人类β-防御素2在口腔扁平苔藓病损中表达的研究

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者病损中的人类β-防御素2(hBD-2)的表达,以分析hBD-2在OLP发病机制与上皮抗感染免疫中的作用。方法采用免疫组织化学技术(IHC)和反转录聚合酶链式技术(RT-PCR),检测25例OLP病损组织、7例对照组织中hBD-2多肽的表达,并进行分析。结果 hBD-2在所有样本中均出现了阳性胞浆染色,健康口腔黏膜组中hBD-2蛋白为弱阳性染色,与呈强阳性染色的OLP组差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,所有样本均出现了hBD-2的cDNA电泳条带,在健康口腔黏膜组中呈微弱表达,在OLP组织中表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健康口腔黏膜组织也有少量hBD-2表达,提示其作为机体先天性免疫的组成部分,在维持口腔黏膜健康上具有一定作用。在OLP的病理过程中hBD-2可能呈炎性诱导上调表达而参与了OLP的免疫发病过程。

白色假丝酵母菌感染对口腔上皮细胞人类β-防御素2的表达

目的探讨白色假丝酵母菌对人类β-防御素2(HBD-2)在口腔上皮细胞中表达的影响,为口腔白色假丝酵母菌感染的治疗提供参考依据。方法试验分成3组,分别为孢子、菌丝及灭活的白色假丝酵母菌组;将KB细胞与孢子相、菌丝相及灭活的白色假丝酵母菌培养3、6、12、24h后,采用ELISA试验检测各组KB细胞培养液中HBD-2的表达,重复检测3次,采用SPSS18.0软件进行分析。结果随着时间的延长,黏附KB细胞的白色假丝酵母菌的总数由(1.83±0.64)CFU/cm2下降至(0.18±0.09)CFU/cm2,但活力未发生改变,菌丝转换率由(28.16±5.14)%增高至(80.18±10.14)%;感染24h后孢子相、菌丝相及灭活的白色假丝酵母菌组HBD-2分别为(60.08±6.47)pg/ml、(81.52±8.20)pg/ml、(64.81±7.35)pg/ml,均高于对照组(P<0.05)。结论白色假丝酵母菌在特定时间内可使口腔上皮细胞上调HBD-2表达,菌丝进一步侵袭后,HBD-2的表达降低。

白芍总苷联合曲安奈德治疗口腔扁平苔藓患者的疗效及对血清IL-17、人类β-防御素-2水平的影响

目的观察白芍总苷胶囊治疗口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者的疗效及对血清白介素-17(IL-17)、人类β-防御素-2(human beta-defensin-2,HBD-2)水平的影响。方法将60例符合纳入标准的口腔扁平苔藓患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组局部注射曲安奈德,治疗组在此基础上口服白芍总苷胶囊,同时纳入30例健康对照组。治疗1个月后评价其临床疗效及受检者血清IL-17、HBD-2水平。结果两组临床疗效比较,治疗组总有效率(93%)高于对照组(76%)(P<0.05)。OLP患者组血清IL-17、HBD-2水平较健康对照组升高(P<0.05)。治疗组和对照组患者治疗后血清IL-17、HBD-2水平均低于同组治疗前(P<0.05);治疗后,治疗组患者血清IL-17水平低于对照组(P<0.05),HBP-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合曲安奈德治疗口腔扁平苔藓有较好的疗效,其作用与下调血清IL-17、HBD-2有关。

牙周基础治疗前后慢性牙周炎患者龈沟液中β-防御素2及白细胞介素-1β表达水平的变化研究

目的:探讨慢性牙周炎患者牙周基础治疗前、后龈沟液(GCF)中β-防御素2(HBD-2)及其与白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平的关系。方法:选择慢性牙周炎患者10例为慢性牙周炎组,按纳入标准选取20位点分别在牙周基础治疗前及治疗后1个月分别收集GCF并记录临床指标。以牙周健康者12例的24位点GCF为健康对照组。GCF采集后记录采集点出血指数(BI)和探诊深度(PD)。采用酶联免疫吸附法测定GCF中HBD-2及IL-1β含量。结果:健康对照组GCF中HBD-2表达水平高于慢性牙周炎组(P<0.05);慢性牙周炎组牙周基础治疗前、后HBD-2表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。牙周基础治疗前,慢性牙周炎组IL-1β的表达水平高于健康对照组(P<0.001),慢性牙周炎组牙周基础治疗后IL-1β表达水平低于治疗前。牙周基础治疗后,BI、PD均较治疗前小(P<0.001)。与HBD-2、IL-1β表达水平无关(P>0.05)。结论:慢性牙周炎患者牙周基础治疗后GCF中IL-1β的表达水平较治疗前低,GCF中HBD-2在牙周基础治疗前、后表达水平无差异;与GCF中的HBD-2、IL-1β表达水平无关。

重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

目的 探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法 利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移质粒 p Ac GHL T- A的多克隆位点中 ,构建成重组转移载体 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His。用该重组转移载体和多角体病毒 Ac NPV DNA共转染草地夜蛾细胞 (Sf2 1) ,二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒 r Ac NPV/h BD- 2 /His。用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率。采用 Western印迹法通过特异性抗 - His抗体检测细胞及上清 h BD- 2 /His的表达。结果 目的基因 h BD- 2 /His正确地插入 BEVS系统的转移载体。经 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His和 Ac NPV DNA共转染的 Sf2 1细胞有较高滴度的重组病毒 r Ac NPVh BD- 2 /his存在。被共转染的 Sf2 1细胞的可溶性蛋白 ,在相对分子质量约 4 7.5× 10 3处有强反应条带显示 ,其大小与根据测序结果所推测的 h BD- 2融合肽相对分子质量接近。培养上清分别在相对分子质量约 4 0× 10 3和 30× 10 3处有强反应条带显示。结论 可利用 BEVS系统作为高效表达重组 h BD- 2的生物反应器。