中耳胆脂瘤中DAPI核染色、FOXO3和Bim的表达和意义

目的检测中耳胆脂瘤中人类叉头框O3(forkhead box O3,FOXO3)、唯BH3域蛋白(Bcl-2 interacting mediator of cell death,Bim)的表达和相关性,以及Bim和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色的相关性,探讨FOXO3和Bim在中耳胆脂瘤中的作用。方法应用免疫组化染色(immunohistochemistry)检测30例中耳胆脂瘤标本及15例正常皮肤中FOXO3、Bim的表达和定位;通过免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测这些标本中Bim和DAPI的染色情况;应用Western blot检测以上标本FOXO3、Bim及内参的表达情况;分析Bim和DAPI核染色的相关性、Bim和FOXO3表达的相关性。结果①免疫组化染色显示,FOXO3在胆脂瘤和正常皮肤的细胞核及胞质均有着色,在胆脂瘤细胞核中FOXO3的阳性样本率(36.7%,11/30)明显低于正常皮肤(86.7%,13/15)(χ^(2)=10.04,P<0.05);胆脂瘤细胞胞质中FOXO3的阳性率(30.0%,10/30)也显明低于正常皮肤(80.0%,12/15)(χ^(2)=8.72,P<0.05)。Bim主要定位于胆脂瘤和正常皮肤的细胞质,其在胆脂瘤中的阳性率(53.3%,16/30)明显低于正常皮肤组织(93.3%,14/15)(χ^(2)=7.20,P<0.05)。②免疫荧光染色显示DAPI和Bim在胆脂瘤的荧光值(分别为25.37±3.67和35.16±4.21)均弱于正常皮肤(分别为91.45±10.14和82.51±7.34),差异有统计学意义(t=1.93,P<0.05;t=1.71,P<0.05)。③Western blot检测显示胆脂瘤中FOXO3和Bim的表达均明显低于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.01,P<0.05;t=1.99,P<0.05)。④在中耳胆脂瘤标本中,FOXO3和Bim呈正相关(r=0.362,P<0.05);Bim和DAPI呈显著正相关(r=0.501,P<0.01)。结论FOXO3/Bim信号通路在中耳胆脂瘤的形成过程中发挥了作用,且该作用与抗凋亡有关。

miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制。方法成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细胞转染无意义序列),细胞转染后倒置荧光显微镜下观察miR-182 mimics的转染效率,检测各组miR-182 mRNA表达水平及增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为改变,同时检测PI3K/AKT/FOXO3a信号通路相关蛋白(PI3K、p-AKT、FOXO3a)表达水平。结果miR-182 mimics组miR-182 mRNA表达水平明显高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05);miR-182 mimics组细胞转染后24、48及72 h时的细胞增殖率及迁移、侵袭能力明显高于空白对照组及阴性对照组(P<0.05),而细胞转染后24、48及72 h时的细胞凋亡率明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05);miR-182 mimics组胶质瘤干细胞转染miR-182 mimics后PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),FOXO3a蛋白表达水平明显低于空白对照组、阴性对照组(P<0.01),而空白对照组与阴性对照组PI3K、p-AKT、FOXO3a蛋白表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。结论miR-182可能通过激活活化PI3K/AKT/FOXO3a信号通路而起到增强GSCs增殖、迁移及侵袭能力和抑制细胞凋亡的作用,可能作为临床治疗胶质瘤的新靶点。

胶质瘤患者的预后、病理特征及潜在靶基因与miR-182表达的相关性探究

目的:研究胶质瘤中miR-182表达与病理特征、预后的相关性并探究miR-182的潜在靶基因。方法:选择2014年1月至2016年12月期间在我院接受手术切除的胶质瘤患者,收集胶质瘤组织和瘤旁组织并检测miR-182、人类叉头框O蛋白3a(Foxo3a)、p21、p27、Bim的表达量,随访胶质瘤患者的总生存时间和无进展生存时间。结果:与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中miR-182的表达量明显增加且WHO分级Ⅲ-Ⅳ级、Ki-67高表达的胶质瘤中miR-182的表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ级、Ki-67低表达的胶质瘤(P<0.05);与miR-182低表达胶质瘤患者比较,miR-182高表达胶质瘤患者的总生存时间和无进展生存时间均明显缩短(P<0.05);Foxo3a基因mRNA的3’UTR中有miR-182的结合位点,胶质瘤组织中Foxo3a、p21、p27、Bim的表达水平明显低于瘤旁组织且与miR-182呈负相关(P<0.05)。结论:胶质瘤中miR-182的高表达与病理特征及预后恶化有关,靶向Foxo3a基因可能是miR-182发生作用的机制。