新疆维、汉妇女宫颈癌人类染色体端粒酶基因的研究

目的:探讨维吾尔族(维族)、汉族妇女宫颈癌在感染HPV高危亚型之后,其致癌机制——人类染色体端粒酶(TERC)基因扩增的特点及差异性。方法:采用荧光原位杂交技术(FISH)检测23例维吾尔族和22例汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增的情况。结果:23例维吾尔族宫颈癌患者TERC基因扩增率为86.96%,22例汉族宫颈癌TERC扩增率为90.90%。随着临床分期增高,维吾尔族、汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增均无明显增加。维吾尔族、汉族宫颈癌在HPV各亚型感染之间,TERC基因平均扩增倍数差异无统计学意义。维吾尔族宫颈癌总的TERC基因扩增倍数与汉族差异有统计学意义,主要与维吾尔族宫颈癌患者中多重感染的比率高于汉族宫颈癌有关。结论:TERC基因的扩增在维、汉族宫颈癌的发生中均为早期事件。维吾尔族宫颈癌患者中多重HPV高危亚型感染比例较高,导致TERC基因扩增明显,可能是维吾尔族宫颈癌发病率高于汉族的原因之一。

宫颈病变中人类染色体端粒酶基因与高危型人乳头瘤病毒感染相关性研究

目的应用荧光原位杂交技术(FISH)探讨宫颈病变中人类染色体端粒酶(hTERC)基因的异常扩增情况及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染在宫颈病变中的关系。方法对115例宫颈疾病患者,以病理检查为"金标准",根据宫颈活检病理诊断结果将其分为4组:对照组(包括宫颈组织正常及宫颈炎症)、宫颈上皮内瘤样变(CIN)Ⅰ组、CINⅡ～Ⅲ组和宫颈浸润癌组,对患者宫颈分泌物分别进行HPV杂交捕获Ⅱ代(HPV-HC2)检测、FISH检测。结果 (1)hTERC基因在对照组、CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ组和宫颈浸润癌中组的扩增率分别为21.1%、86.7%、93.8%和100.0%。宫颈浸润癌组、CINⅠ组和CINⅡ～Ⅲ组hTERC基因扩增率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)83例HPV阳性患者中,hTERC基因扩增率为91.6%(76/83),32例HPV阴性患者中,hTERC基因扩增率为43.7%(14/32),差异有统计学意义(P<0.05)。(3)hTERC基因扩增与HPV阳性率的相关系数为0.520,两种检测方法有很好的一致性,hTERC基因检测总体评价高于HPV-HC2的检测。结论 hTERC基因的扩增与宫颈病变程度及HPV感染呈正相关,其扩增提示CIN有恶性进展潜能,其扩增情况可作为CIN病情进展的预测指标。

三分之一以上的人类染色体由RNA调控

发表于1月14日的《细胞》(Cell)期刊中的一项由Whitehead学院进行的生物医学研究推翻了多年来的科学观点，之前科学家们认为DNA和蛋白质在基因组研究中，被视为是真正的行动者，RNA只被视为蛋白质和DNA之间的信息传递者。但是这项新研究结果却发现，小的RNA分子microRNAs，可以调控数以万计的人类基因，超过三分之一的蛋白质编码之基因组。

正反义人端粒酶RNA组分(hTR)逆转录病毒真核表达载体的构建

端粒的功能是完成染色体末端的复制,防止染色体免遭融合、重组和降解,其长度的维持是细胞永生化及恶性转化的重要分子基础,而调控端粒长度的关键分子则是端粒酶.端粒酶的重新表达在细胞永生化及癌变过程中起着重要的作用.端粒酶RNA(hTR) 作为端粒酶的组成部分决定着端粒的重复序列并参与端粒酶的活化.本研究将反义端粒酶RNA基因插入到逆转录病毒质粒载体PLXSN中,构建真核表达重组质粒PLXSN-hTR,以期重组质粒表达反义端粒酶RNA,从复制、转录、及翻译三个水平发挥作用,调控肿瘤细胞的端粒长度和端粒酶的活性,抑制或逆转肿瘤细胞的恶性表型,为研究和探索基因治疗肿瘤奠定基础.

人端粒酶RNA组份基因与宫颈病变的研究进展

现代细胞遗传学和分子生物学研究表明,人类大多数实体肿瘤细胞常表现为染色体不稳定性,即染色体数目的改变和结构异常。宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中,涉及到最重要的基因可能是人类染色体端粒酶基因(hTERC基因,位于3q26.3)。该基因的扩增可阻止细胞凋亡,因而可导致肿瘤产生。现就近年hTERC基因的研究进展作一综述。

靶向于端粒酶调控区反义RNA腺病毒的构建

目的:构建靶向于人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)调控区的反义RNA腺病毒。方法:PCR扩增hTERT调控区1779bp的DNA片段,与腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV连接,PCR筛选反向插入的hTERT反义腺病毒穿梭载体pCMV-ashTERT,将pCMV-ashTERT与骨架质粒pAdEasy-1共转染受体菌BJ5183,进行同源重组。用含卡那霉素的LB平板筛选同源重组阳性的克隆,酶切鉴定后,以PacⅠ酶切线性化,转染包装细胞HEK293,在显微镜下观察细胞形态以鉴定重组的腺病毒,并以空斑形成实验测定重组病毒的滴度。结果:成功构建了端粒酶催化亚单位调控区的反义RNA重组腺病毒(pAd-ashTERT),滴度为2.8×1011pfu/ml。结论:成功构建hTERT调控区反义腺病毒,为探讨以端粒酶为靶点的抗肿瘤药物奠定了基础。

端粒酶RNA生物发生机制

端粒酶是一种逆转录酶，它可以使用其部分RNA作为模板来合成端粒重复单元。在大多数真核生物，染色体末端DNA的逐步丢失会被端粒酶所抑制。许多癌细胞表达出高端粒酶活性，端粒酶亚基的突变与退行性综合症有关。因此，改变端粒酶活性具有重要的治疗价值。

宫颈液基细胞学端粒酶基因扩增检测的意义

目的探讨人类染色体端粒酶(hTERC)基因在宫颈不同上皮内病变中的扩增情况及差异性,为临床治疗宫颈疾病提供依据。方法收集液基细胞学(LCT)剩余液体121例。经活检证实,正常或良性病变30例、CIN158例、CIN218例、CIN36例、浸润性鳞癌9例。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈脱落细胞内hTERC基因扩增情况。结果 hTERC基因在不同病例中扩增率分别为:正常或良性病变6.67%(2/30);CIN122.41%(13/58);CIN272.22%(13/18);CIN3100%(6/6);鳞癌100%(9/9)。随着病变级别的增高,TERC基因扩增率不断升高。正常及CIN1者hTERC基因扩增率显著低于CIN2及CIN2以上者(P<0.01)。CIN2以上病变hTERC基因扩增敏感度为84.85%,特异度为93.34%。结论在宫颈的不同上皮病变中都有可能发生TERC基因的扩增,且随着病变程度的加重基因扩增发生率升高。

关于端粒酶研究:结果与问题

端粒酶是一种由RNA和蛋白质构成的复合结构,在活性状态下端粒酶可以其自身的RNA中的内设模板区为模板,以逆转录方式为染色体末端“加尾”。端粒酶活性的恢复是动物克隆成功的关键因素之一。但是,端粒酶活性恢复机制、端粒酶基因表达调控信号及端粒酶活性与衰老体细胞中染色体端粒恢复的关系等问题还有待研究解决。

端粒及端粒酶与头颈部肿瘤

基因调节失控以及信号分子错导均可以导致正常细胞反常生长,发展成为肿瘤。近年研究发现,端粒酶的表达以及由此产生的稳定的端粒在肿瘤演进中可能起了重要作用。本文就近年有关端粒及端粒酶与头颈部肿瘤关系研究的最新进展作一简述。 1 端粒及端粒酶的结构和功能端粒位于真核染色体的末端,参与DNA复制、染色体位移及维持染色体的稳定性。

新疆维吾尔族、汉族妇女宫颈病变人类染色体端粒酶基因扩增与人乳头瘤病毒感染相关性研究

目的:探讨新疆地区维吾尔族(维族)、汉族妇女宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(human telomerase gene,hTERC)的表达差异及其与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)高危亚型感染的相关性。方法:采用荧光原位杂交技术,比较50例维族和52例汉族宫颈病变患者hTERC基因扩增情况,同时检测HPV感染情况。结果:维族宫颈病变患者hTERC基因扩增率为62.00%,汉族宫颈病变hTERC基因扩增率为51.92%。随病变进展,维、汉族宫颈病变患者hTERC基因扩增均明显增加。维、汉族宫颈癌hTERC基因平均扩增倍数,在HPV各亚型感染组间差异无统计学意义(P>0.05),但在HPV多重感染和单一感染间差异有统计学意义(P<0.05)。维族宫颈病变总hTERC基因扩增倍数与汉族差异有统计学意义(P<0.05)。结论:hTERC基因扩增与高危型HPV感染有关,可能是宫颈癌进展的预测指标;多重HPV高危亚型感染可能是维族宫颈癌发病率高的原因之一。

哺乳动物发育中的端粒酶活性研究进展

端粒位于真核生物染色体末端,它对维持染色体结构具有非常重要的意义。端粒酶能够以自身的RNA序列为模板反转录合成端粒的重复DNA序列,对端粒长度的维持以及哺乳动物的生长发育具有重要的作用。本文主要对端粒和端粒酶的结构和功能,以及它们在哺乳动物发育过程中的重要作用进行阐述。

人类染色体端粒酶基因检测在子宫颈病变筛查中的研究进展

在子宫颈上皮内瘤变（CIN）进展为浸润性子宫颈癌的过程中，人类染色体端粒酶（hTERC）基因扩增随子宫颈病变的不同阶段而变化，并且对于子宫颈病变的早期诊断及子宫颈癌发展的监测具有重要的临床价值。hTERC基因有望成为子宫颈高危病变筛查的一种有效的特异标志物。

端粒,端粒酶的研究及其在恶性肿瘤中的应用

自从1985年Greider等从纤毛四膜虫中发现了端粒以来,人们渐对其结构、功能及重要性有了较深的了解。特别是1989年Morin首先在人宫颈癌Hela细胞中检测到端粒酶活性后,越来越多的报道称:端粒酶与恶性肿瘤有关。因此端粒酶作为广谱的肿瘤特异性标记物用于肿瘤的诊断,以及其抑制剂用于肿瘤的治疗已成了近来肿瘤分子生物学领域中最热门的研究课题之一。

人染色体端粒酶RNA基因、人乳头状瘤病毒、薄层液基细胞学检查联合检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的探讨联合应用hTERC、HPV检测及液基细胞学检查在宫颈癌筛查中的应用价值。方法收集2013年1月-2016年6月因宫颈疾病接受TCT检查的280例患者,进行高危HPV感染检测、hTERC基因扩增FISH检测及阴道镜下病理活组织检查,以病理学结果为金标准,将患者分为5组:炎症组(非CIN)、CIN1组、CIN2组、CIN3组和浸润癌组。比较TCT、hTERC、HPV检测在CIN筛查中的价值。结果 5组TCT检查与病理学结果吻合率分别为90.9%、59.6%、70.5%、66.7%及80.0%;炎症组高危HPV感染率低于CIN组,差异有统计学意义(P<0.01),CIN组与宫颈浸润癌组差异无统计学意义(P>0.05);hTERC基因扩增率高级别CIN组及浸润癌组明显高于低级别CIN组;联合应用3种检测手段灵敏度和特异度最高,分别为98.5%和92.3%。结论 3种方法联合检测优于单一方案,可以极大地提高宫颈癌高度病变的检出率。

宫颈病变组织中人类染色体端粒酶基因表达与人乳头瘤病毒亚型感染相关分析

目的探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(human telomerase RNA component,hTERC)的表达及人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型感染情况,及其在宫颈癌筛查中的意义。方法宫颈病变患者宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I组41例、CINⅡ组29例、CINⅢ组35例及宫颈癌组(SCC组)24例,并选择同期体检健康者20例为对照组,各组均行宫颈液基细胞学检查及HPV DNA检测,并采用荧光原位杂交技术检测hTERC基因扩增情况。结果 hTERC表达阳性率CINⅠ组(7.31%)、CINⅡ组(34.48%)、CINⅢ组(62.86%)及SCC组(75.00%)与对照组(0)比较差异均有统计学意义(P<0.05),CINⅢ组与SCC组高于CINⅠ组(P<0.05);hTERC表达阳性率与宫颈病变程度呈正相关(r=0.931,P=0.031);对照组、宫颈癌前病变组(CINⅠ组+Ⅱ组+Ⅲ组)与SCC组HPV DNA阳性率分别为15.00%,45.71%,87.50%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERC表达与高危型HPV感染呈正相关(r=0.381,P=0.002)。结论 hTERC扩增在宫颈高度病变及宫颈癌患者中比例较高,与高危型HPV感染有关,可能是宫颈癌进展的预测性指标。

反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用,探讨以端粒酶为靶点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中,转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒,感染结直肠癌HT29细胞。采用RT-PCR检测hTR表达,端粒酶重复扩增法(telomeraserepeatamplificationprotocol,TRAP)检测端粒酶活性,绘制生长曲线了解细胞生长状态,倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降,端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制,细胞出现凋亡。结论反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制作用,有可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。

miRNA-26a抑制ox-LDL介导的HAECs凋亡作用的机制研究

目的探究miR-26a在ox-LDL介导内皮细胞HAECs凋亡中的作用及其调控机制。方法采用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)在体外作用于HAECs细胞,噻唑蓝(MTT)和TUNEL染色检测ox-LDL作用HAECs后细胞的活性与凋亡率,定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ox-LDL作用HAECs后细胞中miR-26a的表达水平。在HAECs中过表达miR-26amimic,MTT和TUNEL染色检测ox-LDL作用后细胞的活性和凋亡率。构建荧光素酶报告载体pMIR-PTEN的3′UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR-26a的预测靶基因。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果 ox-LDL能够介导HAECs细胞的毒性死亡和细胞凋亡,并且降低了HAECs细胞中miR-26a的表达水平。过表达miR-26amimic能够抑制ox-LDL作用HAECs后细胞的毒性和凋亡。转染miR-26amimic显著抑制荧光素酶的活性(P<0.05)。转染miR-26amimic显著下调HAECs细胞中PTEN的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 miR-26a能够抑制抑制ox-LDL作用HAECs后细胞的毒性和凋亡,其可能的作用机制是下调了PTEN的表达。miR-26a可能成为治疗凋亡相关的动脉粥样硬化的潜在靶点。

RNA干扰下调hTERT表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的观察RNA干扰下调人类端粒酶反转录酶(h TERT)表达对宫颈癌He La细胞增殖及侵袭能力的影响。方法针对h TERT基因设计两对siRNA片段,瞬时转染人宫颈癌He La细胞;采用RT-PCR、Western印迹法检测转染后He La细胞h TERT在mRNA水平和蛋白水平的表达变化;PCR-TRAP法检测细胞端粒酶活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;transwell实验检测细胞运动侵袭能力。结果 RT-PCR及Western印迹法结果显示,h TERT-siRNA能有效下调h TERT在mRNA和蛋白水平的表达,抑制效率分别为(85.8±3.26)%、(97.5±3.72)%;RNA干扰下调h TERT基因表达后,He La细胞端粒酶活性抑制效率为75.5%,增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,处于G0/G1期细胞增多,由(58.18±3.76)%上升到(68.97±4.01)%(P<0.05);未处理组细胞凋亡(4.14±0.79)%,h TERT-si-RNA组细胞凋亡(8.1±1.22)%,细胞凋亡率增加(P<0.05)。transwell实验检测结果显示,细胞运动侵袭能力下降约30%(P<0.05)。结论 h TERT-siRNA可有效下调h TERT在人宫颈癌He La细胞中的表达,抑制He La细胞生长并降低其侵袭能力。