人宫颈癌基因表达载体的构建及其在肝癌相关研究中的价值

目的为人宫颈癌基因(HCCR)在肝癌发生、发展中的生物学效应及机制研究提供理想工具。方法培养人HepG2细胞,RT-PCR扩增出HCCR基因片段,将其连接到pCR T7 TOPO TA/NT克隆载体中,命名为pCRT7 TOPO TA/NT-HCCR。运用交叉引物PCR筛选正确连接的克隆。再用EcoR I和BamHI限制性内切酶酶切鉴定和测序验证。将其转化BL21细菌,用IPTG诱导其表达相应的蛋白质,并用Western blotting验证。结果pCR T7TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功。酶切鉴定和测序均与预期一致。用IPTG诱导转化此质粒后的BL21细菌,得到相应大小的蛋白质。结论pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功;其可作为HCCR基因功能研究及其与肝癌相关性研究的理想工具。