2007-2016年广州地区抗-HIV阳性无偿献血者人群特征分析

目的调查分析2007-2016年广州地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者人群特征,探讨新形势下采供血机构保障血液安全的措施。方法采用ELISA试剂对3 113 343份无偿献血者标本进行抗-HIV筛查,2次筛查阳性血液标本送广州市CDC或广州金域公司进行抗-HIV确认,对抗-HIV确认阳性献血者进行流行病学调查。结果 3 113 343份标本,抗-HIV确证阳性714例,总阳性率为22.93/10万。10年来,抗-HIV阳性率总体呈上升趋势(χ2=27.43,P<0.01);男性献血者抗-HIV阳性率(31.94/10万)高于女性(5.63/10万),呈上升趋势(P<0.01)。不同年龄组之间的抗-HIV阳性率比较有统计学差异(P<0.01),阳性率由高到低是25-34岁组、35-44岁组、18-24岁组、>45岁组,18-24岁组抗-HIV阳性率呈上升趋势(P<0.01)。个体献血者抗-HIV阳性率(31.02/10万)高于团体献血者(16.14/10万)(P<0.01),个体献血者抗-HIV阳性率呈上升趋势(P<0.05)。抗-HIV确认阳性献血者中异性性传播占60.22%(430/714),同性性传播的占26.19%(187/714),既往已确认感染占11.34%(81/714)。结论广州地区无偿献血人群的抗-HIV阳性率呈现逐年上升趋势,特别是18-24岁的男性献血人群增长较明显;男性献血人群抗-HIV阳性率明显高于女性献血人群,个体献血人群的抗-HIV阳性率明显高于团体献血人群;HIV感染途径主要通过异性性传播,其次为同性性传播。为进一步降低输血传播HIV风险,应加大无偿献血及艾滋病预防知识的宣传力度,坚持从低危人群中招募献血者,发展团体献血;同时加强街头固定献血点的献血前健康征询,排除以体检为目的的高危险献血者献血。

HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。

3例HIV_(1+2)抗体阳性检测结果报告

本文采用两种不同厂商生产的"批批检"贴签的HIV(1+2)型抗体酶联免疫诊断试剂盒(双抗原夹心法),对我院内科2003年1月～12月间的住院发热症状患者201例进行HIV抗体检测,发现3例阳性.按要求将标本上送福建省防疫站的艾滋病病毒(human immunodefi ciency virus,HIV)确认实验室,终检结果蛋白印迹实验(western blot,WB)确认3例HIV抗体均为阳性,现将结果报道如下.

一种人类免疫缺陷病毒抗体(HIV 1/2)口腔黏膜渗出液检测试剂盒(免疫层析法)的质量评价

目的对广州万孚公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1/2)口腔黏膜渗出液检测试剂盒(免疫层析法),检测不同来源样本的能力进行质量评价。方法分别采集1 183名受检者[包括514名HIV-1感染者、86名乙型肝炎病毒(HBV)感染者、33名丙型肝炎病毒(HCV)感染者、20名梅毒感染者,10名类风湿病人、520名正常人]的血浆样品和口腔黏膜渗出液样品,以广州万孚公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1/2)口腔黏膜渗出液检测试剂盒(免疫层析法)作为考核试剂,以北京玛诺生物制药有限公司的人类免疫缺陷病毒抗体口腔黏膜渗出液诊断试剂盒(胶体金法)和上海科华生物工程股份有限公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)分别作为参比试剂1和参比试剂2。用考核试剂和参比试剂1平行检测口腔黏膜渗出液样品,对来自同一受试者的血浆样本使用参比试剂2进行检测,采用新加坡MP生物医学亚太私人有限公司(MP Biomedicals Asia Pa-cific Pte.Ltd)的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体免疫印迹试剂盒作为第三方试剂进行复核。评价考核试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率。结果考核试剂和参比试剂1的阳性符合率为99.61%,阴性符合率为100.00%,总符合率为99.83%;与参比试剂2的阳性符合率为98.06%,阴性符合率为100.00%,总符合率均为99.15%。广州万孚公司人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1/2)口腔黏膜渗出液检测试剂盒(免疫层析法)对口腔黏膜渗出液样本的敏感性为98.25%(95%CI:97.12%～99.38%),特异性为100%(95%CI:99.91%～100%)。结论考核试剂在口腔黏膜渗出液样本检测HIV抗体的敏感性和特异性较好。

探讨 81 例临床分型 HIV 感染者血液样本 HIV1-RNA 载量、HIV1-P24、Anti-HIV 及 CD4+T 细胞计数检测结果的相关性

通过检测临床已知病例血样 HIV 抗原抗体含量、HIV1-RNA 及 CD4+T 细胞计数,了解 HIV1-P24 抗原及抗 HIV 抗体的含量与 HIV/AIDS 病程进展的关系,寻找监视和预测 HIV 感染者病程发展及疗效观察的敏感的免疫学指标。方法:收集81 例不同感染阶段病人血清或血浆分别检测 HIV1-P24、Anti-HIV 含量、HIV(s/co)及 CD4+淋巴细胞的数量和 HIV1-RNA 病毒载量,用统计学方法比较它们的相关性,评价它们在 HIV 感染者/AIDS 病程进展中的价值。结果:对 81 例检测结果进行统计分析:HIV1-RNA 病毒载量与 HIV1-P24 之间 U=4.02,P<0.01,数值相差非常显著;HIV1-RNA 阳性率为 0.6667,HIV1-P24阳性率为 0.1604,二者阴性/阳性符合率为 0.5185,阳性预断值均为 1.0;随着病程的发展 HIV1-RNA 病毒载量、HIV1-P24 检测结果呈现不同幅度上升趋势,而不同感染阶段相应 CD4+T 细胞计数结果呈现不同程度的下降趋势;Anti-HIV 和 HIV(s/co)具有良好的一致性,但 HIV(s/co)变化与病程长短无相关性,对病程的进展整体表现为不敏感;81 例 HIV1-P24 与 Anti-HIV检测结果:急性无症状感染期(A)HIV1-P24(18 例阴性)/Anti-HIV(18 例阳性) ;有症状感染期(B)HIV1-P24(29 例阴性,1 例阳性)/Anti-HIV(30 例阳性) ;艾滋病期(C)HIV1-P24(19 例阴性,14 例阳性)/Anti-HIV(33 例阳性) ;HIV1-P24与 Anti-HIV 检测结果同时阳性共有 15 例(其中 8 例 Cut-off:1.7-3.86;7 例 Cut-off:10.54-44.25) ,有 53.33%HIV1-P24表现为低反应性 (弱阳性) 。 结论: 用罗氏电化学发光法检测 HIV1-P24 及 Anti-HIV 的含量, 其具有结果快速准确和高灵敏性,更适合临床 HIV 感染的初筛和病程监测的需要。

无偿献血者抗-HIV抗体检测结果报告分析

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒引起,以侵犯CD4淋巴细胞为主,引起细胞免疫功能缺陷为特征的传染病.艾滋病病毒主要通过性传播、母婴传播、血液传播,为此我国卫生部规定必须严格筛查献血者的抗-HIV抗体,杜绝输血传播艾滋病.笔者对2007～2009年本站68172份无偿献血者的抗-HIV检测结果报告如下：

电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的评价

目的评价Roche电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的检测性能。方法收集包括健康献血员、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者、丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性和高危人群在内的血清样本1 327例。购买美国BBI公司的7套HIV血清转换盘共计51份血清样本。采用Roche cobas e411(架式系统)电化学全自动免疫分析仪和相应的检测试剂、校准品和质控品以及检测参数进行测定。以Roche Elecsys HIV Combi试剂盒为评估试剂,以生物梅里埃Vironostika Uni-FormⅡplus O HIV抗体试剂盒为参比试剂。定性检测血清HIV p24抗原和HIV1/2抗体并评价检测方法分析性能、结果一致性和血清转化灵敏度。结果 Roche Elecsys HIV Combi试剂盒批内和天间不精密度良好,符合临床使用要求。血清样本检测结果和参比试剂检测结果一致性完全符合。评估试剂的血清转化灵敏度比参比试剂平均提前了5.1 d。结论 Roche Elecsys HIV Combi试剂盒具有良好的精密度和血清转换灵敏度,有利于筛查HIV早期感染,能为临床HIV早期诊断、随访监测提供有效的实验室诊断依据。

HIV抗原抗体光激化学发光法联合检测试剂的评价

目的评价北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIV Ag/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)与已上市HIV抗原抗体检测试剂盒的一致性以及血清转化灵敏度。方法收集363例血清样本,包括HIV患者样本、健康人员样本、以及类风湿因子样本、孕妇样本、ANA阳性样本、乙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎患者等干扰样本;另外有10套HIV血清转换盘共120份血清样本。检测采用LiCA 500自动光激化学发光检测仪和相应的检测试剂、校准品和质控品以及检测参数,定性检测血清HIV1 p24抗原和HIV1/2抗体并评价与参比试剂结果一致性和血清转化灵敏度。结果北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIVAg/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)血清样本检测结果和参比试剂检测结果具有较好一致性;评估试剂的血清转化灵敏度同参比试剂相当。结论北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIVAg/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)与已上市同品种试剂盒检测结果具有一致性,血清转换灵敏度较高,有利于筛查HIV早期感染,为临床HIV早期诊断提供有效的实验室诊断依据。

抗病毒治疗中人类免疫缺陷病毒-1单纯及合并丙型肝炎病毒感染相关细胞因子水平的变化

由于HIV-1和HCV有共同的传播途径,HIV-1/HCV合并感染引起的慢性肝脏疾病也成为HIV-1感染者死亡的主要原因之一.既往研究发现,HCV是通过激发持续免疫介导的反应引起肝脏损害.而HIV-1也可直接侵犯人体的免疫系统.当两种病毒合并感染时,发生肝硬化的危险增加,肝脏纤维化的进程明显加速,快者可从最初感染HCV起6～10年即发展至肝硬化[1].既往研究发现,细胞因子可能参与HIV活化,在调节免疫应答和维持免疫平衡方面具有重要作用[2-3].既往很多研究已证实HIV感染导致细胞因子失调,Th1细胞因子IL-2和γ干扰素普遍减少,而Th2细胞因子IL-4、IL-10、促炎细胞因子和TNF是增加的.而Attar等[4]也发现丙型肝炎患者病情向肝硬化、腹水等进展的过程中伴随着细胞因子的变化.但目前,对HIV 1单纯感染、HIV 1/HCV合并感染和健康人群血浆中有关细胞因子变化的比较并不多,因此展开此方面的研究很有必要.

不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型(HIV2)可疑感染者,初步评价HIV2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV1/2免疫印迹(WB)试验检测出现HIV2指示带的16份受检者的全血样品,进行HIV2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV1/2ELISA初筛复检,其中阳性样品再分别用HIV1/2线性免疫试验(LIA)和HIV2WB检测。外周血单核细胞(PBMC)中的前病毒DNA用HIV2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV1/2ELISA筛查均为HIV抗体阳性;用HIV1/2LIA检测,全部为HIV1抗体阳性,15份为HIV2抗体阴性、1份不确定;用HIV2WB检测,有3份为HIV2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上,可以排除窗口期感染,上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV2抗体阴性。此外,用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV1而非HIV2感染,HIV1/2LIA的抗体检测结果与HIV2核酸检测结果基本相符,而HIV2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。

中国92例HIV／AIDS患者HIV-1gp412F5和4E10中和抗体表位变异研究

目的探讨92例HIV／AIDS患者HIV-1病毒近膜端（membrane proximal external region，MPER）中和抗体2F5和4E10保守表位ELDKWA、NWFDIT氨基酸变异特点，为中国HIV／AIDS患者免疫治疗以及疫苗设计提供数据。方法Nest-PCR扩增HIV-1env区gp41段基因，核酸序列测定，翻译为氨基酸与HIV-1Sequence Database HXBⅡ参考株中和抗体表位数据比对，分析2F5、4E10中和表位氨基酸变异情况。结果92例HIV／MDS患者HIV-1外膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10保守表位氨基酸均存在突变；2F5中和抗体表位主要有E662A（14．1％）、K665S（17．4％）、A667K（16．3％）突变；4E10中和抗体表位主要有N671S（13．0％）、D674S（3．3％）、T676S（16．3％）突变；CRF_B’C亚型与B’亚型的2F5和4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义（P〈0．05）；CRF—B’C与CRF01_AE亚型2F5表位突变差异具有统计学意义（P〈0．05）；B’亚型缓慢进展者、HIV感染者和MDS患者的4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论92例HIV／AIDS患者HIV-1包膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10中和表位氨基酸存在突变，且变异多样化；不同亚型中和抗体保守表位氨基酸位点变异有差异；B’亚型4E10中和抗体表位变异可能与疾病进展有一定联系。

抗人CD4 D1D2结构域多克隆抗体对HIV-1的抑制作用

目的研究抗人CD4DID2结构域多克隆抗体对HIV-1的抑制作用。方法经overlappingPCR构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3．1-mhD1D2m和pcDNA3．1-mhD2m，利用pcDNA3．1／V5-His—TOPO质粒载体的通用引物双向测序，测序结果用vectorNTI8．0软件与预期序列作比对，并通过假病毒感染实验检测其介导病毒感染能力，实验数据采用SPSS11．5统计学软件进行χ^2检验。pcDNA3．1-mhDID2m和pcD—NA3．1-mhD2m经DNA免疫BALB／c小鼠，所获多抗血清经假病毒中和实验检测其抗HIV-1中和能力，经FACS检测其与CD4抗原结合能力。结果所构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3．1-mhD1D2m能够介导HIV-1假病毒感染。质粒pcDNA3．1-mhD1D2m免疫小鼠8周后所获得的多抗血清稀释100倍后，对HIV-1毒株抑制率为76％～95％。质粒pcDNA3．1-mhD2m免疫小鼠所获得的多抗血清则无明显的中和作用。FACS检测显示mhD1D2m多抗血清与TZM-b1细胞表面的CD4可以特异性结合。结论抗人CD4D1D2结构域多克隆抗体对H1V-1具有较强的抑制作用，为AIDS治疗和疫苗研发提供实验依据。

人源抗HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点Fab单克隆抗体基因的获得

目的 筛选人源抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因。方法 根据HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点的氨基酸序列合成 2 3肽 ,并以此为固相抗原从HIV 1噬菌体Fab抗体库筛选阳性克隆 ,并进行鉴定及序列测定。结果 获得了 1株抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点的人源Fab抗体克隆 ,具有较高的亲和力、特异性和抑制率 ,序列测定及分析显示该抗体属IgGⅠ亚类 ,κ型 ,重、轻链可变区分别属VhⅢ和VκⅢ基因家族。结论 成功地获得了人源抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因。

增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用

目的对增强化学发光法检测感染性标志物进行临床应用评价。方法采用美国强生增强化学发光技术检测系统及配套试剂对乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)进行初筛检测,阳性标本立即重新复查一次,仍为阳性者判断为初筛试验阳性。对于HBsAg、抗-HCV初筛阳性标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)进行确证;抗-HIV初筛阳性者送HIV确诊实验室进行确诊、抗-TP初筛阳性者采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。结果增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%,阳性检出率均高于各检测项目的复检确认方法的阳性率。41123例术前检查患者血清标本中,应用增强化学发光法共筛查出2399例HBsAg阳性标本、308例抗-HCV阳性标本、19例抗-HIV阳性标本、1123例抗-TP阳性标本。筛查的阳性标本经各项目的复检确认方法进行复检确认后,共确认出2325例HBsAg阳性标本、299例抗-HCV阳性标本、17例抗-HIV为阳性标本、1054例抗-TP阳性标本。应用增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时,经复检后各检测项目均呈现100%的阳性。结论增强化学发光法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测特异性大于99%,检测阳性预测值完全能够满足临床诊疗需求,检测过程和工作效率都优于常规免疫标记技术,值得临床推广应用。