宫颈癌与人端粒酶基因关系的研究

目的通过研究宫颈癌人端粒酶基因(Human telomerase RNA component gene,TERC gene)的表达情况,探讨宫颈癌与TERC基因异常表达的相关性,评估荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测TERC基因的表达对子宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)发展到宫颈癌的预测价值。方法采用FISH技术进行子宫颈上皮脱落细胞TERC基因的检测,实验对象81例,病理活检正常组20例,CIN1组28例,CIN2组12例,CIN3组9例,宫颈癌组12例。并进行宫颈癌与TERC基因相关性分析。结果在CIN1组、CIN2组、CIN3组和宫颈癌组中,TERC基因的表达均显著高于正常组(P<0.05);CIN1组和CIN2组之间无显著差异(P>0.05);CIN3组和宫颈癌组显著高于CIN1组(P<0.05);宫颈癌组显著高于CIN3组(P<0.05)。恶性程度越高,差异越显著(P<0.01)。结论 TERC基因异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关。FISH检测TERC基因的方法有助于宫颈病变的早期筛查。

人乳头瘤病毒、端粒酶基因及3号染色体数目与宫颈病变关系的探讨

目的探讨人端粒酶(TERC)基因的表达和人乳头瘤病毒(HPV)感染及3号染色体数目突变与宫颈病变的关系。方法 2008年6月至2009年2月昆明医学院第二附属医院妇科门诊接受诊治者共81例,其中健康组(病检结果正常)20例,子宫颈上皮非典型增生(CIN)1组28例,CIN2组12例,CIN3组9例,宫颈癌组12例。采用荧光原位杂交技术(FISH)进行子宫颈上皮脱落细胞TERC基因的检测,同时利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)技术检测这81例受试者的HPV感染情况。并进行宫颈癌与TERC基因和HPV的相关性分析。同时记录81例受试者3号染色体数目突变情况。结果在宫颈病变检测中TERC基因检测和HPV检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05),二者阳性率在CIN1组、CIN2组、CIN3组和宫颈癌组均明显高于健康组(P<0.05),CIN1组与CIN2组差异无统计学意义(P>0.05),CIN3组与宫颈癌组差异有统计学意义(P<0.05),恶性程度越高,二者阳性率越高。健康组和CIN1组3号染色体数目异常突变率为0%;CIN2组为16.7%;CIN3组为66.7%;宫颈癌组为100.0%,CIN3组和宫颈癌组阳性率明显高于健康组、CIN1组CIN2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在宫颈癌的发生、发展过程中TERC基因异常表达、高危HPV感染、3号染色体数目的突变可能起着重要的协同作用。

人端粒酶催化亚基基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体

为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTERT启动子在所检测的 4种端粒酶阳性的肿瘤细胞中具有明显的转录活性 ,平均为阳性对照的 4 4 3% ;而在端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞中则无明显的转录活性 .提示hTRET启动子的转录活性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中明显上调 。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义

目的：探讨人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义。方法选取2012年10月～2014年10月新疆医科大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者627例，先行液基细胞学检查，后行阴道镜检查并取活检，同时行人乳头状瘤病毒L1壳蛋白检测和人端粒酶RNA基因检测。分析不同病症间临床指标的变异情况。结果未见上皮病变或恶性改变（NILM）、意义不明的不典型鳞状细胞与不典型腺细胞（ASC-US）、不除外高度鳞状上皮内病变的的不典型鳞状细胞（ASC-H）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）、腺癌（AC），人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、42.9%、51.0%、80.6%、47.4%、5.9%、0.0%，差异有高度统计学意义（χ2=93.770，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在LSIL达到最高点，在AC降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、19.9%、36.3%、51.6%、94.7%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=279.564，P〈0.01），呈持续升高趋势，在SCC与AC达到最高点。依正常、炎症、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈癌顺序，人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、46.1%、80.6%、53.3%、25.0%、3.6%，差异有高度统计学意义（χ2=93.015，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在CINⅠ期达到最高点，在宫颈癌降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、26.4%、51.6%、93.3%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=269.582，P〈0.01），呈持续升高趋势，在CINⅢ期达到最高点。结论人乳头状瘤病毒L1壳蛋白联合人端粒酶RNA基因检测，在宫颈癌前病变中具有较高的指导价值。

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。

人端粒酶反转录酶基因诱导人永生化成骨细胞的生物学特性

目的:研究反转录病毒(hTERT)基因诱导的人永生化成骨细胞系Clone5的生物学特性,包括增殖能力、细胞周期和是否恶性变。方法:收集30～31代Clone5和6～7代人成骨细胞(hOB),绘制两种细胞的生长曲线并用流式细胞仪检测细胞周期特征,软琼脂集落实验和裸鼠致瘤实验检测Clone5是否恶性变。结果:由生长曲线计算出细胞倍增时间:hOB:190h;Clone5:62h;曲线显示Clone5的增殖能力明显增强;流式细胞仪检测发现,Clone5细胞周期中G1期细胞占53.46%,S期细胞占28.24%,凋亡率为0.76%,hOBG1期细胞占79.81%,S期细胞占19.76%,凋亡率为33.33%。和hOB相比,Clone5G1期细胞比例减少,S期比例增加,细胞的凋亡率显著降低;软琼脂集落实验未见细胞团形成,裸鼠接种不致瘤。结论:转导hTERT基因的Clone5增殖能力明显增强,凋亡率降低,且未发生恶性变,可用做组织工程的种子细胞和研究正常骨生理、生化的工具细胞。

人子宫颈组织中端粒酶人端粒酶RNA组分基因表达和人端粒酶蛋白基因编码催化蛋白亚基mRNA的相关性分析

目的探讨端粒酶、人端粒酶RNA组分(hTR)基因表达、分布及其与人端粒酶蛋白基因编码催化蛋白亚基(hTERT)基因表达的关联性。方法对51例宫颈活检组织进行端粒酶hTR、hTERT基因原位杂交检测。结果51例组织中28例hTR原位杂交阳性,32例hTERT阳性,表达随着病变的严重程度而增加。在高度鳞状上皮内病变(HSIL)/宫颈鳞状上皮癌(SCC)和低度鳞状上皮内病变(LSIL)/炎症组间差异有统计学意义,而且hTR和hTERT表达具有相关性(P<0.05)。结论在宫颈病变组织中,检测hTR基因表达情况可用于宫颈癌的早期诊断和鉴别。

RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究

目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。

重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因转染对人髓核细胞功能的影响

目的:研究重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-me-diated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)转染对体外培养人髓核细胞功能的影响。方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的人椎间盘髓核细胞,将构建好的rAAV-hTERT转染P2代体外单层培养的髓核细胞。用重组腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediatedenhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作为标记基因观察细胞转染效率,按感染复数(multiplicity ofinfection,MOI)103、104、105病毒基因组拷贝数/细胞(vector genomes/cell,v.g/cell)设组,流式细胞仪检测,筛选病毒转染的最佳MOI;设立rAAV-hTERT转染组、AAV空病毒转染组及空白细胞对照组,用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)方法检测rAAV-hTERT转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)及酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)检测髓核细胞合成Ⅱ型胶原及蛋白多糖能力的变化。结果:rAAV-EGFP转染细胞后第7天时,MOI为105v.g/cell组转染效率可达73.9%,明显高于MOI 103、104v.g/cell组(P<0.05);rAAV-hTERT转染组在转染后的第7、60、90、120天均可检测到hTERT基因的表达,而其他两组则无表达;转染rAAV-hTERT后120d之前,rAAV-hTERT转染组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原较其他两组均明显增高(P<0.05),而两对照组之间则始终无明显差异(P>0.05)。结论:rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染能有效延长髓核细胞分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖功能。

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装

【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。

人乳头瘤病毒L1及人端粒酶RNA基因在高危型人乳头瘤病毒阳性子宫颈脱落细胞中的表达

目的:分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)阳性患者子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒L1基因(L1)及人端粒酶RNA基因(h TERC)的表达情况。方法:自就诊于我院和温州医科大学二附院HPHPV阳性者中,选取90例宫颈组织正常者作为A组,选取90例宫颈上皮内瘤变者作为B组,选取90例宫颈癌者作为C组,对比分析三组间L1及h TERC表达情况。结果:三组间L1位点中Cp G-1、Cp G-2及Cp G-3位点的甲基化水平间存在显著差异,均以C组水平最低,以A组水平最高(P<0.05)。三组间h TERC阳性表达率存在显著差异,C组阳性表达率为83.33%最高,A组阳性表达率为26.67%最低(P<0.05)。结论:在HP-HPV阳性者中,以宫颈癌者L1位点中Cp G-1、Cp G-2及Cp G-3位点的甲基化水平及h TERC阳性表达率最高。

人端粒酶RNA组分基因检测在宫颈病变中的应用

目的:研究宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组分(hTERC)基因的表达,探讨其在宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状上皮细胞癌(SCC)诊断中的价值。方法:以2007年12月～2008年12月在中日友好医院行子宫颈癌筛查的138例妇女为研究对象,进行宫颈液基细胞学及组织病理学的检测,以组织病理学不同级别分组,荧光原位杂交方法检测其hTERC基因的表达。结果:病理学确诊为正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌例数分别为20、28、31、34、25例,宫颈脱落细胞hTERC基因的扩增在不同组织病理级别中存在差别:hTERC基因扩增随细胞学级别的升高而升高,随组织病理学级别的增加而升高。结论:hTERC基因的扩增与宫颈细胞学和组织病理学级别密切相关,其扩增率随宫颈病变程度的加重而增加;检测hTERC基因的扩增,可为判断是否发展为宫颈高度病变提供依据。

实时PCR检测单细胞中人端粒酶hTERT基因mRNA的表达

人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与端粒酶活性密切相关,而多项研究表明,端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达的差异,前期已通过慢病毒转染,将携带hTERT基因的表达质粒载体LV4-pGLV-EF1a-EGFP-hTERT转入卵巢癌SKOV3细胞系,构建了稳定表达hTERT蛋白的细胞株(SKOV3 h),同时设空载体感染组(SKOV3 b)和未处理组(SKOV3)为对照组,采用流式细胞术,分选不同数量的细胞进行实时PCR.结果显示,初步摸索的细胞数在50个以内,且随着细胞数目的增多,Ct值逐渐增大(P<0.05);SKOV3 h组hTERT基因mRNA表达最高,SKOV3 b组次之,SKOV3组表达最低(P<0.05).提示SKOV3细胞转导hTERT基因后可促进该基因的mRNA表达.同时用该法检测了单个卵裂球内hTERT基因的表达,为利用单细胞单基因遗传学诊断研究及肿瘤学研究提供基础.

胃复方对人胃癌BGC-823细胞移植瘤裸鼠作用及其对c-Myc、人端粒酶逆转录酶基因表达的影响

目的:观察胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠的抑瘤作用及c-Myc、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响,评估胃复方作用及其可能的作用机制。方法:建立人胃癌BGC-823裸鼠模型;将成功建立的裸鼠胃癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组,连续给药4周。每7天记录肿瘤长径、短径,计算瘤体体积并绘制肿瘤生长曲线图;给药4周后处死所有荷瘤鼠,剥离皮下移植瘤,称瘤重、计算抑瘤率;免疫组织化学法检测瘤体组织c-Myc、hTERT蛋白表达。结果:1)胃复方对人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤具有明显抑制作用,各剂量间有量效关系。其中胃复方低剂量组、胃复方高剂量组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合中药组的抑瘤率分别为21.06%、45.89%、30.65%、59.42%。氟尿嘧啶联合中药组效果最好。2)瘤重显示与模型组比较,各药物组瘤重均有不同程度的减轻,差异有统计学意义(P<0.05);其中氟尿嘧啶联合中药组降低明显。3)肿瘤生长曲线图显示与模型组比较,各药物组瘤体积均有一定程度缩小,差异有统计学意义(P<0.05)。4)与模型组比较,药物组均能下调c-Myc、hTERT蛋白表达量,差异有统计学意义(P<0.05),其中氟尿嘧啶联合中药组下降最明显。结论:胃复方能够抑制人胃癌BGC-823细胞BALB/c-nu裸鼠皮下移植瘤生长,可能与下调c-Myc、hTERT蛋白表达有关,并且与氟尿嘧啶联合用药有增效作用。

人端粒酶反转录酶基因修饰骨髓间充质干细胞调控肝细胞增殖和凋亡

背景:研究表明人端粒酶反转录酶基因的导入可以使骨髓间充质干细胞的生命周期得到显著延长,使其能够继续保持多向分化潜能。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因修饰骨髓间充质干细胞对肝细胞增殖和凋亡的影响。方法:采取直接贴壁法,分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,利用脂质体转染法,将编码hT ERT基因的真核表达质粒pC Ineo-hT ERT导入骨髓间充质干细胞。将hT ERT基因转染骨髓间充质干细胞与肝细胞按1:1共培养(观察共培养组),同时设未转染骨髓间充质干细胞与肝细胞按1:1共培养组(对照共培养组)和肝细胞单独培养组,采用MTT比色法和免疫荧光染色法观察骨髓间充质干细胞对肝细胞增殖和凋亡的影响。结果与结论:观察共培养组的肝细胞增殖率明显高于对照共培养组和肝细胞单独培养组,差异有显著性意义(P<0.05);观察共培养组的肝细胞存活率明显高于肝细胞单独培养组,差异有显著性意义(P<0.05)。结果表明人端粒酶反转录酶基因修饰的骨髓间充质干细胞可以抑制肝细胞的凋亡,并促进其增殖,具有改善肝细胞功能的作用。

转移人端粒酶逆转录酶基因的实验研究

目的 转移人端粒酶逆转录酶基因 (hTERT基因 ) ,建立其转移体系。方法 用脂质体转染的方法将逆转录病毒载体PLNC hTERT转入 ψ 2细胞 ,用产病毒的 ψ 2细胞克隆培养上清重复感染PA317细胞 ,建立产毒PA317/hTERT细胞 ;通过感染内皮细胞检测基因转移效果。结果 ψ 2细胞培养上清重复感染 ,使PA317细胞所产病毒滴度提高 2 0倍 ,得到高滴度的PA317/hTERT包装细胞系。用该细胞系产生的病毒上清感染内皮细胞成功。

人端粒酶逆转录酶基因小片段干扰RNA慢病毒表达载体的构建及其在子宫颈癌caski细胞的表达

目的构建及鉴定携带沉默人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)慢病毒(lentivirus,LV)表达载体,并观察其在子宫颈癌caski细胞的表达情况。方法以Designer3.0(Genepharma)软件设计靶向h TERT基因特异性的小片段RNA(sh RNA)干扰序列,将h TERT-sh RNA基因片段插入重组慢病毒p GLV3/H1/GFP+Puro,构建慢病毒表达质粒LV3-sh RNA-h TERT,酶切、DNA测序验证h TERT片段准确性。LV3-sh RNA-h TERT与包装质粒共转染293T细胞,浓缩上清液并测定病毒滴度获得重组慢病毒后感染caski细胞。将细胞分为空白对照组(未感染病毒的caski细胞)、阴性对照组(感染空载病毒LV3-sh NC的caski细胞)和h TERT干扰组(感染携带LV3-shh TERT慢病毒的caski细胞)。绿色荧光蛋白(GFP)的表达判断转染结果并估计转染效率,流式细胞术仪检测病毒感染率,实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测转染后基因h TERT m RNA的表达情况,CCK-8法检测caski细胞增殖情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功;成功包装成高滴度的慢病毒,且能有效感染子宫颈癌caski细胞。荧光定量PCR检测结果证实构建的h TERT-小片段干扰RNA慢病毒表达载体可显著抑制h TERT基因的表达。h TERT干扰组细胞增殖受抑制,生长速度较阴性对照组生长缓慢。结论成功构建了携带h TERT-sh RNA慢病毒表达载体LV3-sh RNA-h TERT,并稳定转染子宫颈癌caski细胞。该载体能够有效抑制h TERT的表达,使子宫颈癌caski细胞增殖缓慢,为进一步探讨h TERT基因在子宫颈癌的发病机制和体外基因干预治疗奠定基础。

联用血清糖类抗原19-9和人端粒酶RNA基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的效果研讨

目的 :探讨联用血清糖类抗原19-9(CA19-9)和人端粒酶RNA(hT ERC)基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的效果。方法 :将2014年1月至2017年3月期间平凉市第三人民医院收治的283例宫颈上皮内瘤变患者作为研究对象。对这些患者均进行血清CA19-9和hT ERC基因检测。比较单用血清CA19-9检测法、hT ERC基因检测法及联用血清CA19-9和hT ERC基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度。结果:检测的结果显示,与单用血清CA19-9检测法、hT ERC基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度相比,联用血清CA19-9和hT ERC基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度较高(P<0.05)。结论 :联用血清CA19-9和hT ERC基因检测法诊断宫颈上皮内瘤变的效果较为理想。

人端粒酶逆转录酶核心启动子调控的人TRAIL蛋白在人卵巢癌细胞中的表达

目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。采用脂质体介导的方法将hTERT调控的TRAIL基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;应用免疫细胞化学法、蛋白质印迹分析、流式细胞术(FCM)结合间接免疫荧光、RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达。结果:经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确。转染细胞中的TRAIL表达明显高于对照组细胞。结论:成功地构建了hTRET基因核心启动子调控的TRAIL基因真核表达载体,并在人卵巢癌细胞系SKOV3中得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。

人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸联合顺铂对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸(ASODN)联合顺铂(CDDP)对HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用20μmol/L ASODN和正义寡核苷酸(SODN)封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,作用48h后加用2.5μmol/L,5μmol/L CDDP,继续作用于HL-60细胞48h;台盼蓝拒染法检测各组细胞的增殖抑制情况,姬姆萨染色后倒置显微镜观察凋亡细胞形态;分别采用流式细胞仪、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:hTERT ASODN联合CDDP组HL-60细胞的增殖明显抑制,与hTERT SODN联合CDDP组、单用CDDP组比较差异有统计学意义(P<0.05);hTERT ASODN联合5μmol/L CDDP与hTERT ASODN联合2.5μmol/L CDDP比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP与单用CDDP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。姬姆萨染色后,hTERT ASODN联合CDDP组可见大量凋亡小体,而单用CDDP组仅见少量凋亡小体。流式结果与TUNEL结果一致:hTERT ASODN联合CDDP组对HL-60细胞具有明显诱导凋亡作用,同其余各组比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP组与单用CDDP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:hTERT ASODN联合低浓度CDDP能明显抑制HL-60细胞的增殖,并提高细胞凋亡率。