重组人类肝细胞生长因子对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因的影响

目的探讨重组人类肝细胞生长因子(rhHGF)对胶质瘤细胞垂体瘤转化基因(PTTG)的影响。方法体外培养胶质瘤C6细胞,给予不同浓度的rhHGF(0、10、20、30 μg/L),半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTGmRNA表达,Western blot检测PTTG蛋白表达。结果不同浓度rhHGF作用后C6细胞PTTG mRNA表达与蛋白水平均增高,且随着浓度的增加,其升高越明显,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 rhHGF可上调PTTG的表达,且呈剂量依赖性。

垂体瘤转化基因与肺癌

垂体肿瘤转化基因是于1997年被分离出的一种肿瘤转化基因,在多种肿瘤组织内有高表达,具有反转录、诱导细胞转化、抑制姐妹染色单体分离及诱导细胞凋亡和染色体非整倍体性等功能。研究证明PTTG在肺癌组织中可有高表达,且其高表达与肺癌的发生发展关系密切,有望成为肺癌基因治疗新的靶位点。

垂体瘤转化基因在多发性骨髓瘤患者中表达的研究

为了研究垂体瘤转化基因(pituitarytumor-transforminggene,PTTG)在老年多发性骨髓瘤(multiplemyelo-ma,MM)患者中的表达并分析它与MM发生的关系,采用RT-PCR方法检测33例MM患者及10例正常对照者骨髓单个核细胞中PTTG的表达。结果表明MM患者PTTG在MM中的表达水平(0.3415±0.2172)明显高于正常对照组(0.0590±0.0233)(P<0.05)。结论PTTG的过度表达可能与MM的发生发展有关,这为MM的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。

垂体瘤转化基因和C-myc基因在多发性骨髓瘤中表达的研究

本研究探讨垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)和c-myc基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者中的表达并分析它们与MM发生的关系。采用RT-PCR方法检测33例MM患者及10例正常人骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell,BMMNC)中PTTG和c-myc基因的表达。结果表明:MM患者PTTG和c-myc基因的表达明显高于正常对照组(p<0.05)。PTTG基因与c-myc基因的表达呈正相关(r=0.801,p<0.05)。结论:PTTG和c-myc基因的过度表达与MM的发生发展有关。

垂体肿瘤转化基因、内皮抑素和碱性成纤维细胞生长因子mRNA在侵袭性垂体腺瘤中的表达

目的 :探讨垂体腺瘤组织中垂体肿瘤转化基因 (PTTG)、内皮抑素 (endostatin)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)在侵袭性垂体腺瘤发生中的作用。方法 :应用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术检测非侵袭性和侵袭性垂体腺瘤组织标本中PTTG ,endostatin和bFGFmRNA的表达水平。结果 :侵袭性腺瘤较非侵袭性腺瘤PTTG和bFGFmRNA表达明显增高 (均P <0 .0 1)。侵袭性腺瘤较非侵袭性腺瘤endostatinmRNA表达明显降低(P <0 .0 1)。结论 :垂体腺瘤侵袭性的发生可能与PTTG和bFGF表达增高及endostatin表达下调有关 。

垂体肿瘤转化基因在人垂体腺瘤中的表达

目的 用反转录 -PCR方法定量研究垂体肿瘤转化基因 (Pituitarytumortransforminggene,PTTG)mRNA在不同类型的垂体腺瘤中的表达 ,明确 :(1)在不同类型的垂体腺瘤中 ,PTTGmRNA的表达是否存在细胞特异性 ,其表达量是否有差别 ;(2 )PTTGmRNA的表达量与肿瘤分级分期的关系 ,从而进一步探讨PTTG在垂体腺瘤发生发展过程中的作用。方法 2 0例垂体腺瘤 ,手术中取出 ,迅速冻于液氮中保存。根据血清激素水平和临床表现确定腺瘤类型。根据影像学和术中所见对肿瘤分级和分期。用异硫氢酸胍一步法提取垂体腺瘤组织总RNA ,用RT -PCR方法检测PTTGmRNA在各组垂体腺瘤组织中的表达。结果 2 0例垂体腺瘤患者 ,泌乳素 (Prolactin ,PRL)腺瘤 6例 ,生长激素 (Growthhormone ,GH)腺瘤 6例 ,无功能瘤 8例。PTTGmRNA在所有PRL瘤、GH瘤和无功能瘤中有表达。PTTGmRNA在PRL、GH和无功能瘤中的表达量无明显差别。PTTG在Ⅱ级、Ⅲ级以及Ⅳ级垂体腺瘤组织中的表达量呈逐渐升高的趋势 ,组间比较有明显差别 (P <0 .0 1) ,PTTG在A期、B期以及C期腺瘤的表达量呈逐渐升高的趋势 ,组间比较有明显差别 (P <0 .0 1)。结论 PTTGmRNA在PRL瘤、GH瘤以及无功能瘤中均有表达 ,PTTGmRNA表达量随着垂体肿瘤浸润程度的增高而升高 。

表皮生长因子对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的探讨表皮生长因子(EGF)在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响。方法不同浓度的EGF(10ng/mL、20 ng/mL和30 ng/mL)在体外作用于胶质瘤C6细胞,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG mRNA表达,Western检测其PTTG蛋白表达。结果与空白对照组比较,RT-PCR和Western检测结果显示PTTG mRNA及其蛋白的表达在各EGF作用组均显著增高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论EGF可以量效的方式上调PTTG的表达。

胰岛素样生长因子-1对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(Insulin-like-growth factor-1,IGF-1)在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)表达的影响。方法:体外培养胶质瘤C6细胞,给与不同浓度的IGF-1(0.1、1.0、10.0ng/ml)作用24h后半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PTTG mRNA,Western blot检测PTTG蛋白表达。结果:不同浓度IGF-1作用后C6细胞PTTGmRNA表达与蛋白水平均增高,差异有统计学意义(P<0.01),且随着浓度的增加,其升高越明显。结论:IGF-1可以上调PTTG的表达,并剂量依赖性。

垂体肿瘤转化基因PTTG在NHL中的表达及其意义

目的:探讨垂体肿瘤转化基因PTTG(pituitary tumor transforming gene)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达,并研究其表达与NHL临床病理指标的关系。方法:采用原位杂交法和免疫组化法检测50例NHL患者肿瘤组织和20例良性淋巴结炎组织中PTTG mRNA及其蛋白的表达。结果:PTTG mRNA在NHL和对照组的阳性表达率分别为54.0%(27/50)和20.0%(4/20),PTTG蛋白在NHL和对照组的阳性表达率分别为50.0%(25/50)和15.0%(3/20),NHL中PTTG mRNA及其蛋白的阳性表达率及表达分级比较均高于对照组。PTTG mRNA的表达与NHL的恶性程度和临床分期呈正相关(r=0.366,P=0.009;r=0.438,P=0.001)。NHL中PTTG mRNA表达与其蛋白表达成等级正相关(r=0.831,P<0.01)。NHL中PT-TG mRNA表达与近期疗效呈负相关(r=-0.354,P<0.05)。结论:NHL中PTTG高表达。PTTG表达水平与NHL生物学行为可能有关。

他莫西芬对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响

目的探讨他莫西芬在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响。方法不同浓度(1×10-9、1×10-7和1×10-5mol/L)的TAM在体外作用于胶质瘤C6细胞,逆转录聚合酶链式反应半定量法检测PTTGmRNA的表达,WesternBlot检测其蛋白表达情况。结果RT-PCR显示PTTGmRNA在各组的表达分别为(1.872±0.135)、(1.363±0.138)、(0.973±0.121)、(0.667±0.080),各组间差异有统计学意义,均P<0.01;WesternBlot显示PTTG蛋白在各组的表达分别为(1.961±0.140)、(1.525±0.120)、(0.977±0.116)、(0.687±0.117),各组差异有统计学意义,均P<0.01。结论TAM可抑制PTTGmRNA及其蛋白的表达,且这种效应随剂量的增加而增强。

电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因的影响

[目的]探讨不同时间点电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响。[方法]胶质瘤C6细胞用10Gy剂量X射线照射,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测照射前、照射后4h、8h、12h、24h、48h、72hPTTGmRNA的表达,免疫细胞化学检测PTTG蛋白表达。[结果]PTTGmRNA及其蛋白的表达在X射线照射后4h即开始下降,12h下降最明显,24h开始回升,72h恢复正常。[结论]电离辐射可以显著影响胶质瘤细胞PTTG的转录和翻译;机体内存在对电离辐射导致的PTTG损伤的修复系统。

RNA干扰对胶质瘤细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的构建表达靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体。方法根据PTTG基因cDNA序列,设计针对PTTG基因的3组干扰序列,并设计1组阴性对照序列,克隆到真核表达载体pGenesil-1中,进行酶切鉴定和测序鉴定。将构建好的4组重组质粒分别命名为PTTG-1组,PTTG-2组,PTTG-3组、阴性对照NC(negativecontrol)组。利用RNA干扰技术,将以上shRNA分别转染细胞中,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTGmRNA表达水平、Western blot检测PTTG蛋白表达水平。结果构建的PTTG RNA干扰序列和阴性对照序列经基因测序证明序列正确。细胞在转染PTTG干扰载体后,提取细胞的总RNA,经RT-PCR电泳发现,在转染24 h后,PTTG-2、PTTG-3即显示出抑制作用,PTTGmRNA表达水平降低,PTTG-1组对目的基因的抑制作用不明显;在转染48 h后,各组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染72 h后,PTTG-1组有微弱的抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。Western blot检测不同时间PTTG蛋白的变化显示,在转染24 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组对目的基因的抑制作用均不明显;在转染48 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染h小时后,PTTG-1组没有抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。结论成功构建了靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体,并筛选了干扰效果最强的序列,为进一步实验打下了基础。

电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因表达的影响

目的探讨电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)表达的影响。方法胶质瘤C6细胞分为4组(n=6):A组(空白对照组)、B组(2 Gy剂量X射线组)、C组(4 Gy剂量X射线组)、D组(6 Gy剂量X射线组),X射线照射后12 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTTG mRNA的表达,免疫细胞化学检测其蛋白表达。结果PTTG mRNA在X射线处理组均降低,随着X射线剂量的增加,其表达降低越明显,A、B、C、D 4组的表达分别为1.910±0.141、1.398±0.157、1.010±0.133、0.743±0.092,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。PTTG蛋白积分光密度(integrated optical density,IOD)在X射线处理组均降低,随着X射线剂量的增加,其表达降低越明显,A、B、C、D 4组的IOD分别为1.840±0.089、1.395±0.139、0.893±0.125、0.597±0.104,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论电离辐射可以剂量依赖的方式降低胶质瘤C6细胞PTTG mRNA及其蛋白的表达。

不同时间点电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的探讨不同时间点电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响。方法胶质瘤C6细胞用2 Gy剂量X射线照射,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测照射前、照射后4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 hPTTG mRNA的表达,采用免疫细胞化学检测PTTG蛋白表达。结果PTTG mRNA及其蛋白的表达水平在X射线照射后4 h即开始下降,12 h下降最明显,24 h开始回升,72 h恢复正常。结论电离辐射可以显著影响胶质瘤细胞PTTG的转录和翻译;机体内存在对电离辐射导致的PTTG损伤的修复系统。

垂体瘤转化基因、P16在胶质瘤中表达的意义

目的探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(Pituitary Tumor Transforming Gene,PTTG)、周期素依赖性激酶抑制因子(cyclin-dependent kinase inhabitor)P16在胶质瘤中的作用以及它们的关系。方法40例胶质瘤标本分为Ⅰ级8例、Ⅱ10例、Ⅲ级13例、Ⅳ级9例,RT-PCR检测PTTG及P16 mRNA的表达,免疫组化检测PTTG、P16蛋白的表达。结果PTTG mRNA在Ⅰ～Ⅳ级的表达分别为0.907±0.065、1.109±0.083、1.312±0.089、1.499±0.215,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);P16mRNA在Ⅰ～Ⅳ级的表达分别为1.317±0.115、1.112±0.223、0.871±0.105、0.593±0.065,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);PTTG蛋白表达随肿瘤病理级别的增高而增加,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05),P16蛋白表达随肿瘤病理级别的增高而降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);PT-TG与P16蛋白表达之间呈负相关(P<0.01)。结论PTTG、P16在胶质瘤的发生、发展中起重要的作用。

垂体肿瘤转化基因和碱性成纤维细胞生长因子在胶质瘤中的表达及意义

目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在胶质瘤中表达及二者相互关系。方法40例星形细胞胶质瘤患者手术标本,病理学分级为Ⅰ级8例、Ⅱ级10例、Ⅲ级13例、Ⅳ级9例。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG mRNA及bFGF mRNA的表达,免疫组化检测二者蛋白表达。结果PTTG mRNA、bFGF mRNA及蛋白表达均随着肿瘤病理级别的增高而增加(P<0.05或P<0.01);PTTG蛋白表达与bFGF蛋白表达呈显著正相关(r=0.523,P<0.05)。结论PTTG和bFGF与胶质瘤的生物学行为有密切关系,二者共同促进胶质瘤的发生发展。

垂体瘤转化基因反义寡核苷酸抑制胶质瘤增殖的实验研究

目的观察垂体瘤转化基因(p itu itary tumor transform ing gene,PTTG)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynuc le-otide,ASODN)对恶性胶质瘤增殖的抑制作用。方法将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核。按照不同的PTTG反义寡核苷酸浓度在选定的时间点立体定向原位注射于肿瘤区域。3周后处死大鼠,取标本做GFAP、PTTG、PCNA免疫组化染色。结果不同浓度的PTTG-ASODN对C6胶质瘤模型的增殖抑制呈时间、浓度依赖性,而且高浓度,早期应用,反复应用PTTG-ASODN抑制胶质瘤模型肿瘤增殖的效果明显。结论PTTG-ASODN可以抑制胶质瘤的增殖,有望成为胶质瘤基因治疗的一种新策略。

宫颈鳞癌与转化生长因子β1的表达及人类乳头瘤病毒16E6基因多态性的关系

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)表达及人乳头瘤病毒(HPV)16E6基因突变与宫颈癌发生发展的关系,阐明TGF-β1在宫颈癌发生中的作用机制。方法:收集2007年5月—2009年1月住院手术患者的新鲜宫颈组织,分为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级17例、CINⅡ-Ⅲ级17例及宫颈鳞状细胞癌39例,用免疫组织化学法检测组织标本中TGF-β1蛋白表达,用PCR法及直接测序检测组织HPV16E6基因,分析其与宫颈癌发生发展的相关性。结果:CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宫颈鳞癌组织中TGF-β1的阳性率分别为11.8%、35.3%及64.3%,其阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。晚期宫颈鳞癌(ⅡB-Ⅳ期)患者TGF-β1表达率为88.9%,显著高于早期宫颈鳞癌(ⅠB-ⅡA)患者(76.7%)(P<0.01)。HPV16E6在CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ组和宫颈鳞癌组织中的检出率分别为11.8%、41.2%和82.1%,其检出率组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。HPV16E6的阳性率与宫颈病变的进展程度呈正相关(r=0.592,P=0.001)。经基因测序,用DNAman软件对测序结果进行比对分析显示,共14例与标准株序列相同,最常见的突变位点是D25E,检出率为42.5%。HPV16E6为非突变型患者中,其TGF-β1阳性率为50.0%;而在HPV16E6D25E患者中,其TGF-β1阳性率为92.9%(P<0.05)。结论:TGF-β1的表达与宫颈鳞癌的发生发展有关,HPV16E6多态性可能与TGF-β1促进癌细胞的生长及侵袭有关。

转化生长因子β受体Ⅱ在EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌患者肿瘤组织中的表达及其对H3122细胞侵袭力的影响

目的探讨转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβRⅡ)在棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因阳性肺腺癌患者肿瘤组织中的表达及对人EML4-ALK阳性肺腺癌细胞H3122侵袭力的影响。方法纳入EML4-ALK阳性肺腺癌患者18例,其中ⅠA期11例,ⅢA期7例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测患者肺癌组织中TGFβRⅡmRNA的表达量。构建TGFβRⅡ沉默质粒(TGFβRⅡ-shRNA)及阴性对照(NC-shRNA)质粒,进行慢病毒包装后转染H3122细胞,并将转染TGFβRⅡ-shRNA、NC-shRNA质粒的细胞设为LV-shRNA-TGFβRⅡ-H3122组、LV-shRNA-GP-H3122组,测定两组细胞的侵袭能力。结果ⅠA期与ⅢA期肺腺癌组织的TGFβRⅡmRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0. 05)。LV-shRNA-TGFβRⅡ-H3122组通过Transwell的细胞数多于LV-shRNA-GP-H3122组(P <0. 05)。结论 TGFβRⅡmRNA在早期与中晚期EML4-ALK阳性肺腺癌组织中的表达无明显差异,但沉默TGFβRⅡ基因后EML4-ALK阳性肺腺癌细胞侵袭性明显增强。

非小细胞肺癌组织中胶质瘤相关癌基因同源蛋白2、TGF-β_1的表达变化

目的观察非小细胞肺癌组织中胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)与转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化。方法非小细胞肺癌患者89例,术中留取肺癌组织和癌旁正常余肺组织,采用免疫组化SP法检测Gli2、TGF-β1,分析二者表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。结果非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Gli2阳性表达率分别为94.4%、13.5%,TGF-β1阳性表达率分别为100.0%、30.3%,两者相比,P均<0.05。不同肿瘤分期、淋巴结转移情况及血管侵犯情况的非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Gli2阳性表达率相比,P均<0.05;不同肿瘤直径、淋巴结转移情况和血管转移情况的非小细胞肺癌患者肿瘤组织中TGF-β1阳性表达率相比,P均<0.05;非小细胞肺癌组织中Gli2、TGF-β1的表达呈正相关关系(r=0.438,P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中Gli2、TGF-β1阳性表达率较高,二者可能共同参与了非小细胞肺癌的发生、发展。