人类心房组织转录因子新一代蛋白质组学高通量筛查TFRE实验方法的建立

目的探究利用人类心房组织建立高通量高效筛查转录因子的实验技术,即转录因子反应元件(transcription factor response elements,TFRE)的方法。方法本研究纳入2例术后患者的右心房组织(1例术前无房颤,1例术前有房颤)。提取人类心房组织细胞核蛋白质,测定其蛋白质浓度,制备磁珠-串联双拷贝转录因子反应元件序列(beadscatTFRE)复合体,利用beads-catTFRE复合体在核蛋白提取液中富集转录因子,高温高盐使核蛋白与beads-catTFRE复合体去结合后进行蛋白凝胶电泳,切胶、褪色后利用胰酶溶液进行胶内酶解,利用乙腈收缩凝胶条挤出其中的肽段并得到肽段溶液,干燥、溶解后上样进行质谱检测。利用Firmiana进行一站式数据分析和处理。结果本次实验在正常右心房组织和房颤患者右心房组织两个实验组中分别鉴定到了220种、181种转录因子,两组一共鉴定到了241种转录因子,其中正常右心房组织中表达量高于中位数的转录因子前10%的有12个;房颤右心房组织中表达量高于中位数的转录因子前10%的有12个。结论本研究建立高通量筛查方法覆盖度高,其检出数据可以用于支持进一步的实验验证研究。