中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因特性

目的研究中国南方地区H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因分子特征。方法从Genebank中下载中国南方地区3株H5N1亚型人禽流感病毒和其他国家或地区的16株代表性H5N1亚型人禽流感病毒血凝素基因序列,利用生物信息学软件DNASTAR 5.0进行核酸同源性分析,用MEGA 3.1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析。结果中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA蛋白的重链区和轻链区连接肽的序列为LRERRR-KR,与动物分离的高致病性H5N1亚型禽流感病毒和东南亚地区人禽流感病毒的连接肽相比,减少1个碱性氨基酸;共有8个潜在的糖基化位点,抗原决定簇位点有其独特的特征。基因进化树表明中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因位于单一的进化簇,与动物来源的高致病性禽流感病毒HA基因同源性高。结论中国南方3株H5N1亚型人禽流感病毒HA基因分子特征一致,有其显著的独有特点。提示候鸟或其他扩散因素在高致病性H5N1亚型流感病毒HA基因的重配方面扮演了重要的作用。

我国2006-2007年人禽流感病毒H5N1亚型HA特征分析

目的分析H5N1禽流感病毒HA基因核酸和蛋白变异、分子流行病特征及病毒溯源,为制备相应病毒疫苗提供信息。方法获取GenBank上2006-2008年我国及邻国人及禽类H5N1病毒HA核酸序列,Clust-alX1.83和MEGA4.0对HA核酸和蛋白关键位点氨基酸残基分析,比较同源性,构建HA核苷酸遗传进化树。结果本文人源样本基因变异率为4.1%-4.6%,高于该病毒平均变异率;我国人和家禽样本高度相似,2007年越南和马来西亚与中国样本核苷酸和氨基酸高度相似。结论病毒适应人类这个新宿主时为避免强大的免疫压力进行了适应性变异,可能更易于感染人类,但病毒抗原性尚未改变;毒株在邻近国家之间存在扩散现象。

我国人禽流感病毒存在较大地域差异

在近日由中国医师协会主办的“人禽流感防治及药物研发进展”专题研讨会上，与会专家指出，目前我国内地人禽流感病毒存在着较大的地域差异，南北方的人禽流感病毒有差异，即使在南方病毒也不尽相同。

我国人禽流感病毒变异不具备导致人传人的能力

我国发生的人禽流感病毒与越南病例相比．病毒的基因序列已发生了一定程度的变异。但并不具备导致人传人的能力。

H7N9人禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

目的采用RT-LAMP技术建立一种针对H7N9人禽流感病毒的特异、灵敏、快速、可视、简便的检测方法。方法根据H7N9人禽流感病毒HA基因的保守序列,利用Primer Explorer V4软件,设计一套针对HA基因的7个区域的5条特异性引物,优化反应体系与扩增条件,并验证其特异度与灵敏度。结果该方法能检测出H7N9亚型流感病毒,而对H1亚型、H3亚型、H5亚型、H6亚型、H9亚型流感病毒、乙型流感病毒、人副流感病毒、呼吸道合胞病毒、人冠状病毒、人偏肺病毒、人腺病毒、人博卡病毒均无扩增反应,其最低检出限为0.01 pg。另外,扩增反应只需要45 min即可判读结果,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化诊断。结论本研究建立的RT-LAMP检测方法具有高特异度、高灵敏度、快速简便、可视化判读结果等优势,适合在基层进行H7N9人禽流感病毒的快速检测,并可以应用于大流感疫情的准确筛查。

抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选

目的利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞，构建人源化Fv段单链抗体（scFv）噬菌体文库，并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA，逆转录成cDNA，以其为模板，利用家族特异性IgG基因的引物，扩增重链和轻链的可变区基因，并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后，重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中。将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1，酶切和PCR鉴定抗体库的重组率，通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容，用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体。结果构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库，库容为3．75×10^4；筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库。结论成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库，并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体，为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据。

特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定

目的从人源化噬菌体抗体库（human single fold scFv libraries I＋J）中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体，为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素（hemagglutitin，HA）蛋白和核蛋白（nucleoprotein，NP）为目的蛋白，对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选，经过3轮筛选富集后，随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养，ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆，并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达，ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性，PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段，并对阳性单链抗体分子测序和序列分析。结果经过3轮筛选，分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体，PCR扩增都得到了长为300、302和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段，测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同，而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同，而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段，可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础，也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息。

浙江省人禽流感病毒Zhejiang／16／2006株的基因特性分析

目的分析浙江省首例报道的人禽流感H5N1病毒株A／Zhejiang／16／2006的基因特性与系统进化关系。方法对A/zhejiang/16／2006病毒株的全序列8个基因片段作序列测定，并与国内外相关病毒株进行同源性与系统进化比较。结果A／Zhejiang／16／2006的HA序列，与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在11个氨基酸的差异，但这些差异并未影响到相关糖基化位点的稳定；在NA区，1997年以后的毒株均缺少第49～68位的20个氨基酸。总体上中国大陆近年H5N1毒株的8个基因片段与周边国家和地区毒株相比形成另一个分支，并与1996—1997年香港及广东的H5N1毒株之间存在较大差异，但有个别毒株的基因片段在系统进化树上远离当前的毒株而更接近1997年的病毒株。结论A／Zhejiang／16／2006与中国大陆近年的病毒株自成一个体系，与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在一定差异。

致死性人禽流感病毒的毒力变异与决定基定位

2003年在荷兰禽流感爆发期间,感染的89个人中,88例患有结膜炎,1例因肺炎死亡。本研究综述比较在致死性病例(FC)病毒与结膜炎病例(CC)病毒间的生物学差异,以探究病毒的病原性与发病机制。显著的差异在于FC病毒主要结合于下呼吸道的终末端,包括肺泡。攻击1型、2型肺细胞与肺泡巨噬细胞。用FC病毒接种小鼠,其肺病毒滴度比CC病毒高1 000倍,且播散到脾、肝、肾及脑。FC病毒的血凝素(HA)基因是病毒全身性播散的决定基,FC病毒在碱性多聚酶2(PB2)上627位的赖氨酸(E627K)是毒力的主要决定基。

深圳市首例人禽流感病例的实验室检测分析

目的对深圳市首例人禽流感病例进行实验室确诊,并研究其携带病毒关键基因的遗传特性。方法采用实时荧光RT-PCR方法检测高致病性禽流感病毒(H5N1)核酸,采用血凝抑制方法检测患者血清抗高致病性禽流感病毒的抗体滴度变化,利用MEGA3.1软件分析患者携带病毒HA、NA基因的进化关系。结果成功确认了深圳市首例人禽流感病例,患者携带病毒为H5N1高致病性禽流感病毒,HA、NA基因进化关系比较特殊。结论深圳地区禽鸟中可能携带高致病性禽流感病毒,具有潜在感染人类的可能。

人禽流感的研究现状及对我国的启示

人禽流感(human avian influenza)是由甲型流感病毒某些感染禽类亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病.随着人易感禽流感亚型不断增多及高致病性亚型的出现,导致该病近年来在全球特别是东南亚、中国等地区暴发性流行,对于该病的控制引起全球研究者的高度重视.文章就其研究现状进行综述,并结合我国实际分析该病防治中存在的问题并提出建议.

人禽流感疾病流行病学特征及其防治措施

最近几年来,因禽流感病毒感染而死亡的患者逐年增多,人禽流感在世界各地的流行已给许多国家和地区造成了不同程度的经济损失。为了更好地防止该病毒在全世界大规模流行,研究者开始重视对禽流感病原学特性、临床症状、传播途径、治疗方法及预防措施等进行研究与总结。我们针对人禽流感的研究进展及其预防与控制措施做简要概述。

预防禽流感 生活方式要健康

近日贵阳市确诊两例人感染高致病性禽流感病例个案，根据贵州省：卫生厅的通报，确诊患者为一男一女，女患者今年21岁，2月2日发病后转入贵州省人民医院；男患者今年31岁，2月3日发病后，因自购药品服用未见好转，转入贵阳市第二人民医院。两人均在10号除夕夜被确诊为人禽流感病毒阳性。据新华社报道，

2008-2010年广西边境地区流感和人禽流感监测结果分析

目的对广西壮族自治区(广西)8个边境市(县)所属的综合性医院不明原因肺炎、病原待查重症肺炎和流感样病例开展病原学监测,了解广西边境地区流感病毒优势株及其变化,探索广西边境地区流感流行规律,为科学防控边境地区流感和人禽流感提供依据。方法在边境地区医院设置监测点,开展相关病例监测,提取监测病例咽拭子标本病毒核酸,反转录合成cDNA,多重PCR扩增目的基因,电泳检测扩增产物;采用细胞培养法分离鉴定流感病毒;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群的静脉血34份,通过血凝抑制实验进行禽流感H5亚型抗体检测。结果 2008年广西边境地区分离到6株流感病毒,其中B型5株,H1N1亚型1株;2009年分离到33株流感病毒,其中B型17株,H3N2亚型8株,H1N1亚型2株,甲型H1N1 6株;2010年分离到流感毒株130株,其中B型55株,H3N2亚型49株,H1N1亚型1株,甲型H1N1 25株;2008-2010年检测不明原因肺炎、病原待查的重症肺炎标本9份,人禽流感核酸和多重呼吸道病毒核酸检测均为阴性;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群血样本34份,未检出H5N1亚型禽流感病毒抗体阳性的标本。结论 2008年和2009年广西边境地区的流感优势株为B型流感毒株,2010年为B型和H3N2亚型流感毒株;从有限的不明原因肺炎和病原待排查的重症肺炎病例标本中未检出禽流感病毒;禽流感H5亚型在职业暴露人群中未发现隐性感染。进一步加强对广西边境地区的流感和人禽流感病原学监测工作,对广西的流感和人禽流感的防控工作有重要意义。

H5N1高致病性人禽流感DNA疫苗表达质粒的构建及其免疫原性

目的构建H5N1高致病性人禽流感DNA疫苗表达质粒,并观察其免疫原性。方法分析H5N1人禽流感病毒HA基因的进化关系,人工合成人禽流感病毒HA基因(包含多数H5N1人禽流感病毒共有序列),构建含细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)和HA融合基因的真核表达质粒pVAX-CLHA及HA基因的真核表达质粒pVAX-HA,经酶切及测序鉴定正确后,转染293-T细胞,经RT-PCR法检测转染细胞中HA基因mRNA的转录水平,间接免疫荧光法(IFA)检测其表达;分别以质粒pVAX-CLHA及pVAX-HA免疫BALB/c小鼠,测定血清HI抗体效价。结果重组DNA疫苗表达质粒pVAX-CLHA和pVAX-HA经酶切及测序证明构建正确,转染的293-T细胞可检测到目的基因的转录及蛋白的表达;3次免疫后均能诱导BALB/c小鼠产生HI抗体,pVAX-CLHA诱导的HI抗体高于pVAX-HA。结论已成功构建了含H5N1HA及CTLA4融合基因的DNA疫苗表达质粒,其对小鼠具有良好的免疫效果,为H5N1高致病性人禽流感DNA疫苗的开发奠定了基础。

呼吸道病毒感染性疾病药物治疗进展

呼吸道病毒感染性疾病是临床最常见的疾病之一,其病原学复杂、病毒变异性大,易在人群中造成暴发流行.可引起呼吸道的感染病毒多达100～200余种,有RNA病毒和DNA病毒两种类型,其中最常见的致病病毒包括流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及冠状病毒等.博卡病毒、麻疹病毒、水痘-疱疹病毒和巨细胞病毒等感染相对少见.而近年来,不断出现一些不同种类以感染呼吸道为主的新型高致病性病毒,如严重急性呼吸综合征冠状病毒、甲型H5N1人禽流感病毒和2009年新甲型H1N1流感病毒等,加之社会人口老龄化、器官移植、免疫抑制剂在免疫相关疾病中的应用、人类获得性免疫缺陷综合征发病率增加和患病人数的累积等因素,使新发或再发呼吸道病毒感染的发病率不断增加,而且有些病毒感染所致的病死率极高,因此,这一类型疾病已经成为不容忽视的公共卫生问题.现将目前常用及正在研究的抗病毒药物综述如下.