胶质瘤进展,Ninjurin2高表达与患者不良生存预后有关。

缺氧诱导因子-1α与基质金属蛋白酶-2在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义

目的 :探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义。方法 :将80只成年SD大鼠随机分为假手术组和慢性压迫性颈脊髓损伤组(脊髓压迫组),每组40只。大鼠麻醉后充分显露C5和C6椎板,切除C5左侧半椎板,显露硬脊膜,脊髓压迫组在C6椎板和硬脊膜之间置入吸水后可膨胀聚氨酯薄板(1×3×1mm);假手术组只显露硬脊膜不置入压迫物。两组分别通过BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分和体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)检测评估脊髓功能;于造模后7d、28d、42d和70d时处死大鼠取颈脊髓组织进行HIF-1α及MMP-2免疫组化染色,检测其在各时间点的表达量(IOD值),采用独立样本t检验比较两组各时间点的差异,分析HIF-1α、MMP-2与脊髓功能变化的相关性。结果:造模后7d时,两组BBB评分无显著性差异;SEP潜伏期显著性延长,波幅显著性降低;HIF-1α显著性降低,MMP-2显著性升高。28d时脊髓压迫组BBB评分显著性低于假手术组,SEP潜伏期与7d比较显著性延长(P<0.05)、波幅显著性降低(P<0.05),HIF-1α表达显著性增高(P<0.05),而MMP-2表达显著性降低(P<0.05)。42d时,脊髓压迫组BBB评分、SEP潜伏期和波幅与28d时比较无显著性差异,HIF-1α表达显著性增高(P<0.05),而MMP-2表达显著性降低(P<0.05);70d时脊髓压迫组神经功能较28d时显著性改善,BBB评分显著性增高(P<0.05),SEP潜伏期显著性缩短(P<0.05)、波幅显著性升高(P<0.05);HIF-1α表达较前显著性降低,而MMP-2表达升高,但与假手术组比较仍有显著性差异(P<0.05)。HIF-1α表达量与BBB评分呈显著性负相关(r=-0.458,P<0.05),MMP-2表达量与BBB评分呈显著性正相关(r=0.903,P<0.05)。结论:大鼠慢性压迫性脊髓损伤后具有一定程度的自我修复能力,HIF-1α、MMP-2表达变化与慢性脊髓压迫性损伤后神经功能改善相关。

视神经损伤后脑衰反应调节蛋白-2表达及其磷酸化修饰的变化及意义

背景 脑衰反应调节蛋白-2（CRMP-2）具有促进中枢神经轴突生长的作用,但中枢神经损伤后在细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）诱导下CRMP-2会发生过度磷酸化修饰,从而导致生长锥塌陷,阻碍神经系统的修复.视神经作为一种特殊的中枢神经组织,其损伤后是否发生CRMP-2表达的变化和磷酸化修饰鲜见研究报道. 目的 探讨视神经钳夹伤小鼠模型视神经组织中CRMP-2表达及其磷酸化修饰水平的动态变化及意义.方法 选取8～9周龄健康BALB/c小鼠48只,雌雄不限.采用随机数字表法将小鼠随机分为假手术组和损伤后3、7、14 d组,每组12只.各损伤组小鼠右眼术中暴露视神经,用小号动脉夹于球后2 mm处夹持视神经10s,假手术组小鼠手术操作同各损伤组,但不钳夹视神经.分别于术后3、7、14 d获取小鼠视神经组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2蛋白、磷酸化CRMP-2（p-CRMP-2）及CDK5的表达变化,检测结果进行组间比较.结果 假手术组及损伤后3、7、14d组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA及蛋白相对表达量的总体比较差异均无统计学意义（CRMP-2 mRNA：F=2.971,P=0.097;CRMP4蛋白：F=1.202,P=0.370）.假手术组及损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2蛋白的相对表达量分别为0.001±0.000、0.064±0.003、0.136±0.005和0.346±0.012,CDK5蛋白的相对表达量分别为0.440±0.009、0.723±0.011、0.874±0.015和0.952±0.019,总体比较差异均有统计学意义（p-CRMP-2：F=445.600,P＜0.001;CDK5：F=186.600,P＜0.001）,其中损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2和CDK5蛋白的相对表达量均明显高于假手术组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 小鼠视神经钳夹伤后视神经组织中CRMP-2的表达无明显变化,但视神经组织中CDK5和p-CRMP-2蛋白表达均明显上调,且随着损伤后时间的延长上调更为明显.

“三法三穴”推拿手法对大鼠坐骨神经损伤后髓鞘厚度和神经调节蛋白1-人类表皮生长因子受体2表达的影响

目的探讨"三法三穴"推拿手法对坐骨神经损伤大鼠运动功能恢复、坐骨神经损伤点和L4-6脊髓中神经调节蛋白(NRG) 1及其受体人类表皮生长因子受体(ErbB) 2表达以及坐骨神经损伤点处髓鞘形态变化的影响。方法 76只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和推拿组,每组19只。模型组和推拿组夹持右侧坐骨神经造模;假手术组仅分离后暴露坐骨神经,不夹持。术后7 d,推拿组以按摩推拿手法模拟仪模拟点法、拨法、揉法,作用于殷门、承山、阳陵泉,分别于造模前、术后7 d、28 d行斜板测试,于术后3 d、7 d、28 d,采用Western blotting检测坐骨神经损伤点和L4-6脊髓NRG1、ErbB2蛋白表达,术后28 d透射电镜观察坐骨神经损伤点处髓鞘的变化。结果术后7 d和28 d,模型组和推拿组斜板测试角度低于正常组和假手术组(P <0.05);术后28 d,推拿组评分高于模型组(P <0.05)。坐骨神经损伤点中,术后3 d,模型组和推拿组NRG1、ErbB2表达高于正常组和假手术组(P <0.05);术后7 d和28 d,各组NRG1表达无显著性差异(P> 0.05);术后28 d,模型组和推拿组ErbB2表达高于正常组和假手术组(P <0.05)。L4-6脊髓中,术后3 d,模型组和推拿组NRG1、ErbB2表达高于正常组和假手术组(P <0.05);术后7 d,模型组和推拿组NRG1表达高于假手术组(P <0.05),模型组和推拿组ErbB2表达高于正常组和假手术组(P <0.05);术后28 d,推拿组NRG1表达高于模型组(P <0.05),ErbB2各组间无显著性差异(P> 0.05)。术后28 d,模型组髓鞘崩脱严重,推拿组神经损伤点超微结构明显改善,神经纤维髓鞘保留较完整;模型组g-ratio值低于假手术组(P <0.05),推拿组高于模型组(P <0.05),且与假手术组比较无显著性差异(P> 0.05)。结论 "三法三穴"推拿手法能改善坐骨神经损伤大鼠后肢运动功能。推拿干预周围神经损伤起效机制与维持坐骨神经损伤点和L4-6脊髓中NRG1和ErbB2蛋白表达,维持正常髓鞘结构有关。

肝细胞DNA损伤诱导蛋白DDI2的单克隆抗体制备及鉴定

目的制备鼠抗DDI2蛋白单克隆抗体,并对其在细胞和组织中的定位进行初步研究。方法利用体外原核表达的DDI2蛋白,免疫BLAB/c小鼠,制备单克隆抗体。利用免疫组织化学技术明确该蛋白在组织中的定位。结果利用杂交瘤细胞技术,成功制备了两株DDI2单克隆抗体细胞系2H3、2B2。表达纯化的单克隆抗体具有较高的免疫活性。与正常对照组相比,肝损伤组织中该蛋白表达增强,且高表达于门脉周围肝实质细胞,并主要表达于细胞核。结论 DDI2的表达与四氯化碳诱导的肝损伤有关,损伤肝细胞主要表达于肝实质细胞的细胞核。

神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究

目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用。方法ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物。术后第3天开始,连续7d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS)。术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测。结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则。结论NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用。

原发性脑干损伤后延髓网状结构神经元型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶和钙结合蛋白的表达变化

目的:研究原发性脑干损伤后延髓网状结构神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和钙结合蛋白(CR)的表达变化,探讨脑干损伤短时间内的分子机制及形态学改变。方法:采用撞击法造成实验大鼠脑干损伤死亡,并分为正常对照组、1h内死亡组、伤后存活组。采用比色法检测3组延髓的一氧化氮合酶(NOS)、iNOS和结构型一氧化氮合酶(cNOS)的变化,并采用免疫组织化学SP法检测nNOS和CR的改变。结果:与正常对照组相比,1h内死亡组脑干的NOS和cNOS均升高,iNOS无显著性变化;伤后存活组NOS和iNOS升高,cNOS无显著性变化。与正常对照组比较,1h内死亡组延髓内nNOS阳性细胞数显著增多,伤后存活组则无显著性变化。与正常对照组比较,1h内死亡组和伤后存活组CR阳性细胞数明显减少,3组间两两比较差异均有显著性。结论:原发性脑干损伤导致延髓nNOS和iNOS呈现不同的变化规律,且在一定时间范围内CR表达下调。