人类平衡型核苷转运蛋白1高表达晚期非小细胞肺癌患者术后应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果观察

目的 观察晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中人类平衡型核苷转运蛋白1（hENT1）高表达患者应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果.方法 选取2008年7月至2013年12月于浙江金华广福医院行晚期NSCLC手术后,病理确诊晚期NSCLC患者,采用免疫组织化学SP法检测肺癌组织中hENT1抗体的表达水平.62例hENT1高表达患者入组,按随机数字表分组法分为对照组（30例）和观察组（32例）.对照组采用常规剂量吉西他滨（1 000 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察组用低剂量吉西他滨（250 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察2组近期疗效、化疗不良反应.采用生活质量调查核心量表QLQ-C30和肺癌专用量表QLQ-LCl3比较2组化疗后生活质量.结果 对照组和观察组近期有效率和疾病控制率差异无统计学意义[43.3％ （13/30）比46.9％ （15/32）,76.9％ （23/30）比81.2％（26/32）]（x2 =0.08,x2 =0.20,P＞0.05）.观察组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少、血小板减少及恶心、呕吐发生率低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;除角色功能外,观察组化疗后总体生活评分及躯体功能、情绪功能、认知功能、社会功能、经济状况各项评分均优于对照组[（54±20）分比（54±16）分,（72±25）分比（62 ±20）分、（85 ±20）比（72±19）分、（76±28）分比（62±25）分、（61 ±24）分比（49 ±30）分、（36±24）分比（56±21）分],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.观察组除乏力症状外其他症状评分均优于对照组（P＜0.05）.结论 对于晚期NSCLC术后hENT1高表达患者,在保证化疗效果的同时,相对于常规剂量吉西他滨,低剂量用药可有效降低化疗过程中不良反应,提高患者的生活质量.

人类平衡型核苷转运蛋白3的功能及与疾病的研究进展

平衡型核苷转运蛋白(equilibrative nucleoside transporter,ENT或SLC29)作为非浓度依赖型的核苷和核碱基转运体,以低亲和性结合核苷及其类似物跨膜向相对浓度较低的一方扩散;作为真核生物体内核苷、核碱基、抗肿瘤和抗病毒感染的核苷类似物转运体,在遗传物质的合成、抗肿瘤和抗病毒感染发挥着重要的作用。人类平衡型核苷转运体3(human balanced nucleoside transporter 3,hENT3)是溶质载体29(SLC29)基因家族中主要的细胞内转运体,该蛋白具有非常长的亲水性N-末端区域,内含溶质体、双亮氨基酸,强烈依赖于pH值。hENT3蛋白主要存在于细胞内溶酶体和线粒体中,对胞内核苷、核碱基及核苷类似物转运有重要的研究意义。但目前对于hENT3的研究还处于探索阶段,其转运模式及其与疾病发生发展的关系需要进一步研究。本文将对hENT3及其与疾病的研究进展进行论述,期待对hENT3有一个全面的了解,有助于后期的进一步研究。

阿糖胞苷作用下白血病细胞膜人核苷转运体1基因表达变化研究

目的检测肿瘤细胞膜上人平衡型核苷转运体1(human equilibrative nucleoside trans-porter 1,hENT1)基因表达及其变化,探索影响阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病(AL)疗效的相关因素。方法根据目前临床采用的低剂量、中剂量和大剂量Ara-C(HD-AraC)治疗时所能达到的血浆药物浓度,分别采用0.5～100μmol/L中的6种不同剂量(0.5、1.0、5.0、15、50、100μmol/L)体外作用于白血病细胞株Jurkat和NB4,经4～48 h的5个时间段(4、8、12、24、48 h)作用后,采用定量RT-PCR方法测定hENT1 mRNA表达及其变化。结果 (1)Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA原始相对表达量(ΔCt值)分别为5.21±0.02和5.34±0.05,两者差异无显著性(P>0.05)。(2)在较低剂量Ara-C(0.5～15μmol/L)作用下,hENT1 mRNA表达恒定,与阴性对照组差异无显著性(P>0.05);但在高浓度Ara-C(50μmol/L和100μmol/L)作用48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1 mRNA表达明显增强,ΔCt分别为2.02±0.17和2.19±0.02,与对照组(5.21±0.02)比较差异均有显著性(P<0.05)。(3)同一种细胞在50μmol/L和100μmol/L两个剂量组的hENT1mRNA表达增高程度,差异无显著性(P>0.05);分别来源于ALL和AML的Jurkat和NB4细胞的表达量间差异亦无显著性(P>0.05)。结论 HD-AraC处理48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA表达可明显提高,有利于药物进入细胞,以增强抗白血病效应,推测临床HD-AraC疗法采用48～72 h的疗程是必要的。

Kruppel样因子15通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3表达影响胰岛素抵抗实验研究

目的:探讨Kruppel样因子15(KLF15)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达影响胰岛素抵抗。方法:建立小鼠模型和细胞模型,细胞蛋白电泳检测细胞内目的蛋白表达,聚合酶链反应(PCR)检测KLF15表达量,Western blot检测NLRP3相对表达量,免疫组化法检测组织KLF15表达,免疫荧光染色检测细胞增殖相关蛋白。结果:在链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠模型中,小鼠诱导后1~4个月,血清KLF15 mRNA表达量水平被抑制。用10、20、40 mmol/L葡萄糖诱导HepG2细胞24 h后,细胞内KLF15 mRNA表达量水平随葡萄糖浓度升高而减少(均P<0.05)。小鼠组织中,KLF15、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)在空白组表达最高,其次分别为1、2、4个月组;NLRP3在空白组表达最低,1、2、4个月组依次升高(均P<0.05)。在体外模型中,si-NLRP3质粒可以降低NLRP3表达量;抑制NLRP3表达可以减少干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β表达,同时增加IRS1、GLUT4表达量;NLRP3过表达质粒可以促进NLRP3表达量,过表达NLRP3可以促进INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β表达,同时减少IRS1、GLUT4表达量;上调KLF15可以抑制NLRP3蛋白表达,抑制KLF15可以促进NLRP3蛋白表达(均P<0.05)。结论:KLF15表达量与2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗有关,KLF15低表达量可能会增加胰岛素抵抗。KLF15可能通过抑制NLRP3表达量减少T2DM胰岛素的炎症水平,抑制胰岛素抵抗。KLF15可能为胰岛素抵抗的T2DM的潜在治疗和诊断靶点,为以后的相关研究提供实验依据。

hENT1蛋白和RRM1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人类平衡型核苷转运载体1(hENT1)及核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)发病、预后中的作用及机制。方法应用免疫组化方法检测54份NSCLC组织及癌旁正常组织中hENT1、RRM1蛋白表达情况,并分析其与NSCLC临床病理特征及接受含吉西他滨方案化疗患者生存时间的相关性。结果hENT1蛋白及RRM1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率均显著高于癌旁正常肺组织(P<0.05),但均与年龄、性别、生存时间等临床特征无显著相关性;hENT1蛋白阳性表达、RRM1蛋白阴性表达者生存时间显著高于RRM1蛋白表达阴性、hENT1蛋白表达阳性者(P<0.05)。结论hENT1蛋白和RRM1蛋白在NSCLC发病中具有一定作用,二者可通过调节化疗药物敏感性影响患者预后;联合检测上述两种蛋白表达有利于为患者制订个体化治疗方案。

ABCA6基因的变异p.Asn1322Ser与ABCA7基因的变异p.Cys1988Phe与抵抗慢性乙型肝炎病毒感染相关

【目的】本课题组前期通过筛选99例理论上为"乙肝易感个体"及90例理论上为"乙肝抵抗个体"的全外显子组测序数据,报道了乙肝病毒受体基因SLC10A1的变异p.Ser267Phe与携带者对乙肝有更高的抵抗性相关。本研究旨在进一步深度挖掘这些个体的全外显子组测序结果,鉴定以前未知的其他与慢性乙型病毒性肝炎病毒感染抵抗性相关的新基因及突变。【方法】从全外显子组测序的数据中筛选导致编码蛋白改变的单核苷酸变异和小的插入缺失;选择在"乙肝抵抗"组中显著性升高的遗传变异;用Fisher精确检验进行"易感-抵抗"组间关联性分析,对在"易感-抵抗"组中有显著差异(P<0.05)的变异进行生物信息学研究及野生型和突变型蛋白的结构分析。【结果】本研究在两个ABC转运蛋白超家族成员ABCA6和ABCA7基因区域内各发现一个错义突变,分别是p.Asn1322Ser(c.3965A>G,rs2302134)和p.Cys1988Phe(c.5963G>T,rs142573667),二者均在"乙肝抵抗"组显著性升高,表明突变携带者对乙肝有更强的抵抗性(p.Asn1322Ser:P=0.0187,OR=0.59;p.Cys1988Phe:P=0.0099,OR=0.07)。生物信息学分析显示,两个突变导致的氨基酸改变全发生在跨物种保守的氨基酸中,且两个突变都发生于野生型蛋白的ABC转运蛋白结构域内,SIFT预测均为对野生型蛋白功能有大的影响的变异。结构学分析显示,ABCA6的p.Asn1322Ser突变影响了野生型蛋白的ATP结合功能;ABCA7的p.Cys1988Phe突变可能会影响蛋白质的二硫键的形成,并可能干扰相邻β-折叠片结构,从而破坏野生蛋白的正常功能。【结论】我们的研究结果揭示了两个以前未报道过的基因及其变异,ABCA6的p.Asn1322Ser突变和ABCA7的p.Cys1988Phe突变,与携带者对慢性乙型肝炎病毒感染有更高的抵抗性相关。这为进一步阐明宿主的遗传背景在乙肝中的作用及机理提供了新的数据。我们的结果同样证明,对极端性状个体进行外显子组测序可以有效地阐明复杂疾病的遗传原因。

人体平衡型核苷转运蛋白的结构及应用研究进展

通过参与合成和转运核苷及其类似物,人体中的平衡型核苷转运蛋白在生物体内参与了细胞发育、能量代谢和信号转导等众多生理生化过程,其研究对于癌症、病毒感染等相关疾病的治疗有着极为重要的意义。该文综述了该类蛋白质在人体内的发现历程、分类、结构和作用机制,并对于其在一些疾病治疗和药物开发方面的前景进行了展望。

白细胞介素-28B和平衡性核苷转运载体1基因多态性与HIV／HCV合并感染者HCV自发清除的关系研究

目的分析湖南省HIV／HCV合并感染者的白细胞介素-28B（IL-28B）和平衡性核苷转运载体1（ENT1）基因多态性与HCV自发清除的关系。方法对湖南省107例HIV／HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点（rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs760370）进行分型，比较其在慢性肝炎组和自发清除组的基因多态性分布。结果在HIV／HCV合并感染者中，IL-28B基因rs12980275、rs12979860和rs8099917位点的主要基因型分别为AA、CC和TT型，均占84．1％。3个位点高度连锁不平衡（r2〉0．94），慢性肝炎组和自发清除组基因型分布差异有统计学意义（P〈0．05），携带IL-28B主要基因型的感染者更易发生HCV自发清除。ENT1基因的rs760370位点基因型分布在两组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-28B基因AA、CC和TT型与HCV自发清除有关。

hURAT1基因3′非编码区SNP筛查及与原发性高尿酸血症的关系

目的在人尿酸盐转运蛋白1(hURAT1)基因3′非编码区(3′UTR区)筛查与原发性高尿酸血症关联的单核苷酸多态性(SNP)。方法对原发性高尿酸血症病人273例、健康体检者429例(正常对照组),采用酚-氯仿法提取外周血白细胞基因组DNA,特异性引物扩增3′UTR区,并进行基因测序,对基因型及频率进行分析。结果共检测到3种SNP,分别为1925G>A、delG1951及G2174A,上述SNP位点所组成的基因型频率在高尿酸血症病人组和正常对照组差异无显著性。2例原发性高尿酸血症病人hURAT1基因3′UTR区第1827-1828位2个碱基缺失(delTC1827-1828),这2例病人的血尿酸水平明显高于其他病人,正常对照组未检测到该缺失。结论3′UTR区存在3个SNP位点,其中delTC1827-1828位点可能是原发性高尿酸血症致病位点。

MiR-26b靶向hENT1通过RhoA/ROCK-1通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨miR-26b在肺癌组织中的表达及miR-26b在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:q PCR检测肺癌和正常肺组织中miR-26b的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-26b与人平衡核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1)的相互作用;Transwell侵袭试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western印迹检测h ENT1,ROCK-1,Rho A蛋白的表达情况;鬼笔环肽染色观察miR-26b-mimic处理后细胞骨架的变化情况;裸鼠皮下成瘤试验检测miR-26b-mimic对肺癌成瘤大小及体积的影响。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-26b表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-26b表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-26b能与h ENT1的3'-UTR特异性结合;miR-26b可以调控肺癌A549细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-26b可以抑制h ENT1,ROCK-1,Rho A的表达;miR-26b-mimic处理后,F-actin染色明显减少,细胞膜皱褶形成明显减少,伪足形成明显减少;裸鼠皮下成瘤试验显示:miR-26b-mimic处理后肿瘤体积和质量明显减小。结论:MiR-26b在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期、分级及淋巴结转移与否密切相关,同时靶向h ENT1通过Rho A/ROCK-1信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移。

ADAMTS1基因多态性与冠心病的相关性研究

目的：探讨ADAMTS1基因SNPrs428785和SNPrs2738两个位点与冠心病（coronary heart disease,CHD）的相关性。方法：采用聚合酶链反应结合单链构象多态性和聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性,再结合DNA测序技术对315例CHD患者和355例对照人群进行SNPrs428785和SNPrs2738检测,2组间计数资料比较采用卡方检验,计量资料比较采用独立样本t检验和Mann-Whitney U检验分析。结果：SNPrs428785在CHD组和对照组中基因型频率为CC（50.2%vs 38.9%）、CG（40.3%vs.47.9%）和GG（9.5%vs.13.2%）,差异有统计学意义（χ^2=8.974,P=0.011）,2组间G等位基因频率分别为29.7%和37.2%,差异有统计学意义（χ^2=8.410,P=0.004）,经二元logistic回归分析后,提示rs428785的基因型与冠心病的发生相关（OR=1.528,95%CI=1.086~2.150,P=0.015）。SNPrs2738在CHD组和对照组中的基因型频率为AA（74.3%vs.78.9%）、AC（24.1%vs.18.9%）和CC（1.6%vs.2.3%）,差异无统计学意义（χ^2=2.998,P=0.223）,A等位基因频率分别为86.3%和88.3%,差异无统计学意义（χ^2=1.164,P=0.281）。结论：ADAMTS1基因SNPrs428785多态性与冠心病发生相关,且G等位基因可能是冠心病的遗传易感基因,而SNPrs2738多态性与冠心病发生无相关性。

阿糖胞苷代谢酶的单核苷酸多态性与其临床疗效的关系

阿糖胞苷及其药理作用 阿糖胞苷（Ara—C）为嘧啶抗代谢类药物，可抑制细胞DNA的合成，干扰细胞增殖。Ara-C进入细胞后．先在细胞内经脱氧胞苷激酶（deoxycytidine kinase，DCK）催化磷酸化，转变为有活性的Ara—C单磷酸（arabinoside-cytidine monophosphate，Ara-CMP），

RRMl、hENT1的表达与胰腺癌吉西他滨化疗疗效相关性研究进展

胰腺癌预后较差,化疗在胰腺癌的治疗中发挥重要作用。以吉西他滨的主的化疗方案是胰腺癌化疗的标准方案。而吉西他滨耐药仍然是延长患者总生存(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)的重要阻碍。目前研究表明,在多种吉西他滨耐药细胞系中RRM1和h ENT1有不同程度表达。而目前通过对RRM1、h ENT1等相关基因的表达预测吉西他滨的化疗效果的研究仍处于初级阶段,有待更进一步的研究。本文对RRM1、h ENT1的表达与吉西他滨化疗的耐药性及预后新进展作一综述。

核苷调节系统参与调控癫痫的相关研究进展

癫痫是一种神经系统常见的慢性、反复发作性疾病[1]。截至目前,癫痫的发病机制仍不明确,防治措施有限,其中30%左右的患者使用药物治疗后病情依旧不能得到有效控制[2]。长期反复的癫痫发作不仅使得癫痫患者身心健康受到严重影响,也给其家庭带来了沉重的经济负担,癫痫患者及其家庭长期受他人歧视的现象亦不少见。目前神经递质调控失衡参与癫痫的机制研究,已成为神经科学领域研究的重点和热点。核苷作为一种神经递质,不仅参与调节脑内不同的生理和病理过程,还与癫痫的发生发展过程有密切相关性[3]。

hENT-1表达水平对胰腺癌吉西他滨辅助化疗的影响

目的:本研究探讨胰腺癌hENT-1表达水平对吉西他滨辅助化疗的影响。方法:利用胰腺癌组织切片,行hENT-1免疫组织化学实验,针对其染色强度、范围计算评分。追踪回访对应患者的预后情况后行统计学分析。结果:hENT-1高表达组与低表达组的OS为20个月对10个月,DFS为15个月对6个月。OS的独立预后因素是hENT-1表达水平、淋巴转移情况和病理分级。DFS的独立预后因素是hENT-1表达水平和病理分级。病人之间临床资料与hENT-1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胰腺癌细胞中hENT-1的表达水平可能影响吉西他滨辅助化疗敏感性,hENT-1高表达者使用吉西他滨辅助化疗后的OS及DFS较低表达者长。

Mdivi-1对匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元保护作用及其机制研究

目的研究线粒体分裂蛋白抑制剂(Mdivi-1)对癫痫大鼠行为学及海马区线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、平衡型核苷转运载体1(ENT1)蛋白的影响。方法20只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、DMSO组、Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,透射电镜观察脑组织结构变化;免疫组化及免疫荧光法检测各组大鼠海马区DRP1表达;Western blot检测各组大鼠海马区DRP1、ENT1蛋白变化。结果与模型组或DMSO组相比,Mdivi-1组大鼠癫痫发作潜伏期明显增加而发作频率下降(P<0.05);电镜观察结果显示,模型组部分内外膜崩解,线粒体明显破坏、肿胀而Mdivi-1组损伤情况减轻;免疫组化结果显示,模型组大鼠脑组织海马区DRP1阳性细胞数增多,而Mdivi-1组阳性细胞数下降(P<0.05);免疫荧光显示,DRP1在海马神经元中有表达;Western blot结果显示,与正常组相比,DMSO和模型组中ENT1、DRP1蛋白表达升高,而Mdivi-1组中ENT1、DRP1蛋白表达下降(P<0.05)。结论Mdivi-1能靶向阻断DRP1,调控线粒体动力学平衡,从而影响ENT1表达,对海马神经元具有神经保护的作用。

有机阴离子转运蛋白1B1基因多态性与瑞格列奈药物疗效的关系

目的研究有机阴离子转运蛋白1B1（SLCO1B1）基因D130N多态性与瑞格列奈治疗新诊断2型糖尿病疗效之间的相关性。方法选取新诊断的2型糖尿病患者100例，口服瑞格列奈单药治疗48周，测量治疗前后人体基本参数及糖脂代谢相关指标。用PCR-限制性片段长度多态性及直接测序的方法检测SLCO1B1基因D130N和V174A变异。结果89例患者完成48周随访，瑞格列奈对DD基因型者HbA1c的控制较N等位基因携带者好[AHbA1c：（-2．29±0．23）％vs（-1．49±0．21）％，P〈0．05]，未发现D130N与其它糖代谢相关指标的相关性。结论SLCO1B1基因D130N变异与瑞格列奈治疗2型糖尿病的疗效相关，DD基因型者疗效更好。

人类白细胞抗原A和DRB1基因与1型糖尿病的相关性研究

目的研究江苏地区人类白细胞抗原（HL4）-A和月出-DRBl基因频率及单倍型与1型糖尿病的相关性。方法于2008至2009年在江苏省江阴市和南京市选择自发酮症急性起病、依赖胰岛素治疗的1型糖尿病门诊或住院患者51例（1型糖尿病组），其中男27例，女24例，平均发病年龄（14±9）岁。另以2002至2006年登记加入中华骨髓库江苏分库的汉族无关骨髓捐献志愿者HLA分型资料20248份为对照。从受试者外周血中提取细胞基因组DNA，利用聚合酶链反应-寡核苷酸探针序列特异性引物技术进行HLA—A和月似-DRBl基因分型，应用Arlequin软件分析计算单倍型频率及连锁不平衡情况，通过卡方检验等比较组间基因频率、单倍型频率及疾病相关性分析。结果HLA-A点频率最高的为A＊02和A＊24，HLA-DRBl位点频率最高的为DRBl＊09。与对照组相比，1型糖尿病组HLA—A＊3[6．86％（7／102）比2．43％（984／40496），X^2=8．40，P〈0．01，比值比（OR）=3．00]、A＊24[27．45％（28／102）比16．79％（6799／40496），X^2=8．27，P〈0．01，OR=1．87]和DRBl＊09[32．35％（33／102）比16．15％（6540／40496），X^2=19．69，P〈0．01，OR=2．47]、DRBl＊03[15．69％（16／102）比4．76％（1927／40496），X^2=26．66，P〈0．01，OR=3．69]频率显著升高。A＊01-DRBl＊03在连锁不平衡分析中为1型糖尿病组所特有。结论检测出位点A＊03、A＊24及DR03、DR09对1型糖尿病的易患性，发现3个有易患作用的A—DR单倍型，观察到与1型糖尿病关联的祖先单倍型A01DR03。

血小板内皮细胞黏附分子-1基因单核苷酸多态性及单倍型与缺血性脑卒中的相关性研究

缺血性脑卒中（IS）是一种多基因、多因素综合作用而导致的一种常见疾病。随着人类基因组计划的迅速发展，IS相关基因的定位和识别已成为研究热点。血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）是新近发现的一种免疫球蛋白超家族的黏附分子，它可促进神经炎症反应，与血脂代谢紊乱、

非小细胞肺癌吉西他滨药物耐药相关基因研究进展

随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)化疗疗效的有效途径之一。确定药物的相关预测性分子标志物从而指导临床治疗、提高疗效被广泛关注。吉西他滨是目前NSCLC常用化疗药物之一,本文主要阐述了近年来吉西他滨药物耐药相关基因在NSCLC个体化治疗方面的研究进展。