MT01对人成骨样细胞系MG63内Toll样受体7,9表达的影响

目的探讨人成骨样细胞系MG63（简称MG63）内Toll样受体（TLRs）的表达情况及MT01与细胞内TLRs的关联。方法应用RTPCR法检测MG63内TLR1~10 mRNA的表达情况;MT01与MG63作用12、24、48 h后,Real time PCR法检测MG63细胞内TLR7,9 mRNA表达的变化;Western印迹法检测MG63细胞内TLR7,9蛋白表达的变化。结果 MG63细胞表达TLR1~10 mRNA;一定浓度的MT01作用于细胞后,对TLR7,9 mRNA及蛋白表达有显著的抑制作用,这种抑制作用无时间依赖性。结论 MG63细胞表达TLR1-10 mRNA,一定浓度的MT01可影响MG63细胞内TLR7,9 mRNA及蛋白的表达。

GLP-1受体激动剂艾塞那肽对MG-63细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Exenatide)对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖及成骨分化的作用。方法将MG-63细胞制成单细胞悬液,接种于细胞培养板,分别用不同浓度的艾塞那肽(0 mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)处理细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测MG-63细胞增殖率,并将艾塞那肽处理后的细胞裂解并取上清,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定AKP活力。结果 (1)艾塞那肽可促进MG-63细胞增殖(P<0.05),但随着GLP-1受体激动剂浓度升高,细胞增殖程度降低(P<0.05),低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖能力最强。(2)艾塞那肽不同浓度处理后各组AKP活力增加(P<0.05),而且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)升高AKP活力最明显(P<0.05)。结论艾塞那肽能促进人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖及成骨分化,且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖分化能力最强。

甲状腺激素对成骨样MG-63细胞甲状腺激素受体不同亚型表达的影响

目的 检测人类成骨样细胞MG-63中甲状腺激素受体（TR）的表达情况以及甲状腺激素（T3或T4）对其的影响.方法 用实时荧光定量PCR法对MG-63细胞中TR的主要4个亚型,α1、α1、β1、β2的mRNA表达进行了测定.结果 TRα1 mRNA的表达水平最高,为10.70±0.45;TRβ1仅及其半,为5.75±0.10;TRβ2不低,相当于TRβ1的60%,为3.34±0.08;TRα2的表达极低,仅为（3.66±0.59）×10-2.分别加入不同浓度的T3或T4,仅TRα1和TRα2对T3表现明显的降调节,且TRα1和TRα2的表达与相应T3浓度之间负相关,其他亚型无显著性变化,也无相关关系;同样浓度范围的T4作用各亚型,表达均无显著性变化.结论 在骨细胞发育分化中TRα1起关键作用.

成骨样细胞MG-63中的甲状腺激素受体Ⅰ——细胞核可溶性甲状腺激素受体与激素（T3）结合的动力学

建立人类成骨样细胞系MG-63中甲状腺激素受体的结合实验的方法，测定受体动力学参数。体外培养MG-63细胞，制备细胞核提取液，对其细胞核提取物中的甲状腺激素受体与激素（主要是T3）结合的动力学进行了Seatchard分析。MG-63细胞核内存在高亲和力（Ka为7．68×10^9L／mol）和有限结合容量的甲状腺激素受体，最大结合容量为（111．25±10．73）fmol／mg蛋白。建立了一个简易的自培养细胞制备纯净细胞核的方法，为进一步研究成骨样细胞及骨组织中的甲状腺激素受体奠定基础。

硫酸钙对成骨样MG-63细胞增殖及骨保护素/核激活因子受体配体/核激活因子受体系统的影响研究

目的探讨硫酸钙对成骨样MG-63细胞增殖情况及骨保护素/核激活因子受体配体/核激活因子受体(OPG/RANKL/RANK)系统的影响。方法制作硫酸钙浸提液,将含有硫酸钙浸提液的细胞培养基设为硫酸钙组,不含硫酸钙的普通细胞培养基设为空白对照组,分别培养成骨样MG-63细胞24 h。观察两组细胞的生长情况,通过细胞增殖实验(CCK-8)检测细胞的增殖活性,并检测OPG/RANKL的mRNA和蛋白表达水平。结果硫酸钙组和空白对照组成骨样MG-63细胞的生长情况均较好。在CCK-8增殖试验中,硫酸钙组与空白对照组的吸光度值分别为0.997±0.008、0.640±0.003,差异有统计学意义(P<0.001)。硫酸钙与空白对照组OPG的mRNA相对表达量分别为2.834±0.176、1.005±0.102;RANKL的mRNA相对表达量分别为0.355±0.035、1.002±0.068,差异均有统计学意义(P<0.001)。蛋白质免疫印记结果显示:与空白对照组相比,硫酸钙组中的硫酸钙能促进成骨样MG-63细胞OPG的蛋白表达,并抑制RANKL的蛋白表达。结论硫酸钙能促进成骨细胞样MG-63细胞的增殖与活性,并可调控OPG/RANKL/RANK系统,具有一定的促骨形成作用。

舒肝健骨方对成骨样细胞增殖分化的影响及雌激素活性的检测

目的:观察舒肝健骨方对成骨样细胞增殖分化的影响,并检测舒肝健骨方是否有雌激素活性。方法:培养成骨样细胞MG-63,给予不同浓度的舒肝健骨方处理后,MTT法检测复方对MG-63细胞增殖的影响;对硝基苯酚法检测复方对MG-63细胞碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。培养MCF-7细胞,转染萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶质粒,双荧光素酶报告基因检测试剂检测复方雌激素活性。结果:舒肝健骨方在处理MG-63细胞48,72 h时,0.75～12 g·L-1的剂量能促进成骨样细胞增殖,并且呈现剂量依赖性;在作用24,48,72 h时,促进成骨样细胞碱性磷酸酶活性,呈剂量依赖性。舒肝健骨方的雌激素活性与阴性对照相比无统计学差异,与阳性对照雌二醇相比有显著性差异(P<0.05)。结论:舒肝健骨方能够促进成骨样细胞的增殖分化,并且无雌激素活性。