广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒感染的分子流行病学研究

目的了解广州某医院秋冬季儿童腹泻中人类杯状病毒(HuCV)感染的分子流行病学特点。方法连续2个秋冬季腹泻流行季节收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本。采用ELISA检测轮状病毒,RT-PCR检测HuCV。部分阳性标本PCR产物进行纯化、测序,结合参考株相应核苷酸序列进行进化分析。结果诺瓦克样病毒(Norwalk-likevirus,NLVs)阳性率为12.35%(80/648),扎幌样病毒(Sapporo-likevirus,SLVs)阳性率为0.31%(2/648)。NLVs各月阳性率无显著性差异,主要感染2岁以下患儿。2003年流行株为GⅡ-3群和GⅡ-4群,2004年为GⅡ-4群。2株SLVs均为GⅠ-1群。结论NLVs是广州地区秋冬季节儿童腹泻的重要病原体,其流行株为GⅡ-3群、GⅡ-4群病毒株,但在不同的时间段可能存在不同的流行优势株;广州地区存在SLVs所致感染,与我国报告的SLV基因型不同。

2009—2010年南京地区腹泻婴幼儿中人类杯状病毒感染流行病学特点分析

目的 研究南京地区5岁及以下腹泻患儿人类杯状病毒感染的分子流行病学特点。方法2009年7月至2010年6月在南京儿童医院共采集1-59个月的腹泻患儿粪便标本300份，采用多重RT-PCR方法检测人类杯状病毒（诺如病毒、札如病毒）。结果300份标本中71份检出人杯状病毒，检出率23．67％。其中，诺如病毒67份，其中58份为GⅡ／4基因型（2006b亚型），8份为GⅡ／3基因型，1份为GⅡ／12基因型；扎如病毒4份，其中2份为GⅠ／1基因型，GⅠ／2和GⅡ／1基因型各1份。结论人类杯状病毒是南京地区腹泻婴幼儿中的主要病原体之一，主要的流行优势株是诺如病毒GⅡ／4基因型（2006b亚型）

深圳地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及基因型分析

目的了解深圳地区婴幼儿人类杯状病毒（HuCV）感染状况和对HuCV阳性病毒株进行基因型分析。方法采集连续二个秋冬季腹泻流行期间来深圳儿童医院就诊的临床检验已排除寄生虫、细菌性腹泻和轮状病毒检测结果为阴性的3岁以下腹泻患儿粪便标本226份，应用分型引物RT—PCR法检测HuCV的诺如病毒（norovirus，NoV）GⅠ和GⅡ群和扎如病毒（sappovirus，SaV），扩增产物通过1．5g／d1琼脂糖凝胶电泳鉴定。部分阳性标本测序，结合GenBank参考株相应核苷酸序列进行进化和型别流行特点分析。结果HuCV阳性率11．06％（25／226），其中NoV阳性率10．62％（24／226），saV阳性率0．44％（1／226），检测出NoV阳性株GⅡ／4群18株，GⅡ／3群5株，1株尚不能确定所属群（占4．17％，]／24）。1株Sav为SGⅡ／1群。7月～24月龄为NoV高发年龄段。结论HuCV是深圳地区婴幼儿冬季腹泻的重要病原体之一，流行株为NoV的GⅡ／4群，同时，还发现SaV的SGⅡ／1群存在。

75例人类杯状病毒肠炎患儿CK-MB检测结果分析

目的探讨人类杯状病毒(HuCV)性肠炎患儿CK-MB的改变及其意义。方法对75例人类杯状病毒性肠炎患儿做肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定,与同期非HuCV性肠炎患儿的婴幼儿进行对比分析。结果75例中68例(90.7%)CK-MB明显升高,两组比较差异均有高度显著性(P<0.01)。结论HuCV感染可以引起心肌损害,故在治疗时应作CK-MB的监测。

人类杯状病毒的流行病学研究进展

杯状病毒科的诺瓦克样病毒和扎幌样病毒两个属主要感染人 ,合称为人类杯状病毒 ( Hu CV) ,Hu CV毒株间具有很大的抗原和遗传学多样性。随着诊断技术的改进 ,对 Hu CV疾病负担有新的估计 ,它是仅次于轮状病毒引起非菌性腹泻的重要病原。本文简要综述 Hu CV流行病学研究的一些进展。

人类杯状病毒的研究进展

随着检测手段的进步和分子生物学技术的发展 ,人类杯状病毒 (Hu CVs)的重要性和危害性逐渐得以认识。本文就目前 Hu CVs的研究进展和进一步的研究方向作一综述。

广州地区贝类中人类杯状病毒感染调查研究

从2007年10月-2009年9月，在广州市水产品市场收集127个牡蛎、94个毛蚶、342个花蛤、265个带子，采用荧光定量PCR方法检测人类杯状病毒HuCV的感染，旨在为贝类的安全监控提供基础研究资料。研究结果表明：牡蛎的HuCV阳性检出率最高，为24.4l％（31／127）；毛蚶和带子样品中HuCV，4-阳性率分别为11．70％（11／94）和1．89％（5／265）；而花蛤中未检出HuCV。牡蛎中存在着人类杯状病毒不同基因型的混合感染。结果还显示贝类中的HuCV感染一般在秋冬季节流行：在2007年10月～2008年2月和2008年10月-2009年2月期间，牡蛎中HuCV总检出率分别为23．08％（12／52）和35．85％（19／53）；而在2008、2009年的3月～9月间，牡蛎中均未发现HuCV感染。

分子生物学方法在人类杯状病毒诊断和分型中的应用

人类杯状病毒 (Hu CVs)是引起急性胃肠炎的主要病原之一。自 1990年 NV全基因克隆测序以来 ,相继建立了多种新的诊断方法 ,为灵敏、特异而又简便地检测 Hu CVs感染开辟了新途径。本文主要就分子生物学方法在人类杯状病毒诊断和分型中的应用作一综述。

济南地区婴幼儿腹泻病杯状病毒的流行特征

目的阐明山东济南地区婴幼儿腹泻中杯状病毒感染的流行状况及其特征。方法收集济南市儿童医院婴幼儿病毒性腹泻粪便标本,使用杯状病毒特异性引物对标本进行RT-PCR检测。将杯状病毒阳性PCR产物纯化后,进行克隆和序列分析,使用BioEdit和MEGA软件与GenBank中的参考株进行核苷酸序列同源性分析并绘制系统进化树。结果在212例病毒性腹泻标本中,杯状病毒RT-PCR阳性62例,检出率为29.25%。经序列分析,所有杯状病毒均为诺如病毒基因组Ⅱ型。结论杯状病毒是山东地区婴幼儿腹泻病的主要病原之一,目前以诺如病毒基因组Ⅱ型毒株流行为主。

检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立

诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一。为加强其控制，通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针，建立了TaqMan Real-time RT-PCR方法。结果显示，此方法对诺如病毒核酸检测高度特异，与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应，最低检出限可达10^2拷贝，线性范围为100～100拷贝，标准曲线的相关系数为-1．00。针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0．28％～1．63％（n=6）、批间实验为0．28％～1．05％（n=3），对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录，其变异系数为3增8％。对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测，发现后者检出率略高于前者。这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测。

某高校不同地域学员诺如病毒抗体阳性水平的调查研究

目的拟初步了解NVs感染在我国是否普遍存在,以丰富NVs感染的流行病学信息。方法利用酶联免疫吸附试验检测不同省份学员血清中的诺如病毒rNV、rMX和r387特异性IgG抗体水平。结果来自于22个省、直辖市、自治区的学员血清中均检出rNV、rMX和r387IgG抗体。不同地域学员rNV、rMX和r387 IgG抗体阳性率,仅rMX抗体阳性率在不同地域间有显著性差异。结论我国在广泛的空间存在NVs的感染,NVs抗体阳性率与不同地区的社会经济及生活卫生条件有关,不同的基因型的NVs可能在我国的分布有所不同。

广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析

目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染。方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较。结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLV GⅠ-1群。结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型。

一起家庭聚集性诺瓦克样病毒感染的调查

目的 :调查一起家庭聚集性非菌性腹泻病原、传播途径、临床表现以及病原学特性 .方法 :感染者腹泻粪便及其可疑食物采用RT PCR方法检测 ,并测序 .结果 :患儿、患儿父亲、患儿外公粪便标本及蟹肉标本均扩增出NLVs目的片断 ,测序分析表明该四份标本同源性为 1 0 0 % .结论 :证实该起家庭聚集性非菌性腹泻为诺瓦克样病毒感染所致 ,并在食物中检测到诺瓦克样病毒 。

诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR的研究

目的建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法,为疾病预防控制提供可靠的依据。方法根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅰ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系,优化反应条件,评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性,并与常规RT-PCR比较。结果诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短,仅1h就出结果,与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应,最低检出下限为100拷贝/反应,比常规RT-PCR灵敏100倍,5份浓度不同的诺如病毒遗传组Ⅰ型标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围为0.39%～1.02%。结论诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏、重复性好,可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组Ⅰ型监测,提高快速检测能力。

两株诺瓦克样病毒新亚型的鉴定

目的对在广州检出的人类杯状病毒(HuCVs)毒株进行分子生物学鉴定,以确定其是否为新亚型。方法选择检出的HuCVs进行克隆、转化和序列分析,使用PHYLIP进行核酸序列同源性比较,经Treeview1.5绘制进化树。结果206份病毒性腹泻标本检出HuCVs18份,检出率为8.74%(18/206),经序列分析证实均为NVs GⅡ毒株。任选其中6株进行PCR产物的克隆和测序,与GenBank中的参考株比较并绘制遗传进化树,其中HuCV/NVGⅡ003/2003/CHN(32282)、HuCV/NVGⅡ004/2003/CHN(32283)与基因文库中病毒的最高同源性分别为83%和87%。结论广州存在其他国家或地区没有报道过的诺瓦克样病毒新亚型毒株。

某市一起诺如病毒引起多个旅游团暴发感染性腹泻的调查

2015年7月7日至2015年7月9日,本市疾病预防控制中心陆续收到8个旅游团队出现疑似食物中毒事件,根据病例临床表现,流行病学特征和实验室检测结果,该疫情初步判定为诺如病毒G2引起的感染性腹泻暴发。现将结果报道如下。1流行病学调查1.1基本情况2015年7月7日至2015年7月9日,本市疾病预防控制中心陆续收到8个旅游团队出现疑似食物中毒事件,累计发生急性胃肠炎病例共103例,均以恶心、呕吐、腹痛、

诺如病毒研究进展

1 病原学 该病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市的一次急性腹泻爆发的患者粪便中分离得到的病原，当时被命名为诺瓦克病毒。此后，世界各地陆续自胃肠炎患者粪便中分离出多种形态与之相似但抗原性略异的病毒样颗粒，均以发现地点命名，后称为诺瓦克样病毒（Norwalk-like virus NLV），直至2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus NV）。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Viruss LV）合称为人类杯状病毒（Calicivirus）。